于宗琴，李子靜，唐敏芳，趙海鵬

(1山東醫(yī)學(xué)高等專(zhuān)科學(xué)校，山東 臨沂 276000；2濰坊市檢驗(yàn)檢測(cè)中心，山東 濰坊 261000)

醋酸阿比特龍是一種口服CYPl7-A1抑制劑，可與潑尼松聯(lián)合使用治療轉(zhuǎn)移性去勢(shì)抵抗性前列腺癌(CRPC)[1]。其合成路線(xiàn)有多種，大多以去氫表雄酮為起始原料，經(jīng)縮合、取代、偶聯(lián)、酯化等五步反應(yīng)制得，使用的有機(jī)溶劑有乙醇、乙醚、乙酸乙酯、四氫呋喃、正己烷、甲醇、二氯甲烷、叔丁基甲基醚等八種[2-5]。這些溶劑大多屬于二類(lèi)或三類(lèi)殘留溶劑，對(duì)人體有一定的危害。為了控制這些殘留溶劑的量，本文采用氣相色譜法對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料

1.1儀器 Agilent 6890型氣相色譜儀(安捷倫科技有限公司)，氫火焰離子化(FID)檢測(cè)器及色譜工作站，Agilent G1888自動(dòng)頂空進(jìn)樣器；XS205型十萬(wàn)分之一電子分析天平(瑞士Mettler-Toledo公司)。

1.2試藥 醋酸阿比特龍(批號(hào)分別為190501、190502、190503，由本校藥物化學(xué)教研室提供，含量均大于99.0%)；甲醇(批號(hào)：65310081612，純度≥99.9% GC)、乙醇(批號(hào)：K50447027832，純度≥99.5% AR)、乙醚(批號(hào)：20181121，純度≥99.7% AR)、二氯甲烷(批號(hào)：1901051，純度≥99.5% AR)、叔丁基甲基醚(批號(hào)：1749345435，純度≥99.8% GC)、正己烷(批號(hào)：SZBD3390V，純度≥99.5% GC)、乙酸乙酯(批號(hào)：171016391F，純度≥99.5% AR)、四氫呋喃(批號(hào)：I0970101839，純度≥99.5% GC)。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件 色譜柱型號(hào)DB-624，固定相為6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷，程序升溫：起始溫度為40℃，維持10 min，以25℃/min的速率升溫至200℃，維持8 min；進(jìn)樣口溫度200℃；檢測(cè)器為FID，溫度250℃；載氣為高純氮?dú)?，柱流速?.5 ml/min；分流比為20:1；頂空瓶平衡溫度為70℃，平衡時(shí)間為30 min。

2.2溶液的制備

2.2.1對(duì)照品溶液 精密稱(chēng)取甲醇、乙醇、乙醚、二氯甲烷、叔丁基甲基醚、正己烷、乙酸乙酯、四氫呋喃適量，用空白溶劑(80% N,N-二甲基甲酰胺水溶液，以下相同)稀釋制成每1 ml中約含甲醇1.5 mg、乙醇2.5 mg、乙醚2.5 mg、二氯甲烷0.3 mg、叔丁基甲基醚2.5 mg、正己烷0.145 mg、乙酸乙酯2.5 mg、四氫呋喃0.36 mg的混合溶液作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液1 ml，置10 ml量瓶中，用空白溶劑稀釋至刻度，搖勻即得對(duì)照品溶液。

2.2.2供試品溶液 取醋酸阿比特龍約適量，精密稱(chēng)定，加入空白溶劑制成濃度為50 mg/ml的溶液，作為供試品溶液。

2.3系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 分別精密量取2 ml對(duì)照品溶液、供試品溶液、空白溶劑置于頂空瓶中，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣檢測(cè)，記錄色譜圖。結(jié)果顯示，各待測(cè)殘留溶劑之間的分離度均大于1.5，實(shí)現(xiàn)了基線(xiàn)分離，理論板數(shù)按照甲醇計(jì)算為21591，完全符合要求。

A

B圖1 對(duì)照品 (A)與供試品(B)溶液色譜圖A圖：從左向右依次是甲醇、乙醇、乙醚、二氯甲烷、叔丁基甲基醚、正己烷、乙酸乙酯、四氫呋喃

2.4線(xiàn)性關(guān)系考察 分別準(zhǔn)確量取對(duì)照品儲(chǔ)備液20、15、10、5、3、2 ml至100 ml容量瓶中，用空白溶劑稀釋至刻度，制成一系列濃度的對(duì)照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，進(jìn)樣檢測(cè)，記錄色譜圖，測(cè)定峰面積，以對(duì)照品濃度(C，μg/ml)為橫坐標(biāo)、峰面積(A)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，計(jì)算得回歸方程。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 8種殘留溶劑的線(xiàn)性關(guān)系和定量限(μg/ml)

2.5精密度試驗(yàn) 精密量取“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液2 ml，重復(fù)頂空進(jìn)樣10次，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定峰面積。結(jié)果甲醇、乙醇、乙醚、二氯甲烷、叔丁基甲基醚、正己烷、乙酸乙酯、四氫呋喃峰面積的RSD分別為0.98%、1.03%、0.87%、1.04%、1.11%、0.95%、0.99%、1.18%，表明儀器精密度良好。

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密量取“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液適量，分別于室溫下放置0、1、2、4、6 h，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果甲醇、乙醇、乙醚、二氯甲烷、叔丁基甲基醚、正己烷、乙酸乙酯、四氫呋喃峰面積的RSD分別為1.25%、1.44%、1.05%、1.72%、1.28%、1.36%、1.22%、1.24%(n=6)，表明供試品溶液在室溫下放置6 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7檢測(cè)限和定量限 吸取“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液，用空白溶劑逐級(jí)稀釋?zhuān)础?.1”項(xiàng)下的色譜條件，按基線(xiàn)噪音峰的3倍計(jì)算檢測(cè)限，10倍計(jì)算定量限，結(jié)果見(jiàn)表1。

2.8回收率試驗(yàn) 采用加樣回收方法測(cè)定。分別精密稱(chēng)取9份阿比特龍樣品(批號(hào)：190501)，每份約0.1 g，置10 ml頂空瓶中，各加入相當(dāng)于“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液質(zhì)量濃度80%、100%、120%的溶液各2 ml(每個(gè)質(zhì)量濃度3份)，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見(jiàn)表2。

(續(xù)表)

2.9樣品測(cè)定 精密稱(chēng)取3批醋酸阿比特龍樣品0.1 g(批號(hào)：190501、190502、190503)，置10 ml頂空瓶中，精密加入空白溶劑2.0 ml，混勻，密封，按上述條件頂空進(jìn)樣，記錄色譜圖和峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算3批樣品的殘留溶劑量。結(jié)果見(jiàn)表3。

3 討論

醋酸阿比特龍?jiān)谟袡C(jī)溶劑如二氯甲烷、四氫呋喃中溶解性很好，幾乎不溶于水，本方法選用80% N,N-二甲基甲酰胺的水溶液作為空白溶劑，可以很好地溶解樣品，同時(shí)不干擾樣品中殘留溶劑的檢測(cè)。本方法采用頂空進(jìn)樣法，對(duì)微量的殘留溶劑也能很好的檢測(cè)，樣品分析時(shí)間約20 min，分離度、精密度、準(zhǔn)確度均能滿(mǎn)足要求，可作為控制醋酸阿比特龍?jiān)纤帤埩羧軇┑姆椒ā?/p>