鄭碩

肝細胞肝癌（HCC）是原發(fā)性肝癌中最常見的病理類型，也是一種典型的血管富集的實體腫瘤，其發(fā)生、生長、浸潤及轉移等生物學行為均依賴于腫瘤新生血管形成［1-2］。腫瘤間質(zhì)新生血管不僅能夠為腫瘤生長提供營養(yǎng)保證，還能為腫瘤轉移提供通道支持，是引起HCC 患者高復發(fā)率及高轉移率的重要原因，也是導致預后不良的獨立危險因素［3］。近年來，肝癌內(nèi)血管生成與肝癌的相關性研究是臨床研究的熱點課題，國內(nèi)外諸多研究證實血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）在肝癌發(fā)生、發(fā)展、轉移及復發(fā)過程中扮演著重要角色，不僅會促進內(nèi)皮細胞增殖而誘導腫瘤血管分化及形成，是參與血管生發(fā)和成熟的最重要因素之一，同時還能對腫瘤宿主局部的免疫應答產(chǎn)生不良影響，進而使腫瘤細胞能夠逃避宿主免疫系統(tǒng)的攻擊，從而對HCC 發(fā)病、發(fā)展起關鍵作用。本研究旨在探討HCC 患者組織中VEGF 表達與臨床病理特征及預后的關系，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取福州市二醫(yī)院2016 年1 月—2018 年1月收治的HCC 患者72 例，符合HCC 的診斷標準［4］，均實施肝癌根治性切除術治療；術后病理證實為HCC，入院前均未進行化療、放療等干預措施，患者知情同意本研究。72 例HCC 患者中男58 例，女14 例；年齡：<60 歲47 例，≥60歲25 例；腫瘤直徑：<5 cm 50 例，≥5 cm 22 例；腫瘤包膜：完整29 例，不完整43 例；分化程度：低分化18 例，中分化46 例，高分化8 例；TNM 分期：Ⅰ+Ⅱ期26 例，Ⅲ+Ⅳ期36 例；肝功能分級：A 級42 例，B 級30 例；甲胎蛋白（AFP）：<400 μg/L 41 例，≥400 μg/L 31 例；腫瘤結節(jié)數(shù)量單個63 例，多個9 例；飲酒史32 例；淋巴結轉移11 例；乙型肝炎61 例；門靜脈癌栓12 例。

1.2 方法

1.2.1 資料收集 采用自制的問卷調(diào)查表收集患者臨床資料和病理學資料，包括性別（男、女）、年齡（<60 歲、≥60歲）、飲酒史（有、無）、乙型肝炎（是、否）、腫瘤直徑（<5 cm、≥5 cm）、腫瘤包膜（有、無）、分化程度（低分化、中分化、高分化）、TNM 分期（Ⅰ+Ⅱ期、Ⅲ+Ⅳ期）、肝功能分級（A 級、B 級）、淋巴結轉移（是、否）、AFP 水平（<400 μg/L、≥400 μg/L）、門靜脈癌栓（有、無）、腫瘤結節(jié)數(shù)量（單個、多個）。

1.2.2 VEGF 檢測方法 術后收集肝癌組織及癌旁組織（距肝癌組織2～5 cm），使用石蠟包埋，連續(xù)切片（厚4 μm），按試劑盒說明書進行免疫組化染色后，使用Nikon YS100 光學顯微鏡在高倍鏡（×400）下觀察染色情況，每張切片選取5 個高倍視野進行觀察，根據(jù)陽性細胞百分比及陽性染色強度分別進行評分，陽性細胞<5%、6%～25%、26%～50%、51%～75%、>75%分別計分為0、1、2、3、4 分，陽性染色強度無著色、黃色、棕黃色、棕褐色分別計分為0、1、2、3 分，二者得分乘積為0 分為陰性，1～4 分為弱陽性（+），5～8分為中度陽性（++），9～12 分為強陽性（+++），計算陽性率。

1.2.3 隨訪方法 所有患者術后通過電話、門診、住院復查等方式隨訪至少24 個月，隨訪至2020 年2 月29 日，觀察患者復發(fā)情況，以影像學檢查和血清AFP 進行評判，如無法確診者可進一步行肝動脈造影或穿刺活檢以確診，記錄患者生存情況。

1.3 觀察指標（1）比較癌組織及癌旁組織標本中VEGF 表達陽性率。（2）采用自制的調(diào)查表收集患者臨床和病理學資料，采用單因素分析及多因素Logistical 回歸分析VEGF 表達與臨床病理特征的關系。（3）比較VEGF 表達陽性和陰性患者1 年生存率、2 年生存率及中位生存期。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 20.0 統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)處理，計數(shù)資料以相對數(shù)表示，采用χ2檢驗。采用單因素χ2分析及多因素Logistical 回歸分析VEGF 表達與臨床病理特征及預后的關系，以P<0.05 為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 癌組織及癌旁組織標本中VEGF 表達情況 HCC 患者肝癌組織VEGF 表達陽性率為63.89%（46/72），高于癌旁組織12.50%（9/72），差異有統(tǒng)計學意義（χ2=40.273，P<0.01）。

2.2 HCC 患者癌組織中VEGF 表達與臨床病理特征的關系經(jīng)單因素分析顯示，是否存在乙型肝炎、淋巴結轉移、門靜脈癌栓患者及不同腫瘤直徑、病理分化程度、TNM 分期、肝功能分級、AFP 水平、腫瘤結節(jié)數(shù)量患者VEGF 表達陽性率比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表1。經(jīng)多因素Logistical 回歸分析顯示，乙型肝炎、腫瘤直徑、病理分化程度、TNM 分期、肝功能分級、淋巴結轉移、AFP 水平、門靜脈癌栓、腫瘤結節(jié)數(shù)量是影響VEGF表達的危險因素（P<0.05）。見表2。

2.3 HCC 患者癌組織中VEGF 表達與預后的關系 VEGF陽性和陰性表達患者1 年生存率分別為67.39%（31/46）和88.46%（23/26）、2 年生存率為21.74%（10/46）和61.54%（16/26）。VEGF 陽性和陰性表達患者1 年生存率、2 年生存率比較，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=3.933、11.405，P=0.047、0000）。VEGF 陽性和陰性表達患者中位生存期分別為18.4個月和30.4 個月。

表1 HCC 患者癌組織中VEGF 表達與臨床病理特征的關系

表2 HCC 患者癌組織中VEGF 表達影響因素的多因素Logistical 回歸分析

3 討論

HCC 發(fā)生、進展、預后與新生血管形成密切相關，豐富的腫瘤血管能夠為腫瘤細胞的生長提供足夠的營養(yǎng)支持，為浸潤播散及轉移提供條件，其中VEGF 是調(diào)節(jié)腫瘤血管生成的重要因子之一，在多種腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中扮演重要角色。本研究結果顯示，HCC 患者肝癌組織VEGF 表達陽性率高于癌旁組織，表明VEGF 過度表達促進了HCC 中的血管生發(fā)，導致了HCC 的發(fā)生，但在正常肝組織中VEGF 的表達水平不能促進新生血管形成，與文獻［5］研究相符。

本研究結果顯示，經(jīng)單因素分析及多因素Logistical 回歸分析顯示，乙型肝炎、腫瘤直徑、病理分化程度、TNM 分期、肝功能分級、淋巴結轉移、AFP 水平、門靜脈癌栓、腫瘤結節(jié)數(shù)量是影響VEGF 表達的危險因素，與文獻［6-8］研究相符。研究顯示，乙型肝炎感染的HCC 患者肝癌組織VEGF 表達水平高于非乙型肝炎感染患者，提示乙型肝炎感染促進VEGF在肝癌組織中的表達的上調(diào)［9］。HCC 患者不良病理分化，TNM 分期越高，腫瘤直徑越大，腫瘤結節(jié)數(shù)量越多，則對氧及血供的需求越高，加重癌細胞的缺氧狀態(tài)，而缺氧是VEGF最強誘導劑，進而上調(diào)腫瘤內(nèi)VEGF 表達，促進腫瘤內(nèi)的新生血管形成，促進肝癌的增長、浸潤，且更易發(fā)生遠處轉移，為腫瘤的侵襲及轉移奠定了基礎。因而，發(fā)生淋巴結轉移的HCC 患者肝癌組織VEGF 表達水平高于非淋巴結轉移患者，存在門靜脈癌栓HCC 患者肝癌組織VEGF 表達水平高于無門靜脈癌栓HCC 患者，也表明了VEGF 與肝癌的侵襲轉移有關。肝功能Child-Pugh 分級、AFP 水平與肝癌的惡性程度呈正相關，AFP 水平越高，肝功能Child-Pugh 分級越高，則肝癌的惡性程度越高，則VEGF 表達增加越明顯。

本研究結果還顯示，VEGF 陽性和陰性表達1 年生存率為67.39%和88.46%、2 年生存率為21.74%和61.54%，中位生存期分別為18.4 個月和30.4 個月，提示肝癌組織VEGF 表達水平會對肝癌患者術后預后產(chǎn)生一定的影響，與肝癌術后預后存在相關性，可作為預示HCC 患者術后預后的分子指標，與文獻［10-11］研究相符。

綜上所述，HCC 患者組織中VEGF 呈高表達，與HCC患者是否合并肝炎、腫瘤直徑大小、組織分化程度、TNM 分期、是否出現(xiàn)門靜脈癌栓、淋巴結轉移、AFP 水平等生物學行為密切相關，并對HCC 的預后判斷具有重要價值，可作為HCC抗血管靶向治療的一個新靶點。