展 月，徐 云，林建梅，王卉玲，徐 建

（1.吉林修正藥業(yè)新藥開發(fā)有限公司，吉林省中藥標準化關鍵工程技術(shù)重點實驗室，長春130103；2.吉林長白山藥業(yè)集團股份有限公司，白山134300）

理氣舒心片由當歸、沉香、茯苓、木香等18味中草藥精制而成，本品主要功效為解肝郁，行氣滯，祛胸痹。用于氣滯血瘀癥冠心病，心絞痛，心律不齊，氣短腹脹，胸悶心悸，近年來有文獻報道理氣舒心片在冠心病，心絞痛治療上取得良好的治療效果[1]。處方中部分的三棱、青皮和其余當歸、茯苓、香附、佛手、陳皮、枳實、枳殼、麥芽、香櫞、三棱、丹參等10味，加水進行提取，濃縮成浸膏為理氣舒心片中間體，為有效控制水提取部位的質(zhì)量，提高終產(chǎn)品的批間一致性。本研究對理氣舒心片中間體建立特征圖譜，用于生產(chǎn)過程中的質(zhì)量控制，有效保證產(chǎn)品質(zhì)量的均一、穩(wěn)定。具體研究如下：

1 材料

1.1 試劑

乙腈、磷酸均為色譜純（美國TEDIA試劑公司）；甲醇為分析純；水為純化水。

1.2 儀器

AE205DU型分析天平（上海梅特勒-托利多儀器有限公司）；KQ-300DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；Ultimate 3000高效液相色譜儀DAD檢測器。

1.3 試藥

理氣舒心片（吉林長白山藥業(yè)集團股份有限公司，批號：T190601、T190602、T190603、T190604、T190605、T190606、T190607、T190907、T190908、T190909）；柚皮苷（批號：110752-201313）、橙皮苷（批號：121551-201103）、新橙皮苷（批號：171241-200506）、丹酚酸B（批號：171237-200807）、阿魏酸（批號：110773-200611）均購于中國食品藥品檢定研究院。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性[2-4]

色譜柱：Agilent-ZORBAX SB-PHenyl C18色譜柱，（250mm*4.6mm，5μm）；流動相：以乙腈為流動相A，以0.1%磷酸溶液為流動相B，梯度洗脫（0～5min，5%A→40%A;5～25min，10%A→15%A；25～40min，15%A→20%A；40～65min，20%A→30%A；65～70min，30%A→35%A。）流速為1ml/min；檢測波長為286nm；柱溫為35℃，進樣量：10μl。

2.2 溶液制備

2.2.1 混合對照品溶液的制備

取柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、丹酚酸B、阿魏酸適量，精密稱定，分別加甲醇制成每1ml分別含200μg的混合溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液制備方法[5,6]

取本品浸膏約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加70%甲醇50ml，稱定重量，超聲處理（400W，40KHZ）30min，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3 方法學考察

2.3.1 精密度試驗

取理氣舒心片中間體供試品溶液連續(xù)進樣6次，記錄色譜圖，暫以柚皮苷峰為參照峰，比較各共有峰的相對保留時間，計算結(jié)果RSD值均小于1%，儀器測試精度符合要求。

2.3.2 重復性試驗

取理氣舒心片中間體6份，分別按供試品溶液制備方法制備供試品溶液，進樣，記錄色譜圖，暫以柚皮苷峰為參照峰，比較各共有峰的相對保留時間，計算結(jié)果RSD值均小于1%，試驗方法的重復性良好。

2.3.3 穩(wěn)定性試驗

取理氣舒心片中間體供試品溶液，分別在0、2、4、8、12、18、24h進樣，記錄色譜圖，暫以柚皮苷峰為參照峰，比較共有峰的相對保留時間，計算RSD值均小于1%，供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定性符合測試要求。

2.4 特征圖譜建立及特征峰歸屬

取10批理氣舒心片中間體（1～10號樣品），按以上選定的供試品溶液制備方法和檢測方法進行檢測，得到10批樣品的高效液相色譜圖。將10批樣品的測試數(shù)據(jù)導入《國家藥典委員會.中藥特征圖譜相似度評價系統(tǒng)（2012）》軟件進行處理，經(jīng)多點校正，將譜峰自動匹配，生成共有模式。暫以柚皮苷峰為參照峰，確定了18個特征峰。從結(jié)果可以看出，10批樣品特征圖譜中特征峰的相對保留時間基本一致，RSD均小于1%。根據(jù)10批樣品的特征峰相對保留時間平均值，確定特征峰規(guī)定值為：0.088（峰1）、0.18（峰2）、0.32（峰3）、0.36（峰4）、0.50（峰5）、0.56（峰6）、0.64（峰7）、0.74（峰8）、0.83（峰9）、0.94（峰10）、1.00（峰11）、1.04（峰12）、1.05（峰13）、1.15（峰14）、1.21（峰15）、1.25（峰16）、1.34（峰17）、1.37（峰18）。暫定其相對保留時間應在規(guī)定值的±5%之內(nèi)[7-9]。結(jié)果見表1、2，附圖1、2。

取當歸、茯苓、香附（醋制）、佛手、陳皮、枳實（炒）、青皮（醋制）、枳殼（炒）、麥芽（炒）、香櫞、三棱（醋制）、丹參等12味藥材，分別粉碎成細粉，按理氣舒心片中間體特征圖譜檢查方法分別制備供試品溶液，進樣測定。經(jīng)色譜圖比較，并DAD檢測器下進行分析：峰1歸屬枳殼，峰2歸屬枳殼、三棱，峰3歸屬青皮，峰4歸屬陳皮，峰5歸屬枳殼、枳實、陳皮、香櫞、青皮，峰6歸屬陳皮、青皮，峰7歸屬青皮，峰8歸屬當歸，峰9歸屬枳殼，峰10歸屬枳殼、枳實、陳皮、青皮，峰11歸屬枳殼、香櫞，峰12歸屬枳殼、佛手、枳實、陳皮、青皮，峰13歸屬枳殼，峰14歸屬枳殼、香櫞，峰15歸屬枳殼、香櫞，峰16歸屬丹參，峰18歸屬枳實、陳皮、青皮，峰17沒有明顯歸屬。詳見附圖3。

采用對照品確認的方式，應用DAD檢測器進行峰分析，對特征峰進行指認：峰8：阿魏酸；峰11（S）：柚皮苷；峰12：橙皮苷；峰13：新橙皮苷；峰16：丹酚酸B。詳見附圖4。

3 討論

中藥特征圖譜是一種綜合的，可量化的質(zhì)量控制方法，可用于全面評價中藥制劑的質(zhì)量及其穩(wěn)定性，本研究中按照中國藥典及相關文獻，在供試品的提取方法上，考察了甲醇、70%甲醇、50%甲醇不同溶劑超聲提取，結(jié)果表明，以70%甲醇為溶劑的特征圖譜中色譜峰數(shù)目及分離效果均優(yōu)于以甲醇為溶劑的特征圖譜，且較以50%甲醇為溶劑的供試品溶液易過濾，故選擇以70%甲醇作為提取溶劑。試驗選擇了20min、30min和45min超聲提取進行考察。超聲提取20min、30min和45min色譜圖差異不大，為了保證提取充分并節(jié)約時間，確定提取時間為30min。試驗選擇了乙腈-水、乙腈-0.2%磷酸水為流動相進行考察，結(jié)果，采用乙腈-水系統(tǒng)色譜圖中，色譜峰較少；采用乙腈-0.2%磷酸水系統(tǒng)為流動相較乙腈-0.1%磷酸水系統(tǒng)色譜圖無明顯變化，考慮到色譜柱的耐酸性等因素，確定流動相組成為乙腈-0.1%磷酸水系統(tǒng)[10,11]。

理氣舒心片組方藥味多，成分復雜，采用特征圖譜來反映并評價其質(zhì)量是一種比較科學的手段，其優(yōu)點在于可以全面地反映不同藥味的化學成分，表征制劑質(zhì)量。本研究建立的理氣舒心片中間體特征圖譜，可以歸屬中間體中的當歸、青皮、枳殼等10味藥材，采用對照品確認的方式，應用DAD檢測器進行峰分析，對阿魏酸、柚皮苷等5個特征峰加以指認。本研究建立的理氣舒心片中間體特征圖譜檢測法，經(jīng)方法學驗證，精密度高、重現(xiàn)性和耐用性均較好，且方法簡便，為該品種生產(chǎn)過程質(zhì)量控制提供了有效方法，為理氣舒心片的質(zhì)量控制方法的提升和完善提供了數(shù)據(jù)支持，可較直觀的反映出產(chǎn)品的批間一致性，能更全面地把控理氣舒心片的質(zhì)量。

附表

表1 10批樣品共有峰保留時間（min）

表2 10批樣品共有峰相對保留時間

圖1 10批樣品色譜圖及共有模式圖

圖2 對照特征圖譜

圖3 特征峰歸屬圖

圖4 特征峰指認圖