趙換維 王海華 楚 琰 朱介法

（西安海棠職業(yè)學(xué)院 陜西西安 710038）

杏鮑菇是一種珍貴的藥食兩用真菌[1]。杏鮑菇營(yíng)養(yǎng)豐富，蛋白質(zhì)、碳水化合物、維生素、鈣、銅、鎂、鋅、鐵等含量高[2]。其中，蛋白質(zhì)含量為12.4%～35%，是常見菜品的3～6倍。杏鮑菇是優(yōu)質(zhì)的植物蛋白資源。同時(shí)，杏鮑菇在我國(guó)產(chǎn)量豐富，其成品在整剪過(guò)程中會(huì)形成大量的下腳料，一般利用很低，經(jīng)濟(jì)價(jià)值低。本文采取杏鮑菇下腳料為原料，提取其蛋白質(zhì)，為提高杏鮑菇利用價(jià)值提供參考依據(jù)。

一、實(shí)驗(yàn)材料

本研究采購(gòu)杏鮑菇的下腳料為實(shí)驗(yàn)原料，將其菇腳進(jìn)行脫水和烘干、粉碎處理。其粉末作為實(shí)驗(yàn)材料。

二、主要試劑

其主要是無(wú)水乙醇、NaOH、磷酸、HCl等，牛血清白蛋白，考馬斯亮藍(lán)G-250。

三、方法與步驟

（一）計(jì)算提取液里蛋白含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線

本研究根據(jù)考馬斯亮藍(lán)法計(jì)算蛋白質(zhì)含量，制作出標(biāo)準(zhǔn)曲線。

（二）提取杏鮑菇菇腳蛋白的工藝流程和方法

1.工藝流程

其流程：樣品→pH為8的弱堿液中浸泡30min→50℃時(shí)超聲波提取→離心機(jī)離心→取上清液→調(diào)pH至3.6→靜置后→離心→得沉淀物→脫色→干燥→得杏鮑菇粗蛋白。

杏鮑菇中提取蛋白的提取率的計(jì)算：

2.超聲波輔助法提取法

其稱取一定量樣品，按1∶20料液比加入蒸餾水制備水溶液，浸泡30min。本研究在100W功率，40kHz頻率的條件下，進(jìn)行超聲波法處理，每個(gè)樣做三次，取平均值為最終實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

（三）提取時(shí)pH的影響

本研究各稱取一定量的樣品，在7至12梯度依次加1的6個(gè)不同的pH值下，在確定其他提取因素時(shí)，對(duì)杏鮑菇下腳料采用超聲處理。

（四）提取時(shí)間的影響

本研究各稱取一定量的樣品，在同一提取條件下分別按0.5、1、1.5、2、2.5 h進(jìn)行超聲處理。

（五）料液比的影響

本研究各稱取一定量樣品，按1∶10、1∶15、1∶20、1∶25和1∶30料液比加入蒸餾水，浸泡30min，在相同的提取條件下采用超聲處理。

（六）提取次數(shù)的影響

本研究稱取一定量樣品三份，分別裝入三個(gè)三角瓶中，在相同的提取條件下對(duì)樣品分別提取1次、2次、3次。將各三角瓶提取液合并處理，測(cè)其蛋白含量。

（七）設(shè)計(jì)正交實(shí)驗(yàn)

表1 篩選試驗(yàn)因素水平表

四、結(jié)果、分析

（一）標(biāo)準(zhǔn)曲線

蛋白質(zhì)含量計(jì)算所用的標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖1所示。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

（二）提取pH的影響

在不同pH時(shí)，蛋白提取率的變化如圖2所示。

圖2 pH對(duì)蛋白提取率的影響

圖2表明，在堿性溶液中，蛋白質(zhì)易于溶解。在pH為11時(shí)，提取率最大；pH大于11時(shí)，提取率卻下降。本研究則選pH值11為提取的最佳pH值。

（三）提取時(shí)間的影響

在不同提取時(shí)間處理后，提取率如圖3所示。

圖3 提取時(shí)間對(duì)蛋白提取率的影響

從圖3可見，提取率隨著時(shí)間的增加而增加，在一定時(shí)間后，增幅減小。綜合考慮，本研究最終確定1 h為最佳的提取時(shí)間。

（四）料液比的影響

在水料比改變時(shí)，提取率如下圖4。

圖4 水料比對(duì)蛋白提取率的影響

圖4中，在水料比不斷增加時(shí)，提取率先上升，后面趨于平穩(wěn)。綜合考慮，本研究選15∶1為提取的最佳水料比。

（五）提取次數(shù)的影響

在不同的提取次數(shù)下，所得提取率如圖5所示。

圖5 提取次數(shù)對(duì)蛋白提取率的影響

圖5所示，2次處理的提取率有大幅增加，3次處理增幅很小。綜合考慮，本研究選提取2次為最佳提取次數(shù)。

（六）正交實(shí)驗(yàn)時(shí)的結(jié)果、分析

表2 正交實(shí)驗(yàn)時(shí)的結(jié)果

由表2極差值可知，各種因素多蛋白提取率影響的強(qiáng)弱順序?yàn)椋禾崛〈螖?shù)>提取pH>提取時(shí)間>料液比，最佳工藝組合為：水料比為15∶1，pH為11時(shí)，提取1 h，提取2次時(shí)。

（七）驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

本研究按照最佳提取工藝，做3組平行實(shí)驗(yàn)，最終杏鮑菇蛋白的提取率為45.1%。

表4 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)