刁曉艷 何燕

(1.貴州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院心血管科，貴州 貴陽(yáng) 550004；2.貴州醫(yī)科大學(xué)分子生物學(xué)教研室，貴州 貴陽(yáng) 550004)

原發(fā)性高血壓(EH)是當(dāng)今社會(huì)的最常見(jiàn)疾病之一，它的發(fā)病機(jī)制一直處于研究和探討之中，它是由遺傳因素與環(huán)境因素相互作用所致的復(fù)雜性疾病[1]?；虻难芯坎粩噙M(jìn)展，但仍眾說(shuō)紛紜。近年來(lái)研究認(rèn)為細(xì)胞色素p450c17alpha蛋白(CYP17A1基因)多態(tài)性及成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子5(FGF5基因)多態(tài)性與EH的發(fā)病的有一定的相關(guān)性，但結(jié)論不一致[2-6，8-12]。本研究選擇貴州省貴陽(yáng)市部分漢族人群作為研究對(duì)象，探討他們的基因多態(tài)性與EH的發(fā)病關(guān)系，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1研究對(duì)象 EH組：選擇在貴州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院心內(nèi)科門(mén)診或住院部高血壓患者191例，血壓診斷標(biāo)準(zhǔn)按中國(guó)高血壓指南(2010年)標(biāo)準(zhǔn)；排除繼發(fā)性高血壓、瓣膜疾病、心肌病及肝、腎衰竭，孕婦、哺乳期婦女以及精神疾病史或?yàn)E用藥物者等；患者中男86例，女105例，平均年齡(58.86±11.67)歲。對(duì)照組：選擇在貴州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院門(mén)診的健康體檢者196例，無(wú)高血壓家族史，無(wú)各類(lèi)心血管、腦血管、腎、內(nèi)分泌等方面疾病的健康人群；患者中男85例，女111例，平均年齡(55.07±11.08)歲。兩組性別差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，年齡差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。兩組均為貴州籍漢族人，且互相均無(wú)血緣關(guān)系。

1.2方法

1.2.1生化指標(biāo)測(cè)定 清晨空腹抽取靜脈血檢測(cè)血脂(包括甘油三酯、總膽固醇)、血糖和尿酸。

1.2.2體質(zhì)量指數(shù)(BMI)計(jì)算 采用國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化方法測(cè)量身高、體重。BMI=體重/身高2(kg/m2)。

1.2.3基因分型 按經(jīng)典常規(guī)法(酚-氯仿法)抽提白細(xì)胞DNA，溶于TE；紫外吸收法定量后標(biāo)化為30 ng/μL，-40℃?zhèn)溆?。?yīng)用TaqMan 實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)對(duì)CYP17A1基因和FGF5基因進(jìn)行基因分型。PCR反應(yīng)為10 μL體系：DNA(濃度為30 ng/μL)1.5 μL，通用TaqMan PCR Master Mix 5 μL，雙蒸水3.25 μL，20×基因分型探針及引物0.25 μL。其中TaqMan PCR Master Mix、基因分型探針及引物均購(gòu)自美國(guó)ABI公司，探針?lè)謩e用FAM、VIC染料標(biāo)記。反應(yīng)條件為：95℃ 10 min活化AmpliTaq金牌酶后，95℃ 15 s，60℃ 1 min 20 s，共55個(gè)循環(huán)。儀器采用美國(guó)ABI公司生產(chǎn)的Step one Plus PCR儀，讀取FAM/VIC熒光判斷基因分析結(jié)果。FAM熒光探針識(shí)別T等位基因，VIC熒光探針識(shí)別C等位基因。每塊96孔板設(shè)3孔陰性對(duì)照，并隨機(jī)抽取5%樣本復(fù)測(cè)，一致性為100%。

2 結(jié) 果

2.1一般資料及臨床生化指標(biāo)比較 兩組年齡、血糖、甘油三酯及BMI比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 一般資料及臨床生化指標(biāo)比較

2.2基因型和等位基因頻率分布 兩組CYP17A1 C/T基因型及FGF5 T/A基因型的分布均符合Hardy-Weinberg遺傳平衡(P>0.05)。經(jīng)χ2檢驗(yàn)CYP17A1 C/T兩組間基因型分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，兩組間等位基因頻率分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。兩組間FGF5 T/A基因型及等位基因型差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表2 兩組CYP17A1 C/T與FGF5 T/A基因型和等位基因頻率比較[n(%)]

2.3原發(fā)性高血壓的患病風(fēng)險(xiǎn)分析 去掉性別、身高、體重、尿酸等混雜因素(P>0.05)進(jìn)行Logistic回歸分析，年齡、FGF5 TT基因型、CYP17 A1 TT基因型和空腹血糖高于正常標(biāo)準(zhǔn)的人群具有更高的患病風(fēng)險(xiǎn)，特別是當(dāng)空腹血糖高于正常標(biāo)準(zhǔn)時(shí)較對(duì)照組患病風(fēng)險(xiǎn)提高4倍。見(jiàn)表3。

表3 高血壓的患病風(fēng)險(xiǎn)分析

3 討 論

原發(fā)性高血壓的發(fā)病具有相當(dāng)?shù)倪z傳因素，但至今候選基因仍很多。近年發(fā)現(xiàn)4q21區(qū)域的FGF5(成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子5)基因內(nèi)的rs16998073位點(diǎn)主要是與鹽敏感性相關(guān)，該基因遺傳變異與血壓可能相關(guān)[7,12]。迄今為止，鹽敏感性高血壓的發(fā)病機(jī)制仍有爭(zhēng)論。有研究[11]認(rèn)為FGF5可以促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)和在多種細(xì)胞增殖，包括心肌細(xì)胞，能夠促進(jìn)心臟血管形成。然而，現(xiàn)在沒(méi)有證據(jù)證明這個(gè)基因與高血壓發(fā)病機(jī)理的關(guān)系。目前有研究[8]表明在韓國(guó)人中FGF5(rs16998073)遺傳變異與鹽敏感性密切相關(guān)。全基因組關(guān)聯(lián)分析(GWAS)研究認(rèn)為8個(gè)與血壓相關(guān)基因變異，其中包括FGF5(rs16998073)為一個(gè)可能性的因素。在日本人中認(rèn)為FGF5是與高血壓發(fā)病關(guān)系最明顯的基因位點(diǎn)。FGF5在日本人群中對(duì)收縮壓和舒張壓的影響是歐洲人群中1.4倍[10]。

CYP17A1基因編碼細(xì)胞色素P450c17alpha蛋白，影響類(lèi)固醇17alpha-羥化酶和17,20 裂解酶活性，在類(lèi)固醇的生存途徑的調(diào)控中起著重要的作用。CYP17A1rs11191548位點(diǎn)的突變可導(dǎo)致17alpha-羥化酶/17,20 裂解酶缺陷癥，從而損害腎上腺和性腺中類(lèi)固醇激素的合成，刺激腎上腺皮質(zhì)增生和17-脫氧類(lèi)固醇前體如孕酮、孕烯醇酮、脫氧皮質(zhì)酮、皮質(zhì)酮等發(fā)揮鹽皮質(zhì)激素功能，引起水鈉潴留，血壓增高[9]。近年來(lái)很多研究致力于rs11191548與高血壓相關(guān)性，但是結(jié)論有所爭(zhēng)議，C.Newton-Cheh[2]在歐洲家系及印度—亞洲家系的樣本進(jìn)行研究中認(rèn)為位于10q24．3的CYPl7A1基因的rs11191548與收縮壓(SBP)相關(guān)。K.W.Hong[3]等選擇了7 551例韓國(guó)人，發(fā)現(xiàn)CYPl7A1基因rs11191548位點(diǎn)攜帶C最小等位基因能顯著降低SBP、舒張壓(DBP)及高血壓的患病風(fēng)險(xiǎn)。而X.M.Li[5]研究結(jié)果表明CYPl7A1基因rs11191548位點(diǎn)攜帶C最小等位基因的能增加高血壓的患病風(fēng)險(xiǎn)。Y.H.Lin[6]與先前的歐洲人群和中國(guó)漢族人群不同，在畬族人群中未發(fā)現(xiàn)rslll91548突變與高血壓有顯著的相關(guān)性。

本研究結(jié)果顯示，CYPl7A1基因C/T基因型與等位基因頻率在貴州省漢族的EH組和對(duì)照組中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，均明顯高于對(duì)照組組。提示CYPl7A1基因C/T基因型與高血壓的發(fā)病可能相關(guān)。雖然本研究未得出FGF5基因多態(tài)性與高血壓的明顯關(guān)系，但在多元回歸分析中提示FGF5 TT基因型可能患高血壓的風(fēng)險(xiǎn)較大(P<0.05)，而且CYPl7A1 TT基因型 FGF5 TT基因型在高血壓的風(fēng)險(xiǎn)分析中同時(shí)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示兩種基因型同時(shí)存在時(shí)可能會(huì)增加高血壓的發(fā)病。在兩組FGF5的基因型和等位基因比較中也可看到TT基因型和T等位基因在EH組中較多，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，目前對(duì)FGF5基因與高血壓的關(guān)系大部分集中在與鹽敏感性的關(guān)系上，故推測(cè)是否與入組病人中鹽敏感性高血壓類(lèi)型少有關(guān)。

目前對(duì)上述兩種基因與高血壓的關(guān)系仍無(wú)定論，本研究結(jié)果顯示，年齡、空腹血糖、甘油三酯、體重指數(shù)是高血壓發(fā)病的危險(xiǎn)因素，但如果加入基因多態(tài)性的影響，就只顯示年齡和血糖與高血壓患病風(fēng)險(xiǎn)更高。總的看來(lái)高血壓的發(fā)病機(jī)制很復(fù)雜，遺傳、環(huán)境及獲得性因素對(duì)高血壓發(fā)病均有關(guān)系。本研究也進(jìn)一步提示對(duì)高血壓的基因研究還存在很多復(fù)雜性，包括神經(jīng)體液因素對(duì)高血壓的發(fā)病機(jī)制的影響。