張園媛，粟 濤，劉 梅，胡玉海

武漢市漢口醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖北武漢 430015

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)為一種常見的多器官損傷性自身免疫性炎性疾病，但其致病機(jī)制仍不明確。研究顯示，SLE病因復(fù)雜，與遺傳、環(huán)境、機(jī)體免疫狀況等多種因素密切相關(guān)[1]。隨著對(duì)SLE病因及致病機(jī)制的深入研究，發(fā)現(xiàn)機(jī)體免疫細(xì)胞的異?；顒?dòng)是SLE發(fā)病及病情加重的重要因素[2]。因此，在治療及監(jiān)測(cè)SLE病情時(shí)，除了檢測(cè)相關(guān)自身抗體譜外，細(xì)胞因子水平的檢測(cè)也具有重要意義[3]。因此，為進(jìn)一步探究炎癥因子在SLE患者中的水平變化，本研究選擇三類在免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用的細(xì)胞因子，檢測(cè)其在SLE患者和健康對(duì)照者水平變化，探究其與疾病嚴(yán)重程度的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取武漢市漢口醫(yī)院2018年1月至2019年5月在本院就診的SLE患者218例作為研究對(duì)象，其中男性9例，年齡35～52歲，平均(44.7±3.8)歲；女性209例，年齡20～57歲，平均(37.1±6.9)歲。同期選擇來本院體檢健康者50例作為健康對(duì)照組，其中男性5例，年齡35～55歲，平均(45.1±4.0)歲；女性45例，年齡20～55歲，平均(40.6±5.4)歲。SLE患者根據(jù)SLE活動(dòng)性指數(shù)(SLEDAI)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[4]分為活動(dòng)組、緩解組。SLE組與健康對(duì)照組的年齡、性別比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，所有研究對(duì)象均簽署知情同意書，且本研究符合并已通過本院倫理委員會(huì)審理。

1.2納入標(biāo)準(zhǔn) (1)SLE患者均符合文獻(xiàn)[4]的診斷標(biāo)準(zhǔn)；(2)患者臨床資料完整；(3)未使用免疫抑制劑或糖皮質(zhì)激素。

1.3排除標(biāo)準(zhǔn) (1)合并肝、腎、心、腦等基礎(chǔ)疾??；(2)合并其他感染性疾病；(3)合并其他自身免疫性疾病或腫瘤等；(4)妊娠或哺乳期；(5)診斷不明確。

1.4儀器與試劑 酶標(biāo)儀為雷杜全自動(dòng)酶標(biāo)儀(RT-6100)；全自動(dòng)洗板機(jī)為深圳匯松(PW350)；血清炎癥因子檢測(cè)試劑盒購自武漢博士德生物技術(shù)公司。

1.5方法 所有研究對(duì)象均在早晨空腹采集血標(biāo)本2 mL，3 000 r/min，離心5 min，血清-80 ℃凍存?zhèn)溆?。使用酶?lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法檢測(cè)血清白細(xì)胞介素(IL)-2、IL-4、IL-6、IL-10、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和γ-干擾素(IFN-γ)水平，ELISA操作過程嚴(yán)格按照產(chǎn)品說明書進(jìn)行。具體為每孔25 μL血清加入225 μL樣本稀釋液中，37 ℃孵育90 min，自動(dòng)洗板機(jī)洗板3遍，每孔加入100 μL生物素標(biāo)記抗體，37 ℃孵育60 min，自動(dòng)洗板機(jī)洗板3遍，然后加入90 μL 3,3′,5,5′-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)顯色液，37 ℃避光15 min，然后加入100 μL TMB終止液450 nm檢測(cè)光密度(A)。

2 結(jié) 果

2.1SLE組與健康對(duì)照組炎癥因子水平比較 與健康對(duì)照組比較，SLE組血清IL-2水平降低，血清IL-4、 IL-6、IL-10、TNF-α和IFN-γ水平升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

2.2活動(dòng)組與緩解組炎癥因子水平比較 與緩解組相比，活動(dòng)組血清IL-2水平降低，血清IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α和IFN-γ水平升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表1 兩組炎癥因子水平比較

表2 活動(dòng)組與緩解組SLE患者炎癥因子水平比較

2.3各血清炎癥因子與SLEDAI評(píng)分相關(guān)性分析 SLE患者血清IL-2與SLEDAI評(píng)分呈負(fù)相關(guān)，SLE患者血清IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α和IFN-γ水平與SLEDAI評(píng)分呈正相關(guān)。見表3。

表3 各血清炎癥因子與SLEDAI評(píng)分相關(guān)性分析

3 討 論

SLE為一種好發(fā)于育齡女性的自身免疫性疾病，病情復(fù)雜易反復(fù)，常造成多種組織器官的損傷，危害較大，目前發(fā)病機(jī)制尚不明確。但綜合研究顯示其發(fā)病與遺傳、激素、環(huán)境等多種因素密切相關(guān)，在相關(guān)危險(xiǎn)因素的相互刺激下，多種免疫細(xì)胞(如T細(xì)胞、B細(xì)胞及NK細(xì)胞等)異常激活，導(dǎo)致炎癥因子的異常釋放，進(jìn)而介導(dǎo)組織器官慢性炎癥性損傷[1,5]。同時(shí)，釋放的炎癥因子又通過刺激機(jī)體相關(guān)免疫細(xì)胞異?；顒?dòng)，產(chǎn)生大量自身抗體，在補(bǔ)體作用下，自身抗體與相應(yīng)抗原密切結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物沉積于組織器官，導(dǎo)致多組織器官的損傷[6]。而炎性損傷與免疫性損傷相互交加，形成惡性循環(huán)，進(jìn)一步加重病程[7]。因此，研究SLE患者血清中炎癥因子的變化，對(duì)進(jìn)一步明確該病的發(fā)病機(jī)制，以及采取針對(duì)性藥物進(jìn)行抑制/激活相關(guān)炎癥因子，進(jìn)而抑制/激活相關(guān)免疫細(xì)胞，對(duì)于治療該病具有重要意義。

本研究結(jié)果顯示，與健康對(duì)照組比較，SLE組血清IL-2水平降低，血清IL-4、 IL-6、IL-10、TNF-α和IFN-γ水平升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與緩解組相比，活動(dòng)組血清IL-2水平降低，血清IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α和IFN-γ水平升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。同時(shí)本研究將各炎癥因子與SLEDAI評(píng)分進(jìn)行相關(guān)性分析，也證實(shí)各炎癥因子變化與SLEDAI評(píng)分具有一定相關(guān)性，血清IL-2水平與SLEDAI評(píng)分呈負(fù)相關(guān)，血清IL-4，IL-6，IL-10，TNF-α和IFN-γ與SLEDAI評(píng)分呈正相關(guān)。這說明IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α和IFN-γ在SLE發(fā)病過程中發(fā)揮著重要作用，有可能成為SLE治療的潛在靶點(diǎn)。

研究表明在SLE發(fā)病過程中調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞增殖分化功能顯著受抑制，效應(yīng)性T淋巴細(xì)胞數(shù)量顯著增加，功能明顯增強(qiáng)，使機(jī)體針對(duì)自身抗原的免疫耐受能力降低，導(dǎo)致自身抗體的產(chǎn)生[8]。IL-2主要由活化的T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生，具有調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞增殖分化及維持機(jī)體免疫功能穩(wěn)定的作用[9]。本研究SLE患者血清IL-2與SLEDAI評(píng)分呈負(fù)相關(guān)。這說明在SLE發(fā)病過程中降低的IL-2很可能是由于調(diào)節(jié)性T細(xì)胞被抑制所造成，這與臨床試驗(yàn)也顯示使用低劑量的IL-2對(duì)SLE患者進(jìn)行治療，可顯著促進(jìn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的數(shù)量和功能的增加，使效應(yīng)性T細(xì)胞的促炎作用得到顯著抑制，可達(dá)到緩解病情，治療該病的目的是一致的[10]。但調(diào)節(jié)性T細(xì)胞是如何在SLE患者中被抑制的，尚有待進(jìn)一步探究。

在SLE發(fā)病的不同時(shí)期，患者外周血中Th細(xì)胞和Tc細(xì)胞比例失衡，當(dāng)二者比例失衡時(shí)就會(huì)產(chǎn)生針對(duì)自身抗原的特異性自身抗體，形成免疫復(fù)合物[11]。IFN-γ和IL-4分別作為Th1細(xì)胞和Th2細(xì)胞代表性細(xì)胞因子，在調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)平衡過程中具有重要作用[12]。本研究結(jié)果顯示，SLE患者體內(nèi)Th細(xì)胞/Tc細(xì)胞明顯失衡，Th細(xì)胞釋放炎癥因子量顯著增高，加重患者自身免疫的損傷。因此，如何恢復(fù)患者體內(nèi)Th細(xì)胞和Tc細(xì)胞的比例，降低IFN-γ和IL-4水平成為治療SLE的一個(gè)重要方向。周嬌等[13]通過雷公藤多苷對(duì)SLE小鼠模型進(jìn)行治療，發(fā)現(xiàn)治療后SLE小鼠失衡的Tc細(xì)胞和Th細(xì)胞的比例得到顯著恢復(fù)，且炎癥因子也顯著降低，這從側(cè)面也反映IFN-γ和IL-4在SLE致病中的重要作用。

研究表明Th2細(xì)胞與自身免疫炎癥性疾病密切相關(guān)，其在SLE患者體內(nèi)嚴(yán)重失衡，且SLE患者疾病嚴(yán)重程度與Th1、Th2和Th17具有相關(guān)性[14-15]。本研究結(jié)果顯示，與健康對(duì)照組比較，SLE組血清IL-6水平變化不顯著，但I(xiàn)L-10水平顯著升高，且與SLEDAI評(píng)分呈正相關(guān)，這說明Th2細(xì)胞的異常增高可能對(duì)SLE的發(fā)病起著明顯促進(jìn)作用，通過抑制Th2細(xì)胞的活性有可能會(huì)對(duì)SLE的治愈起到一定的促進(jìn)作用。最新研究也證實(shí)通過抑制轉(zhuǎn)錄因子ETS1可以顯著抑制Th2細(xì)胞的分化過程，達(dá)到改善SLE患者發(fā)病進(jìn)程的目的[16]。

TNF-α則是一種非特異性細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，在自身免疫性疾病中也發(fā)揮了重要作用。有研究報(bào)道在SLE患者中，它可通過促進(jìn)T細(xì)胞與滋生抗原發(fā)生反應(yīng)，進(jìn)而加重SLE的進(jìn)程，是SLE疾病進(jìn)程中的一個(gè)重要促進(jìn)因素[15,17]。因此動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)SLE患者體內(nèi)TNF-α水平對(duì)于判斷疾病進(jìn)展、病情輕重均有較好的指導(dǎo)意義。

綜上所述，SLE患者炎癥因子水平檢測(cè)有助于了解疾病的進(jìn)展情況及嚴(yán)重程度，而且對(duì)于深入研究SLE致病機(jī)制并尋找升高或降低相應(yīng)炎癥因子的藥物具有重要的臨床意義。