魏哲學(xué)，武志昂

（1.沈陽藥科大學(xué)，遼寧 沈陽 110023；2.沈陽三生制藥有限責(zé)任公司，遼寧 沈陽 110027；3.北京亦度正康健康科技有限公司，北京 100055）

0 引言

生物制品基于來源可以分為3類：第1類是從人或者動(dòng)物組織制得的產(chǎn)品，包括從人或動(dòng)物的器官、組織、血液或其他生物體液當(dāng)中提取的生物制品。第2類是病毒疫苗和基因治療的病毒載體。第3類是從全面鑒定過的動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)的生物制品[1]。中國倉鼠卵巢細(xì)胞（CHO）是常用的細(xì)胞系。這類制品包括細(xì)胞因子、單抗和重組亞單位疫苗等。本文討論的對象主要是第3類中的細(xì)胞因子類產(chǎn)品生產(chǎn)過程中病毒污染的控制問題，擬以風(fēng)險(xiǎn)管理理論為指導(dǎo)，采用失效模式和影響分析（Failure Mode &Effect Analysis，F(xiàn)MEA）方法，提取并確立導(dǎo)致失敗模式發(fā)生的影響因素以及影響的嚴(yán)重程度，進(jìn)而提出風(fēng)險(xiǎn)管理的建議。

CHO細(xì)胞表達(dá)重組DNA蛋白制品的病毒污染可以分為兩類，即內(nèi)源性病毒污染和外源性病毒污染[2]。除內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒樣顆粒外，CHO細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)過程中有可能發(fā)生外源性病毒污染，因此需要從物料的質(zhì)量控制到細(xì)胞培養(yǎng)及純化的全過程進(jìn)行必要的控制，以降低外源性病毒污染的風(fēng)險(xiǎn)。

基于質(zhì)量源于設(shè)計(jì)的原理，產(chǎn)品的質(zhì)量源于良好的工藝設(shè)計(jì)，良好的病毒控制效果同樣源于病毒控制及除病毒工藝設(shè)計(jì)。本文不討論工藝設(shè)計(jì)及工藝驗(yàn)證問題，僅就如何確保一個(gè)經(jīng)過良好設(shè)計(jì)的工藝持續(xù)穩(wěn)定的運(yùn)行進(jìn)行討論。

1 理論與方法簡介

1.1 風(fēng)險(xiǎn)管理理論。質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)管理的過程就是風(fēng)險(xiǎn)最小化的過程[2]，在此過程中我們應(yīng)當(dāng)識(shí)別風(fēng)險(xiǎn)，選擇最有效的方法來降低風(fēng)險(xiǎn)。風(fēng)險(xiǎn)降低措施得以實(shí)施之后，需要進(jìn)行定期的風(fēng)險(xiǎn)回顧，確認(rèn)風(fēng)險(xiǎn)降低措施的有效性，確認(rèn)之前的評估結(jié)論及風(fēng)險(xiǎn)降低措施是否符合最新技術(shù)和法規(guī)的要求。風(fēng)險(xiǎn)溝通及風(fēng)險(xiǎn)管理工具的運(yùn)用貫穿于整個(gè)風(fēng)險(xiǎn)管理過程。

1.2 失效模式和影響分析法。失效模式和影響分析是常用的風(fēng)險(xiǎn)管理工具之一，它為工藝過程和它們對結(jié)果和/或產(chǎn)品性能的可能影響提供了一種潛在失效模式的評估。一旦建立失效模式，風(fēng)險(xiǎn)降低措施就可以用于消除、降低或控制潛在的失效。

2 失敗模式及其影響因素提取與確定

來源于細(xì)胞系的生物技術(shù)產(chǎn)品的一個(gè)共同特點(diǎn)是存在病毒污染的危險(xiǎn)性，這種污染在臨床上可產(chǎn)生嚴(yán)重的后果[3]。污染可來自原細(xì)胞系（細(xì)胞基質(zhì)）本身，也可來自生產(chǎn)過程中偶然帶入的外源病毒。

對于CHO細(xì)胞表達(dá)重組蛋白制品，外源病毒可通過多種途徑帶入最終產(chǎn)品，包括以下幾點(diǎn)：①使用受污染的生物試劑（含層析膠），如動(dòng)物血清組分；②組方中使用了受污染的輔料；③細(xì)胞培養(yǎng)操作過程中的污染；④工序間交叉污染。

關(guān)于生產(chǎn)過程中的病毒污染風(fēng)險(xiǎn)來源ICHQ5A及各國藥典已有論述。為了更全面的識(shí)別風(fēng)險(xiǎn)來源并對風(fēng)險(xiǎn)來源進(jìn)行細(xì)化，可由企業(yè)風(fēng)險(xiǎn)管理小組使用德爾菲法進(jìn)行全面梳理，本文不對梳理過程進(jìn)行贅述[4]。

3 影響因素分析與賦值

3.1 定義風(fēng)險(xiǎn)組份的尺度，見表1。

表1 風(fēng)險(xiǎn)組份尺度定義

3.2 定義風(fēng)險(xiǎn)組份及風(fēng)險(xiǎn)矩陣，見表2。

表2 風(fēng)險(xiǎn)矩陣

3.3 確定行動(dòng)限，見表3。

3.4 風(fēng)險(xiǎn)賦值。風(fēng)險(xiǎn)賦值受主觀影響大，需成立一個(gè)風(fēng)險(xiǎn)管理小組，小組成員應(yīng)至少包括QA、QC、生產(chǎn)部、物控部、工程部以及醫(yī)學(xué)部等部門的相關(guān)專家。相關(guān)專家采用德爾菲法確定賦值，以確保賦值的客觀、科學(xué)。本文不對賦值過程進(jìn)行贅述，僅展示最終的賦值結(jié)果，見表4。

表3 行動(dòng)限確定

4 風(fēng)險(xiǎn)管理措施的建議

上述風(fēng)險(xiǎn)控制措施的全面實(shí)施將極大程度的降低產(chǎn)品病毒污染風(fēng)險(xiǎn)。在確定風(fēng)險(xiǎn)降低措施后，應(yīng)再次使用工具對風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行評估，確認(rèn)風(fēng)險(xiǎn)是否降低至可接受水平。本文省略風(fēng)險(xiǎn)的再次評估過程，見表5。

5 討論

病毒污染風(fēng)險(xiǎn)是CHO細(xì)胞表達(dá)重組DNA蛋白制品的固有風(fēng)險(xiǎn)，通過風(fēng)險(xiǎn)管理工具的使用，識(shí)別風(fēng)險(xiǎn)并制定有效的風(fēng)險(xiǎn)降低措施，這是風(fēng)險(xiǎn)管理的第一步[5]。如何確保風(fēng)險(xiǎn)降低措施的落實(shí)，如何確保病毒安全性狀態(tài)的持續(xù)維持更加重要。風(fēng)險(xiǎn)降低措施的文件化、偏差管理、變更控制、定期管理評審及風(fēng)險(xiǎn)管理定期回顧是有效的風(fēng)險(xiǎn)管理工具，這些管理工具的全面運(yùn)用，可以保證風(fēng)險(xiǎn)降低措施的落實(shí)及風(fēng)險(xiǎn)可接受狀態(tài)的持續(xù)維持。

表4 風(fēng)險(xiǎn)評價(jià)

表5 風(fēng)險(xiǎn)降低措施