占麗琴，彭玲娜，馬杰，羅艷，丁野，孫輝

湖南省藥品檢驗檢測研究院，湖南 長沙 410001

黃連上清丸由黃連、梔子（姜制）、連翹、炒蔓荊子、防風(fēng)、荊芥穗、白芷、黃芩、菊花、薄荷、酒大黃、黃柏（酒炒）、桔梗、川芎、石膏、旋覆花、甘草共十七味藥材組成，具清風(fēng)散熱、瀉火止痛的功能，主要用于風(fēng)熱上攻、肺胃熱盛所致的頭暈?zāi)垦?、暴發(fā)火眼等收載于《中國藥典》2020 年版一部［1］?，F(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)中均無顯微鑒別項目，而本品劑型中濃縮丸為其中九味處方藥材生粉投料，水丸、水蜜丸、大蜜丸均為全處方生粉投料。本研究對黃連上清丸進(jìn)行顯微鑒別，為其質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 材料

Leica DM2500 顯微鏡，水合氯醛試液為本實驗現(xiàn)配，對照藥材黃連（批號121752-201801）、梔子（批號120986-201610）、連翹（批號120908-201817）、防風(fēng)（批號120908-201817）、荊芥穗（批號121424-201505）、白芷（批號120945-201510）、黃芩（批號120955-201810）、菊花（批號121384-201805）、薄荷（批號120916-201812）、大黃（批號120984-201202）、黃柏（批號121510-201807）、桔梗（批號121028-202113）、川芎（批號120918-201813）、旋覆花（批號121125-201904）、甘草（批號120904-202021）共15 味，均購自中國食品藥品檢定研究院，試劑均為分析純。黃連上清丸來自3個生產(chǎn)企業(yè)，共10 個批號，詳細(xì)信息見表1。

表1 黃連上清丸樣品信息

2 方法與結(jié)果

2.1 顯微鑒別粉末特征提取

通過文獻(xiàn)查詢［2-5］，及實驗觀察，篩選出黃連上清丸中有專屬性的粉末特征，見表2。

表2 黃連上清丸專屬性粉末特征

2.2 顯微鑒別

根據(jù)黃連上清丸的處方及制法，選擇合適的方法處理樣品：（1）蜜丸，取樣品適量，切開，用水脫蜜后，取沉淀物適量制片，觀察。（2）水丸、濃縮丸，取樣品適量，研細(xì)，取粉末制片，觀察。粉末特征如下［1］。（1）晶纖維，成束，鮮黃色，周圍細(xì)胞含草酸鈣方晶（黃柏）。淡黃色或近無色，壁厚，微木化，周圍薄壁細(xì)胞含草酸鈣方晶（甘草）。（2）草酸鈣簇晶，草酸鈣簇晶直徑20～160 μm，有的至190 μm（酒大黃）。（3）石細(xì)胞，鮮黃色呈分枝狀，壁厚，層紋明顯；有的呈大型纖維狀，長達(dá)900 μm（黃柏）。石細(xì)胞類圓形、類方形或長方形，壁較厚或深厚（黃芩）。鮮黃色，單個散在或數(shù)個成群。呈類圓形、類方形或不規(guī)則形，邊緣大多不平整或有凹凸，壁厚，有的層紋明顯，紋孔小，孔溝細(xì)（黃連）。（4）種皮石細(xì)胞，黃色或淡棕色，長多角形、長方形或形狀不規(guī)則，壁厚，紋孔甚大，胞腔棕黃色（梔子）。（5）冠毛，多列性非腺毛，邊緣細(xì)胞稍向外突出（旋覆花）。（6）韌皮纖維，單個散在或數(shù)個成束，梭形，壁厚，孔溝細(xì)（黃芩）。鮮黃色，多成束，較粗短，呈紡錘形或長梭形，壁厚，紋孔較稀，孔溝較粗（黃連）。（7）晶體，半透明，斷面具絹絲樣光澤（石膏）。（8）花粉粒，類球形，直徑32～37 μm，表面有斷刺，具3 孔溝（菊花、旋覆花）。（9）非腺毛，1～8 細(xì)胞，彎曲，壁厚，具壁疣突（炒蔓荊子、荊芥穗、薄荷、旋覆花）。（10）木纖維，成束，較細(xì)長，壁稍厚，木化紋孔稀疏（黃連、黃芩）。（11）淀粉粒，單粒圓球形、多角形、橢圓形或盔帽形，直徑3～25 μm（白芷、黃芩、黃連、酒大黃、川芎）；復(fù)粒由2～7 分粒組成（黃芩、酒大黃、川芎、）；復(fù)粒由2～12 分粒組成（白芷）。

取10 批次黃連上清丸分別制片10 片（5 片水制片，5 片水合氯醛制片），觀察粉末特征，統(tǒng)計并計算每個顯微特征出現(xiàn)的平均次數(shù)，平均次數(shù)≥10 為易見、5 ≤平均次數(shù)＜10 為常見、1 ≤平均次數(shù)＜5 為可見［6］。結(jié)果石膏晶體、大黃的草酸鈣簇晶平均次數(shù)都＞10 次/片，為易見；白芷的淀粉粒、黃連的韌皮纖維、黃芩的韌皮纖維、黃柏的晶纖維、黃柏石細(xì)胞、甘草的晶纖維平均次數(shù)都＞5 次/片，為常見；黃連的石細(xì)胞、梔子的種皮石細(xì)胞、旋覆花的冠毛平均次數(shù)都＞1 次/片，為可見。

2.3 顯微鑒別標(biāo)準(zhǔn)

通過實驗觀察得到黃連上清丸粉末特征，與對照藥材粉末特征進(jìn)行比對，結(jié)合實驗中檢出粉末特征的難易程度，選擇特征唯一、檢出率較高的粉末特征，作為黃連上清丸的顯微鑒別依據(jù)。結(jié)合文獻(xiàn)調(diào)研［7-8］，擬定顯微鑒別標(biāo)準(zhǔn)如下：（大蜜丸、水蜜丸、水丸）纖維束鮮黃色，周圍細(xì)胞含草酸鈣方晶，形成晶纖維，含晶細(xì)胞壁木化增厚；石細(xì)胞鮮黃色，呈分枝狀，壁厚，層紋明顯，有的呈大型纖維狀，長達(dá)900 μm（黃柏）。纖維束淡黃色或近無色，周圍薄壁細(xì)胞含草酸鈣方晶，形成晶纖維（甘草）。草酸鈣簇晶大，直徑60～140 μm（酒大黃）。韌皮纖維鮮黃色，多成束，呈紡錘形或長梭形，壁厚，紋孔較稀，孔溝較粗（黃連）。種皮石細(xì)胞黃色或淡棕色，長多角形、長方形或形狀不規(guī)則，壁厚，紋孔甚大，胞腔棕黃色［梔子（姜制）］。冠毛為多列性非腺毛，邊緣細(xì)胞稍向外突出（旋覆花）。韌皮纖維淡黃色，梭形，壁厚，孔溝細(xì)（黃芩）。晶體半透明，斷面具絹絲樣光澤（石膏）。淀粉粒復(fù)粒由2～12 分粒組成（白芷）。粉末特征見圖1。

圖1 黃連上清丸粉末特征圖

黃連上清丸（濃縮丸）工藝中菊花、蔓荊子、黃芩、甘草均煎煮后浸膏入藥，故不考慮黃芩、甘草的粉末特征作為顯微鑒別依據(jù)。

2.4 樣品篩查

按照擬定的顯微鑒別標(biāo)準(zhǔn)共篩查67 批次黃連上清丸，樣品均來自國家抽檢項目，覆蓋32 個生產(chǎn)企業(yè)，結(jié)果在不同的生產(chǎn)企業(yè)樣品中均可見標(biāo)準(zhǔn)中的粉末顯微特征，說明樣品質(zhì)量在顯微鑒別結(jié)果上無明顯差異。

3 討論

3.1 黃連上清丸粉末特征的篩選

黃連上清丸（大蜜丸、水蜜丸、水丸）工藝中黃連生粉入藥，黃連藥典來源有味連、雅連、云連三種，其中味連、雅連含有石細(xì)胞，云連不含石細(xì)胞，故最后黃連的石細(xì)胞特征不作為顯微鑒別依據(jù)。粉末特征非腺毛、淀粉粒單粒、花粉粒、木纖維，均存在藥材間的干擾，不宜列入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

3.2 小結(jié)

本研究中黃連上清丸共十七味處方，其中大蜜丸、水蜜丸、水丸標(biāo)準(zhǔn)確定九味藥材的專屬性粉末顯微特征，濃縮丸確定七味藥材的專屬性粉末顯微特征。

為進(jìn)一步控制本品的質(zhì)量，本課題正在同步進(jìn)行其他理化鑒別及含量測定研究，完善質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為黃連上清丸質(zhì)量控制提供依據(jù)。