黎凌鑠， 彭忠利， 陳仕勇， 柏 雪， 苗建軍

（西南民族大學(xué)畜牧獸醫(yī)學(xué)院，四川成都610041）

瘤胃作為反芻動(dòng)物特有的消化器官， 其主要特點(diǎn)就是棲居大量的微生物。 由于瘤胃內(nèi)有很多微生物（細(xì)菌、真菌、原蟲等）的存在，使得反芻動(dòng)物能夠更好利用高纖維的碳水化合物。 飼料在微生物的作用下， 進(jìn)行一系列的降解與吸收后所產(chǎn)生的氨、肽、氨基酸等作為氮源，飼料中的有機(jī)物發(fā)酵所產(chǎn)生的揮發(fā)性脂肪酸作為碳架， 腺嘌呤核苷三磷酸（ATP）作為能量共同合成菌體蛋白，產(chǎn)物可用來(lái)維持反芻動(dòng)物的營(yíng)養(yǎng)需求。研究表明，小肽是蛋白質(zhì)的一種存在形式， 能促進(jìn)氨基酸的吸收、提高蛋白質(zhì)的沉積、促進(jìn)礦物質(zhì)元素的吸收利用效率， 對(duì)瘤胃微生物有益菌群有加速繁殖的功效，縮短了細(xì)胞分裂周期，并提高微生物蛋白合成能力，增加抗病力（張瑞仙等，2012）。 在瘤胃中小肽可被微生物直接利用合成微生物蛋白（MCP）（王文娟等，2011）。 殷云浩等（2012）報(bào)道，飼糧中添加小肽能夠促進(jìn)瘤胃微生物的發(fā)酵， 提高揮發(fā)性脂肪酸（VFA）含量和MCP 產(chǎn)量，降低NH3-N濃度和乙/丙，提高能量利用率。 李琍（2000）通過(guò)檢測(cè)瘤胃菌群發(fā)酵產(chǎn)氣量、VFA 和MCP 含量3個(gè)主要指標(biāo)， 得出小肽能提高纖維分解菌的活力和粗纖維的分解。也有研究表明，酵母菌制劑對(duì)反芻動(dòng)物的瘤胃發(fā)酵有促進(jìn)作用， 可改善瘤胃乳頭的長(zhǎng)度、 寬度， 并使瘤胃壁的厚度得到提高。Chauchey 等（2001）在給無(wú)菌羔羊飼喂酵母培養(yǎng)物的試驗(yàn)中得知， 瘤胃內(nèi)纖維降解菌的定植速度加快，菌群穩(wěn)定性得到穩(wěn)固。 Pinloche 等（2013）在動(dòng)物體內(nèi)及模擬瘤胃發(fā)酵的體外技術(shù)中都證實(shí)，酵母菌制劑能穩(wěn)定瘤胃液的pH，降低瘤胃乳酸的濃度。 酵母菌制劑對(duì)瘤胃特殊菌群的促進(jìn)作用使微生物的生長(zhǎng)得到加強(qiáng)，發(fā)酵效果得到優(yōu)化，使很多被消化的糖類用于合成MCP， 降低了碳的數(shù)量，減少揮發(fā)性脂肪酸的生成，瘤胃酸中毒幾率降低（仲偉光等，2018）。 牦牛主要分布在高寒地帶，而牧草的生長(zhǎng)期有限， 冬春季節(jié)牧草生長(zhǎng)停滯處于枯草和缺草期，這個(gè)時(shí)期的牧草營(yíng)養(yǎng)價(jià)值較低，蛋白質(zhì)水平不足， 致使牦牛采食量下降、 體重減輕。 鑒于此， 本試驗(yàn)以低海拔舍飼育肥的方式對(duì)牦牛進(jìn)行飼養(yǎng)， 研究在日糧中添加小肽與酵母培養(yǎng)物對(duì)舍飼牦牛瘤胃微生物多樣性及發(fā)酵參數(shù)的影響，為舍飼牦牛育肥的可行性提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 時(shí)間與地點(diǎn) 試驗(yàn)于2017 年11 月至2018年4 月在四川省阿壩藏族羌族自治州茂縣茂欣農(nóng)牧業(yè)發(fā)展有限責(zé)任公司進(jìn)行。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物與飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)選取36 頭年齡為4 周歲左右、體重水平相當(dāng)、健康狀況良好的麥洼牦牛，隨機(jī)分為4 個(gè)處理組，每個(gè)處理組9 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)1 頭牛。試驗(yàn)場(chǎng)海拔1450 m，整個(gè)試驗(yàn)期內(nèi)圈舍最高溫25 ℃，最低溫5 ℃。 試驗(yàn)開始前對(duì)圈舍清理消毒， 牦牛進(jìn)圈后用伊維菌素注射液肌肉注射驅(qū)蟲，稱重分組后按組栓系飼養(yǎng)。預(yù)飼期30 d，試驗(yàn)期80 d，每日上午（8：00）和下午（16：00）各飼喂一次，自由采食、飲水。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 根據(jù)前期大量體外試驗(yàn)結(jié)果，綜合考慮體外發(fā)酵效果、 經(jīng)濟(jì)成本以及飼糧配方在牧區(qū)的可推廣性， 選用精粗比為5：5 的全混合日糧作動(dòng)物試驗(yàn)。對(duì)照組采用基礎(chǔ)的全混合日糧，試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組在全混合日糧基礎(chǔ)上分別添加1%酵母培養(yǎng)物、0.75%小肽和1%酵母培養(yǎng)物+0.75%小肽。 各組日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。

表1 日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平（干物質(zhì)基礎(chǔ)）

1.4 試驗(yàn)材料 試驗(yàn)中所采用的酵母培養(yǎng)物購(gòu)于美國(guó)國(guó)際生物營(yíng)養(yǎng)科技有限公司， 小肽購(gòu)于成都美溢德生物技術(shù)有限公司。

1.5 樣品采集及指標(biāo)檢測(cè)

1.5.1 瘤胃液采集 采用瘤胃口腔導(dǎo)管法采集瘤胃液（為盡量減少采樣誤差， 插管由同一人操作），用四層紗布過(guò)濾瘤胃液并分裝于4 個(gè)15 mL離心管和2 個(gè)5 mL 凍存管中，15 mL 離心管放于-20°C 保存，用于測(cè)定NH3-N、MCP、VFA。 5 mL凍存管放于液氮中保存， 用于測(cè)定瘤胃液細(xì)菌區(qū)系。

1.5.2 檢測(cè)指標(biāo) pH：牦牛屠宰后，立即用四層紗布過(guò)濾瘤胃內(nèi)容物，收集瘤胃液，使用PHB-5型便攜式pH 計(jì)測(cè)定瘤胃液pH。

NH3-N： 參照馮宗慈等 （2010） 的方法進(jìn)行NH3-N 測(cè)定， 取10 mL 瘤胃液4000 r/min 離心10 min， 取1 mL 上清液加1 mL 蒸餾水置15 mL玻璃管內(nèi)，加入8 mL 0.2 mol/L 鹽酸搖勻，取混合液0.4 mL 于玻璃管內(nèi)，分別加A 液（2 mL）、B 液（2 mL），漩渦振蕩搖勻靜置10 min，用721 型分光光度計(jì)在700 nm 波長(zhǎng)進(jìn)行比色。

VFA：參照曹慶云等（2006）揮發(fā)性脂肪酸檢測(cè)方法。瘤胃微生物細(xì)菌DNA 的提取及MiSeq 測(cè)序交由上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司進(jìn)行。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Microsoft Excel 進(jìn)行初步處理，然后用SPSS 24.0 統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行單因素方差分析， 用鄧肯氏法進(jìn)行多重比較，結(jié)果用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，P＞0.05 表示差異不顯著，P＜0.05 表示差異顯著，P＜0.01 表示差異極顯著。 瘤胃菌群相關(guān)分析數(shù)據(jù)在上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司I-Sanger 云平臺(tái)進(jìn)行。

2 結(jié)果與分析

2.1 測(cè)序基本數(shù)據(jù)分析 如表2 所示， 通過(guò)MiSeq 測(cè)序，20 個(gè)瘤胃液樣本共獲得1134617 條優(yōu)化序列，每個(gè)樣本平均產(chǎn)生56731 條，序列平均長(zhǎng)度為438.63 bp 左右。

表2 樣本測(cè)序數(shù)據(jù)結(jié)果

2.2 Alpha 多樣性分析 香農(nóng)指數(shù)和辛普森指數(shù)可反映瘤胃菌群的多樣性，香農(nóng)指數(shù)值越大，群落多樣性越高； 辛普森指數(shù)值越大， 群落多樣性越低。如表3 所示，各組的Alpha 多樣性指數(shù)無(wú)顯著差異（P＞0.05），從數(shù)值上看，對(duì)照組的香農(nóng)指數(shù)高于其他組，辛普森指數(shù)則低于其他組，說(shuō)明對(duì)照組的瘤胃菌群比其他組的多樣性低； 艾斯指數(shù)和趙氏指數(shù)可反映瘤胃菌群的豐富度， 各處理組沒有出現(xiàn)顯著的差異（P＞0.05），從數(shù)值上來(lái)看，以對(duì)照組的豐富度較好，其他組的豐富度逐漸降低，但其差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。各組樣本覆蓋率均在99%以上，說(shuō)明測(cè)序量合理，能夠很好地反映瘤胃中微生物的種類和結(jié)構(gòu)。

表3 添加小肽、酵母培養(yǎng)物對(duì)舍飼育肥牦牛瘤胃細(xì)菌群落Alpha 多樣性的影響

2.3 物種組成及差異分析 由圖1 可以看出，對(duì)照組、試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ組牦牛瘤胃中OTUs 總數(shù)分別為1381、1267、1326、1240， 對(duì)照組獨(dú)有53 個(gè)，Ⅰ組獨(dú)有26 個(gè)，Ⅱ組獨(dú)有21 個(gè)，Ⅲ組獨(dú)有37 個(gè)，四組共同擁有1083 個(gè)， 分別占四組OTU 總數(shù)的78.42%、85.48%、81.67%、87.34%， 結(jié)果表明飼喂小肽和酵母培養(yǎng)物的日糧牦牛瘤胃中OTU 組成有比較好的相似度。

經(jīng)過(guò)序列對(duì)比和注釋，20 個(gè)樣本共1687 個(gè)OTUs， 從物種分類水平上可分為19 個(gè)門、32 個(gè)綱、56 個(gè)目、97 個(gè)科、238 個(gè)屬、483 個(gè)種。 從門水平對(duì)添加小肽和酵母的牦牛瘤胃微生物物種組成的相對(duì)豐度分析。由表4 可以看出，相對(duì)豐度均在1%以上的門有4 個(gè)，分別為擬桿菌門、厚壁菌門、變形菌門和互養(yǎng)菌門， 其中對(duì)照組所占總菌的比例分別為50.72%、43.67%、2.25%、1.24%，Ⅰ組分別為56.52%、34.01%、 1.01%、2.66%，Ⅱ組分別為53.38%、40.14%、 1.02%、 2.30%， Ⅲ組分別為61.29%、33.92%、0.82%、2.86%。 在日糧中添加小肽與酵母培養(yǎng)物對(duì)舍飼牦牛瘤胃菌群中的變形菌門、螺旋體門、纖維桿菌門和Saccharibacteria存在顯著差異（P＜0.05），其他門之間差異不顯著。試驗(yàn)Ⅲ組變形菌門相對(duì)豐度顯著低于對(duì)照組水平，試驗(yàn)Ⅰ和Ⅱ組之間無(wú)差異；小肽和酵母培養(yǎng)物的添加提高了螺旋體門、 纖維桿菌門和Saccharibacteria的相對(duì)豐度，試驗(yàn)Ⅲ組的相對(duì)豐度均顯著高于對(duì)照組水平。

表4 添加小肽與酵母培養(yǎng)物對(duì)舍飼育肥牦牛瘤胃主要細(xì)菌豐度的影響（門水平） %

在屬水平上選取豐度前20 和具有差異性的菌屬做差異分析， 如表5 所示， 各組相對(duì)豐度在1%以上且占比在前五的屬有普雷沃氏菌屬、擬桿菌科的BS11 菌屬、理研菌科RC9 菌屬、克里斯滕森菌科的R7 菌屬、 疣微菌科NK4A214 菌屬；其中對(duì)照組所占比例分別為17.20%、8.24%、3.53%、2.69%、6.09%； Ⅰ組所占比例分別為22.46%、12.31%、7.23 %、4.40%、3.65%； Ⅱ組所占比例分別為20.75%、9.70%、4.95%、3.59%、5.28%； Ⅲ組所占比例分別為26.18%、14.55%、7.85%、4.41%、3.75%。 在日糧中添加小肽與酵母培養(yǎng)物對(duì)舍飼牦牛瘤胃菌群中的理研菌科RC9 菌屬、瘤胃球菌2 屬、 普雷沃氏菌科UCG-004 菌屬、 疣微菌科UCG-010 菌屬、帕匹桿菌屬、柔膜菌綱的RF9 菌屬存在顯著的差異（P＜0.05）， 其他菌屬間無(wú)差異。其中豐度前四的普雷沃氏菌1 屬、擬桿菌科的BS11 菌屬、理研菌科RC9 菌屬、克里斯滕森菌科R7 菌屬的相對(duì)豐度均隨著小肽與酵母培養(yǎng)物的添加而有所提高， 試驗(yàn)Ⅰ組各優(yōu)勢(shì)菌屬的相對(duì)豐度較對(duì)照組分別高出30.51%、49.51%、104.80%、63.84%， 試驗(yàn)Ⅱ組分別高出20.57%、17.84%、40.11%、31.73%； 試驗(yàn)Ⅲ組分別高出51.71%、76.58%、122.03%、61.62%，均以試驗(yàn)Ⅲ組相對(duì)豐度最高。試驗(yàn)Ⅲ組理研菌科RC9 菌屬、普雷沃氏菌科UCG-004 菌屬、疣微菌科UCG-010 菌屬和帕匹桿菌屬、 柔膜菌綱的RF9 菌屬的相對(duì)豐度顯著高于對(duì)照組水平，試驗(yàn)Ⅰ和Ⅱ組之間無(wú)顯著差異，差異屬中只有瘤胃球菌屬的相對(duì)豐度隨著小肽與酵母培養(yǎng)物的添加而降低，且差異極顯著（P＜0.01）。

表5 添加小肽與酵母培養(yǎng)物對(duì)舍飼育肥牦牛瘤胃主要細(xì)菌豐度的影響（屬水平）%

2.4 小肽與酵母培養(yǎng)物對(duì)舍飼牦牛發(fā)酵參數(shù)的影響 從表6 可以看出， 各試驗(yàn)組舍飼育肥牦牛的NH3-N、乙酸和丁酸均低于對(duì)照組水平，但未達(dá)到差異顯著的水平（P＞0.05），從小到大依次為Ⅲ組＜Ⅰ組＜Ⅱ組，NH3-N 水平較對(duì)照組分別降低 了10.49% 、9.6% 、5.02% ， 乙 酸 分 別 降 低15.92%、7.76%、4.15%。 試驗(yàn)Ⅱ組pH 和丙酸值與對(duì)照組差異不顯著， 試驗(yàn)Ⅰ和Ⅲ組之間差異不顯著。 試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組丙酸含量較對(duì)照組分別提高了15.89%、4.67%、22.66%； 乙/丙分別降低了20.28%、8.59%、31.33%。

表6 添加小肽與酵母培養(yǎng)物對(duì)舍飼育肥牦牛瘤胃發(fā)酵的影響

3 討論

3.1 測(cè)序基本數(shù)據(jù)分析 瘤胃菌群的測(cè)序深度是堿基總量與基因組大小的比值， 測(cè)序所帶來(lái)的錯(cuò)誤率會(huì)隨著測(cè)序深度及覆蓋度的提高而下降；覆蓋度即表示所取樣品能否真實(shí)地反映瘤胃細(xì)菌的組成及種類的分布情況， 兩者呈正比。 本試驗(yàn)中，20 個(gè)瘤胃液樣本共獲得1134617 條優(yōu)化序列，每個(gè)樣本平均產(chǎn)生56731 條，序列平均長(zhǎng)度為438.63 bp 左右，與陳蕓等（2017）在黑山羊和甄玉國(guó)等（2018）在綿羊的試驗(yàn)中所得出的測(cè)序深度一致。 同時(shí)，本試驗(yàn)20 個(gè)瘤胃液樣本測(cè)序覆蓋度均超過(guò)了99%，Mao 等（2015）研究表明，覆蓋度高于97%時(shí)，說(shuō)明測(cè)序樣品取樣充分。因此，本試驗(yàn)的測(cè)序結(jié)果能覆蓋牦牛瘤胃中大多數(shù)細(xì)菌群落， 能真實(shí)地反映舍飼育肥牦牛瘤胃中細(xì)菌的組成情況。

3.2 物種組成分析 在反芻動(dòng)物的瘤胃中，微生物菌群的組成是判斷動(dòng)物健康與否的重要指標(biāo)，其群落對(duì)動(dòng)物機(jī)體的健康有關(guān)鍵的作用（謝驍2018）。 有研究表明，擬桿菌門和厚壁菌門是反芻動(dòng)物瘤胃中的優(yōu)勢(shì)菌門 （Myer 等，2015；Singh 等，2013；Marcelo 等，2013）。 楊 琦 玥 等（2017） 在牦牛的試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)擬桿菌門、 厚壁菌門、變形菌門和螺旋菌門四種優(yōu)勢(shì)菌。 本試驗(yàn)所得到的優(yōu)勢(shì)菌門分別為擬桿菌門、 厚壁菌門、變形菌門和互養(yǎng)菌門， 和前人研究結(jié)論有所差異，可能是由于所選用的牦牛品種、環(huán)境條件以及日糧組分不同等所造成的。

甄玉國(guó)等（2018）在綿羊的試驗(yàn)中得出，普雷沃氏菌、理研菌科的RC9 菌屬、瘤胃球菌、Saccharofermentans為優(yōu)勢(shì)菌屬。高雨飛等（2016）在分析錦江牛時(shí)利用MiSeq 測(cè)序技術(shù)發(fā)現(xiàn)， 優(yōu)勢(shì)菌屬分別為普雷沃氏菌屬、帕拉普氏菌屬、理研菌屬。 而本研究中，各處理組在屬水平的優(yōu)勢(shì)菌屬為，擬桿菌科的BS11 菌屬、理研菌科的RC9 菌屬、普雷沃氏菌1 屬、疣微菌科NK4A214 菌屬、克里斯滕森菌科的R7 菌屬，與前人的研究有所不同，推測(cè)差異產(chǎn)生的原因是研究對(duì)象品種、所選用添加劑、動(dòng)物個(gè)體差異及基礎(chǔ)日糧營(yíng)養(yǎng)成分不同所引起的。Kobayashi（2006）在研究中發(fā)現(xiàn)，家養(yǎng)反芻動(dòng)物瘤胃菌群的豐度不如野生和半家養(yǎng)的反芻動(dòng)物，可能是由于野生和半家養(yǎng)反芻動(dòng)物飼料結(jié)構(gòu)及瘤胃菌群較復(fù)雜導(dǎo)致的。

3.3 物種差異性分析 從門水平看，添加小肽和酵母培養(yǎng)物顯著提高了螺旋菌門和纖維桿菌門的相對(duì)豐度，并顯著降低了變形菌門的相對(duì)豐度，對(duì)擬桿菌門和厚壁菌門兩種優(yōu)勢(shì)菌門無(wú)顯著影響。甄玉國(guó)等（2018）在綿羊的試驗(yàn)中得出，酵母培養(yǎng)物能增加瘤胃中擬桿菌門和纖維桿菌門的相對(duì)豐度，并且減少變形菌門的相對(duì)豐度。陳蕓（2017）在山羊飼喂抗菌肽后發(fā)現(xiàn)， 瘤胃細(xì)菌區(qū)系中厚壁菌門、疣微菌門和無(wú)壁菌門的相對(duì)豐度顯著升高，擬桿菌門有上升的趨勢(shì)。本試驗(yàn)結(jié)果與之相差較大，可能是由于添加劑選擇、動(dòng)物品種及其生理狀態(tài)、外界環(huán)境及日糧組成不同而產(chǎn)生差異。 有研究表明，螺旋菌門能夠降解纖維素和半纖維素類物質(zhì)，對(duì)纖維性飼糧成分轉(zhuǎn)化為揮發(fā)性脂肪酸產(chǎn)生重要影響（張紅濤，2017），擬桿菌門能分解日糧中的糖類和蛋白質(zhì)類大分子物質(zhì)， 協(xié)助宿主利用機(jī)體不能消化的多糖，提高對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收效率，增加育肥效果（Tremaroli 等，2012）。

從屬水平分析， 添加小肽和酵母培養(yǎng)物顯著提高了理研菌科RC9 菌屬這一種優(yōu)勢(shì)菌屬的相對(duì)豐度，普雷沃氏菌1 屬、擬桿菌科的BS11 菌屬和克里斯滕森菌科的R7 菌屬的相對(duì)豐度均隨著小肽與酵母培養(yǎng)物的添加有所提高， 以試驗(yàn)Ⅲ組相對(duì)豐度最高， 促進(jìn)了蛋白質(zhì)等大分子的消化吸收。 本研究發(fā)現(xiàn)，隨著小肽和酵母培養(yǎng)物的添加，試驗(yàn)Ⅲ組理研菌科RC9 菌屬、 普雷沃氏菌科UCG-004 菌屬、疣微菌科UCG-010 菌屬、帕匹桿菌屬、柔膜菌綱的RF9 菌屬的相對(duì)豐度顯著高于對(duì)照組水平，試驗(yàn)Ⅰ和Ⅱ組之間無(wú)顯著的差異，差異屬中只有瘤胃球菌屬呈降低的趨勢(shì)， 且差異極顯著（P＜0.01）。

3.4 小肽與酵母培養(yǎng)物對(duì)舍飼育肥牦牛發(fā)酵參數(shù)的影響 pH 作為瘤胃發(fā)酵參數(shù)中最基本的指標(biāo)， 是研究瘤胃內(nèi)環(huán)境微生物發(fā)酵情況最直接的指標(biāo)， 對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收和瘤胃微生物的生長(zhǎng)產(chǎn)生影響，纖維分解菌的適宜pH 為6.1 ～6.9，淀粉分解菌為5.3 ～6.2，原蟲為5.6 ～6.9（Cardozo 等，2005）。李莉（2001）在研究中發(fā)現(xiàn)，若pH 低于6.2， 瘤胃內(nèi)的纖維素消化作用將會(huì)受到抑制；動(dòng)物采食后，糖類在瘤胃內(nèi)進(jìn)行發(fā)酵，產(chǎn)生揮發(fā)性脂肪酸的速度加快、 數(shù)量也較多， 使得瘤胃中VFA 濃度過(guò)高，pH 明顯下降造成瘤胃酸中毒（李海燕等，2008）。 Chaucheyras-Durand 等（2010）報(bào)道，酵母菌對(duì)瘤胃沒有影響，甚至有降低瘤胃的作用，這與本試驗(yàn)Ⅰ組結(jié)果相一致；本試驗(yàn)Ⅱ組結(jié)果與王文娟等（2011） 在綿羊試驗(yàn)中得出結(jié)論不一致， 瘤胃灌注大豆小肽對(duì)瘤胃液pH 不會(huì)造成顯著性影響， 可能是選用的動(dòng)物及日糧配方的差異所造成的。 而Ⅲ組pH 最低，但在正常范圍內(nèi)，說(shuō)明不會(huì)對(duì)瘤胃發(fā)酵造成顯著影響。

瘤胃的氨氮濃度直接關(guān)系到蛋白質(zhì)的降解與合成是否達(dá)到平衡， 也是飼料中蛋白質(zhì)與非蛋白氮在反芻動(dòng)物瘤胃中的降解產(chǎn)物， 合成菌體蛋白后可直接進(jìn)入血液循環(huán)， 氨氮濃度主要受飼料中蛋白質(zhì)的溶解度、瘤胃微生物的活性、瘤胃蠕動(dòng)頻率、食糜在瘤胃中的排空速度等指標(biāo)的影響（栗文鈺，2009）。 最適宜瘤胃微生物生長(zhǎng)的氨氮濃度為6.3 ～27.5 mg/dL （Preston，1987）， 本試驗(yàn)結(jié)果與Arroquy 等（2004）和Wickersham 等（2008）所報(bào)道的結(jié)果一致，說(shuō)明瘤胃內(nèi)NH3-N 濃度能滿足瘤胃微生物生長(zhǎng)的需要， 這可能是由于所選取的添加劑類型不同使微生物的群體結(jié)構(gòu)發(fā)生變化， 從而導(dǎo)致對(duì)氮素降解速度和氨氮利用率的不同。

VFA 作為日糧中有機(jī)物的發(fā)酵產(chǎn)物，是維持動(dòng)物機(jī)體正常生長(zhǎng)繁殖的關(guān)鍵因素， 其含量及組成比例是反映瘤胃消化代謝活動(dòng)的重要指標(biāo)（高健，2017） 。 樸光赫（2017）發(fā)現(xiàn)，添加酵母培養(yǎng)物可增加VFA 產(chǎn)量，降低乙/丙。 閆佰鵬等（2018）研究表明， 酵母培養(yǎng)物對(duì)瘤胃VFA 產(chǎn)量無(wú)影響，降低了乙/丙，Wang 等（2013）研究表明，小肽能夠提高丙酸含量，并顯著降低乙/丙。 殷云浩（2012）在體外試驗(yàn)表明， 不同氨基酸組成的小肽隨著添加比例的升高，丙酸含量逐漸升高，乙/丙逐漸降低，促進(jìn)異丁酸和異戊酸的生成，從而改變發(fā)酵類型。本試驗(yàn)Ⅰ組與前人結(jié)論相一致， 丙酸含量得到顯著提高，乙/丙比值顯著降低，使得發(fā)酵類型逐漸向丙酸型轉(zhuǎn)變；試驗(yàn)Ⅱ組乙/丙與夏楠等（2009）試驗(yàn)結(jié)果相近，乙/丙與能量轉(zhuǎn)化效率相關(guān)，試驗(yàn)中乙/丙下降，表明丙酸的比例提高，能量的利用效率提高。乙酸是反芻動(dòng)物乳脂合成的主要前體，丙酸則是反芻動(dòng)物重要的葡萄糖前體， 可經(jīng)血液循環(huán)到達(dá)肝臟，在肝臟內(nèi)異生成糖元，對(duì)動(dòng)物機(jī)體能量的貯存有積極的意義（汪水平，2004）。本試驗(yàn)Ⅲ組的丙酸含量最高，乙/丙值最低，說(shuō)明小肽和酵母培養(yǎng)物能夠共同作用于牦牛的育肥。 小肽與酵母培養(yǎng)物單獨(dú)添加或同時(shí)添加提高了螺旋菌門和擬桿菌門的相對(duì)豐度， 進(jìn)而提高了動(dòng)物體對(duì)纖維素和半纖維素類物質(zhì)的降解力以及對(duì)日糧中的糖類和蛋白質(zhì)類大分子物質(zhì)的分解力， 最終達(dá)到育肥效果。

4 結(jié)論

小肽與酵母培養(yǎng)物單獨(dú)或同時(shí)添加均降低了瘤胃液pH、NH3-N、乙酸和丁酸的濃度，但差異不顯著。丙酸含量顯著增加，瘤胃發(fā)酵類型從乙酸型向丙酸型發(fā)酵轉(zhuǎn)變，有利能量利用效率的提高，以1%酵母培養(yǎng)物+0.75%小肽組效果最佳，建議小肽與酵母同時(shí)添加。

各處理組之間瘤胃微生物菌群的豐富度、多樣性及覆蓋度無(wú)顯著差異。從門水平看，相對(duì)豐度1%以上優(yōu)勢(shì)菌門有擬桿菌門、厚壁菌門、變形菌門和互養(yǎng)菌門， 小肽和酵母培養(yǎng)物的添加增加了擬桿菌門和互養(yǎng)菌門的相對(duì)豐度， 并降低了變形菌門的相對(duì)豐度；從屬水平分析，相對(duì)豐度在1%以上且占比前四的優(yōu)勢(shì)菌屬有普雷沃氏菌、 擬桿菌科的BS11 菌屬、 理研菌科的RC9 菌屬和克里斯滕森菌科的R7 菌屬， 表明小肽和酵母培養(yǎng)物單獨(dú)或同時(shí)添加均能提高優(yōu)勢(shì)菌屬的相對(duì)豐度。