劉慧，王金花，呼斯冷

（內(nèi)蒙古醫(yī)科大學附屬人民醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020）

0 引言

隨著醫(yī)學檢測水平的提高，早期宮頸癌的檢出率逐漸提高。宮頸上皮內(nèi)病變?yōu)樽訉m頸浸潤癌密切相關(guān)的癌前病變的總稱，臨床上在對宮頸上皮內(nèi)病變進行治療時，主要為開展消融性治療與切除性治療[1]。有資料報道，宮頸類病變的發(fā)病呈現(xiàn)出年輕化趨勢，特別是隨著二胎政策的施行，婦科疾病檢查得到推廣，宮頸類病變檢出率提高，大部分患者均要求對子宮進行保留，因此微創(chuàng)手術(shù)成為主要治療手段[2]。為改善疾病預(yù)后，早期診治顯得尤為重要[3]。人乳頭瘤病毒感染與宮頸癌前病變以及宮頸癌的發(fā)生存在密切關(guān)聯(lián)，有研究報道稱，在宮頸癌發(fā)生的危險因素中，人乳頭瘤病毒感染屬于獨立危險因素，相較于未感染人乳頭瘤病毒的群體，人乳頭瘤病毒感染女性群體的宮頸癌發(fā)病率明顯更高。由此可知，當宮頸炎患者合并人乳頭瘤病毒感染后，患者發(fā)生惡性病變的風險明顯提高，做好疾病治療工作尤為重要。CK7、p16 及p53 蛋白均為常用的腫瘤標志因子，本次研究就選取由于HPV或?qū)m頸細胞學檢查結(jié)果為陽性而接受宮頸活檢的宮頸上皮內(nèi)病變患者81 例以及宮頸炎癥患者30 例，探討HPV16 及18 型宮頸上皮內(nèi)病變聯(lián)合檢測CK7、p16及p53 蛋白表達的臨床價值。報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019 年1 月至2020 年10 月我院收治的由于HPV 或?qū)m頸細胞學檢查結(jié)果為陽性而接受宮頸活檢的宮頸上皮內(nèi)病變患者81 例，年齡22～68 歲，平均（40.52±4.32）歲；同時選取宮頸炎癥患者30 例，年齡20～65 歲，平均（40.80±4.15）歲。兩組年齡差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），具可比性。

1.2 方法

全部患者均接受CK7、p16 及p53 蛋白檢測，檢測方法為免疫組化Elivision 法，將標本應(yīng)用10%中性福爾馬林進行固定，石蠟包埋，4μm 連續(xù)切片。將切片通過常規(guī)脫蠟以及水化，然后采用3%過氧化氫將內(nèi)源性過氧化物酶去除，應(yīng)用EDTA 抗原進行修復(fù)，其余步驟按照試劑盒說明書進行操作。采用PBS 對一抗進行代替，將其作為陰性對照。P16 蛋白陽性定位在細胞核和/或胞質(zhì)，P53 蛋白陽性定位在細胞核，CK7 蛋白陽性定位在細胞質(zhì)，均出現(xiàn)黃色或棕色顆粒。P16：（-）陽性細胞百分率<10%；（+）陽性細胞百分率10%～30%；（++）陽性細胞百分率30%～50%；（+++）陽性細胞百分率>50%；P53：（-）陽性細胞百分率0；（+）陽性細胞百分率<10%；（++）陽性細胞百分率10%～20%；（+++）陽性細胞百分率>20%；CK7：（-）陽性細胞百分率0；（+）陽性細胞百分率<10%；（++）陽性細胞百分率10%～20%；（+++）陽性細胞百分率>20%。

1.3 觀察指標

①炎癥組、CIN Ⅰ組、CIN Ⅱ組與CIN Ⅲ組的CK7、p16 及p53 蛋白表達陽性率；②CK7、p16 及p53 蛋白聯(lián)合診斷HPV16 及18 型宮頸上皮內(nèi)病變與病理檢查結(jié)果的差異；③CK7、p16 及p53 蛋白聯(lián)合診斷HPV16 及18 型宮頸上皮內(nèi)病變的準確度、靈敏度與特異度。

1.4 統(tǒng)計學處理

統(tǒng)計學軟件為SPSS 25.0。[n（%）]表示計數(shù)資料，行χ2檢驗；P<0.05 表示有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 各組CK7、p16及p53蛋白表達陽性率比較

隨著宮頸上皮內(nèi)病變患者病理類型提高，CK7、p16 及p53 蛋白表達陽性率逐漸上升，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。如表1。

表1 各組CK7、p16及p53蛋白表達陽性率比較

2.2 聯(lián)合檢測診斷宮頸上皮內(nèi)病變的效果

聯(lián)合檢測CK7、p16 及p53 蛋白表達診斷HPV16及18 型宮頸上皮內(nèi)病變的準確率高于單一指標，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。如表2。

表2 聯(lián)合檢測診斷宮頸上皮內(nèi)病變的效果

2.3 聯(lián)合檢測診斷宮頸上皮內(nèi)病變的靈敏度與特異度比較

聯(lián)合檢測診斷宮頸上皮內(nèi)病變的準確度、靈敏度與特異度均高于單一指標，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。如表3。

表3 聯(lián)合檢測診斷宮頸上皮內(nèi)病變的靈敏度與特異度比較

3 討論

宮頸癌在臨床婦科屬于常見病與多發(fā)病，危害嚴重，若無法得到早期診治，病情發(fā)展到中晚期或出現(xiàn)遠處轉(zhuǎn)移后，則預(yù)后較差。宮頸癌的發(fā)生，會使患者的身心健康均受到嚴重傷害，同時給患者的家庭帶來沉重的經(jīng)濟負擔。在宮頸癌發(fā)生的過程中，HPV 感染屬于重要的致病因素。當患者宮頸受到HPV 感染后，會使患者機體的宮頸出現(xiàn)瘤變反應(yīng)，若此階段未能得到有效的治療，則會逐漸發(fā)展為宮頸癌病變。宮頸上皮內(nèi)瘤變?yōu)閷m頸癌的癌前病變階段，當患者的宮頸上皮內(nèi)瘤變確診后，需及時開展積極治療干預(yù)，使宮頸癌病變風險降低，改善疾病預(yù)后。目前臨床上應(yīng)用于宮頸上皮內(nèi)瘤變治療的方式較多，包括激光治療、宮頸環(huán)形電切術(shù)、子宮切除等，主要根據(jù)患者的病變程度來選擇相應(yīng)的治療方案。大量流行病學資料顯示，高危HPV 是引發(fā)宮頸癌出現(xiàn)的主要危險因素之一，雖然大部分的高危HPV 感染患者，并不會出現(xiàn)特異性臨床癥狀，或僅出現(xiàn)亞臨床表現(xiàn)，但HPV 會定植在患者機體受到損傷的宮頸上皮細胞中，從而導(dǎo)致宮頸發(fā)生長期感染，其中10%～15%的患者在病程達到8～10 年后，會導(dǎo)致宮頸上皮出現(xiàn)不典型增生，導(dǎo)致宮頸上皮出現(xiàn)癌前病變，進而誘發(fā)宮頸癌[4]。因此開展針對宮頸上皮的HPV 檢測，對于早期診斷癌前病變與宮頸癌，均具有積極作用。HPVDNA 檢查為臨床上常用的宮頸癌篩查方法，通過實施HPVDNA 檢查，可使HPV 的幾十種亞型均得到有效的篩查，及時發(fā)現(xiàn)存在的HPV 感染，以及感染的具體類型，并可針對結(jié)果實施處理。若經(jīng)檢查為低危型的HPV 感染，則會引發(fā)如尖銳濕疣等病變，需針對性開展積極治療[5]。若經(jīng)檢查為高危型的HPV 感染，在宮頸部位持續(xù)感染，則會導(dǎo)致宮頸上皮首先出現(xiàn)癌前病變，并可能向?qū)m頸癌發(fā)展。由于宮頸上皮內(nèi)瘤變發(fā)展為宮頸癌的周期通常較長，因此在這一期間通過做好疾病的篩查與治療工作，可降低發(fā)展為宮頸癌的風險，使患者的疾病預(yù)后得到改善。

p53 蛋白的編碼基因為Tp53 基因，定位為染色體17p13，其外顯子數(shù)量為11 個，內(nèi)含子數(shù)量為10 個，p53 與人類惡性腫瘤的發(fā)生具備密切關(guān)系，其包括兩種亞型，分別為突變型以及野生型，前者可導(dǎo)致細胞出現(xiàn)轉(zhuǎn)化及癌變，后者則可對細胞轉(zhuǎn)化產(chǎn)生抑制作用，同時可對癌基因活動進行抑制。有資料顯示，惡性腫瘤中出現(xiàn)P53 基因突變的比例超過50%[6]。CK7為堿性細胞角蛋白，其主要在正常組織的腺上皮以及移行上皮細胞中表達，在乳腺、卵巢以及肺腺癌中均表現(xiàn)為陽性表達，通常情況下非上皮來源的細胞不會有CK7 表達，鱗狀上皮也無表達，可將其用作肺腺癌分化的客觀指標，可鑒別腫瘤類型，可對轉(zhuǎn)移部位腫瘤細胞的來源進行判斷。CK7 為低分子量角蛋白，主要用于對各種單層上皮進行標記，目前，關(guān)于CIN 病變的細胞分化的研究較少，CK7 是與細胞分化相關(guān)的上皮細胞特征性標志物，其表達具有組織特異性、細胞特異性和分化特異性。有國外學者研究提示CK7 可以作為CINI 可能進展為高級別病變的生物標記物。由于在對CINI 級宮頸上皮內(nèi)瘤變進行組織學診斷時，結(jié)果容易受到陰道鏡檢查以及檢查人員主觀判斷的影響，因此可能使疾病的嚴重度被低估，有學者認為若CINI 級宮頸上皮內(nèi)瘤變患者的陰道鏡檢查結(jié)果不滿意，則需要為其實施宮頸切除治療。但大多數(shù)學者均認為，CINI 級宮頸上皮內(nèi)瘤變的自然緩解率高，且發(fā)展為浸潤癌的風險低，時間長，通常為8～10 年，因此對于不典型鱗狀細胞或是低度鱗狀上皮內(nèi)病變，且不存在明顯癥狀的患者，無論其是否取得滿意的引導(dǎo)鏡檢查結(jié)果，仍以定期隨訪觀察為主。有研究發(fā)現(xiàn)CK7 在低級別及高級別CIN 中陽性表達，但前者多以弱陽性為主，其表達范圍與強度隨著宮頸病變級別的升高明顯增加（P<0.05）；CK7 陽性表達細胞分布于上皮的全層，尤其下1/3 的基底層和基底上層。這表明CINI 有分化成熟的趨勢，CIN Ⅱ和CIN Ⅲ中出現(xiàn)細胞分化紊亂。差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。這提示CK7 可以作為宮頸病變的生物學標志物，可用于早期診斷和預(yù)測進展。p16 是一種抗癌基因，它是作用于細胞周期，細胞中p16 蛋白的減少會導(dǎo)致細胞周期調(diào)節(jié)紊亂，使細胞無限期增殖甚至癌變。本次研究結(jié)果顯示，隨著宮頸上皮內(nèi)病變患者病理類型提高，CK7、p16 及p53 蛋白表達陽性率逐漸上升，聯(lián)合檢測CK7、p16 及p53蛋白表達診斷HPV16 及18 型宮頸上皮內(nèi)病變的準確率高于單一指標，提示HPV16及18 型宮頸上皮內(nèi)病變患者的CK7，p16 及p53 蛋白表達會發(fā)生明顯異常，同時聯(lián)合檢測CK7，p16 及p53 蛋白可為HPV16 及18 型宮頸上皮內(nèi)病變診斷提供參考[7]。CINI 級宮頸上皮內(nèi)瘤變患者2 年內(nèi)自然轉(zhuǎn)陰率超過60%，若病情逐漸加重，則需要開展積極干預(yù)。破壞性治療是指依靠物理方法將宮頸表面組織進行破壞，包括激光汽化、冷凍或電凝治療，其治療適用人群為陰道鏡檢查滿意的CINI 級宮頸上皮內(nèi)瘤變患者。但該治療方法無法對組織標本予以保留，因此無法實施病理學檢查，具備一定風險，特別是對活檢漏診的宮頸早期浸潤癌，因此在對患者開展破壞治療前，需做好評估工作，確定患者具備清晰病灶視野且不具備宮頸浸潤癌特征。若CINI 級宮頸上皮內(nèi)瘤變合并高危HPV 感染，或出現(xiàn)復(fù)發(fā)、持續(xù)的病灶，或病變位置位于宮頸外口，宮頸管診刮結(jié)果為陽性，即使其分級為CINI 級，也需要為其開展切除手術(shù)治療，手術(shù)方式以超高頻電波刀手術(shù)為主，即可使病灶得到有效切除，又可避免將正常組織切除過多。

綜上所述，HPV16 及18 型宮頸上皮內(nèi)病變聯(lián)合檢測CK7、p16 及p53 蛋白表達，可使疾病得到有效診斷，同時可對疾病病理程度進行評估。