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        黃連上清丸的顯微鑒別

        2021-03-10 04:05:32占麗琴彭玲娜馬杰羅艷丁野孫輝
        藥品評價(jià) 2021年24期
        關(guān)鍵詞:草酸鈣黃柏黃連

        占麗琴,彭玲娜,馬杰,羅艷,丁野,孫輝

        湖南省藥品檢驗(yàn)檢測研究院,湖南 長沙 410001

        黃連上清丸由黃連、梔子(姜制)、連翹、炒蔓荊子、防風(fēng)、荊芥穗、白芷、黃芩、菊花、薄荷、酒大黃、黃柏(酒炒)、桔梗、川芎、石膏、旋覆花、甘草共十七味藥材組成,具清風(fēng)散熱、瀉火止痛的功能,主要用于風(fēng)熱上攻、肺胃熱盛所致的頭暈?zāi)垦?、暴發(fā)火眼等收載于《中國藥典》2020 年版一部[1]?,F(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)中均無顯微鑒別項(xiàng)目,而本品劑型中濃縮丸為其中九味處方藥材生粉投料,水丸、水蜜丸、大蜜丸均為全處方生粉投料。本研究對黃連上清丸進(jìn)行顯微鑒別,為其質(zhì)量控制提供依據(jù)。

        1 材料

        Leica DM2500 顯微鏡,水合氯醛試液為本實(shí)驗(yàn)現(xiàn)配,對照藥材黃連(批號121752-201801)、梔子(批號120986-201610)、連翹(批號120908-201817)、防風(fēng)(批號120908-201817)、荊芥穗(批號121424-201505)、白芷(批號120945-201510)、黃芩(批號120955-201810)、菊花(批號121384-201805)、薄荷(批號120916-201812)、大黃(批號120984-201202)、黃柏(批號121510-201807)、桔梗(批號121028-202113)、川芎(批號120918-201813)、旋覆花(批號121125-201904)、甘草(批號120904-202021)共15 味,均購自中國食品藥品檢定研究院,試劑均為分析純。黃連上清丸來自3個(gè)生產(chǎn)企業(yè),共10 個(gè)批號,詳細(xì)信息見表1。

        表1 黃連上清丸樣品信息

        2 方法與結(jié)果

        2.1 顯微鑒別粉末特征提取

        通過文獻(xiàn)查詢[2-5],及實(shí)驗(yàn)觀察,篩選出黃連上清丸中有專屬性的粉末特征,見表2。

        表2 黃連上清丸專屬性粉末特征

        2.2 顯微鑒別

        根據(jù)黃連上清丸的處方及制法,選擇合適的方法處理樣品:(1)蜜丸,取樣品適量,切開,用水脫蜜后,取沉淀物適量制片,觀察。(2)水丸、濃縮丸,取樣品適量,研細(xì),取粉末制片,觀察。粉末特征如下[1]。(1)晶纖維,成束,鮮黃色,周圍細(xì)胞含草酸鈣方晶(黃柏)。淡黃色或近無色,壁厚,微木化,周圍薄壁細(xì)胞含草酸鈣方晶(甘草)。(2)草酸鈣簇晶,草酸鈣簇晶直徑20~160 μm,有的至190 μm(酒大黃)。(3)石細(xì)胞,鮮黃色呈分枝狀,壁厚,層紋明顯;有的呈大型纖維狀,長達(dá)900 μm(黃柏)。石細(xì)胞類圓形、類方形或長方形,壁較厚或深厚(黃芩)。鮮黃色,單個(gè)散在或數(shù)個(gè)成群。呈類圓形、類方形或不規(guī)則形,邊緣大多不平整或有凹凸,壁厚,有的層紋明顯,紋孔小,孔溝細(xì)(黃連)。(4)種皮石細(xì)胞,黃色或淡棕色,長多角形、長方形或形狀不規(guī)則,壁厚,紋孔甚大,胞腔棕黃色(梔子)。(5)冠毛,多列性非腺毛,邊緣細(xì)胞稍向外突出(旋覆花)。(6)韌皮纖維,單個(gè)散在或數(shù)個(gè)成束,梭形,壁厚,孔溝細(xì)(黃芩)。鮮黃色,多成束,較粗短,呈紡錘形或長梭形,壁厚,紋孔較稀,孔溝較粗(黃連)。(7)晶體,半透明,斷面具絹絲樣光澤(石膏)。(8)花粉粒,類球形,直徑32~37 μm,表面有斷刺,具3 孔溝(菊花、旋覆花)。(9)非腺毛,1~8 細(xì)胞,彎曲,壁厚,具壁疣突(炒蔓荊子、荊芥穗、薄荷、旋覆花)。(10)木纖維,成束,較細(xì)長,壁稍厚,木化紋孔稀疏(黃連、黃芩)。(11)淀粉粒,單粒圓球形、多角形、橢圓形或盔帽形,直徑3~25 μm(白芷、黃芩、黃連、酒大黃、川芎);復(fù)粒由2~7 分粒組成(黃芩、酒大黃、川芎、);復(fù)粒由2~12 分粒組成(白芷)。

        取10 批次黃連上清丸分別制片10 片(5 片水制片,5 片水合氯醛制片),觀察粉末特征,統(tǒng)計(jì)并計(jì)算每個(gè)顯微特征出現(xiàn)的平均次數(shù),平均次數(shù)≥10 為易見、5 ≤平均次數(shù)<10 為常見、1 ≤平均次數(shù)<5 為可見[6]。結(jié)果石膏晶體、大黃的草酸鈣簇晶平均次數(shù)都>10 次/片,為易見;白芷的淀粉粒、黃連的韌皮纖維、黃芩的韌皮纖維、黃柏的晶纖維、黃柏石細(xì)胞、甘草的晶纖維平均次數(shù)都>5 次/片,為常見;黃連的石細(xì)胞、梔子的種皮石細(xì)胞、旋覆花的冠毛平均次數(shù)都>1 次/片,為可見。

        2.3 顯微鑒別標(biāo)準(zhǔn)

        通過實(shí)驗(yàn)觀察得到黃連上清丸粉末特征,與對照藥材粉末特征進(jìn)行比對,結(jié)合實(shí)驗(yàn)中檢出粉末特征的難易程度,選擇特征唯一、檢出率較高的粉末特征,作為黃連上清丸的顯微鑒別依據(jù)。結(jié)合文獻(xiàn)調(diào)研[7-8],擬定顯微鑒別標(biāo)準(zhǔn)如下:(大蜜丸、水蜜丸、水丸)纖維束鮮黃色,周圍細(xì)胞含草酸鈣方晶,形成晶纖維,含晶細(xì)胞壁木化增厚;石細(xì)胞鮮黃色,呈分枝狀,壁厚,層紋明顯,有的呈大型纖維狀,長達(dá)900 μm(黃柏)。纖維束淡黃色或近無色,周圍薄壁細(xì)胞含草酸鈣方晶,形成晶纖維(甘草)。草酸鈣簇晶大,直徑60~140 μm(酒大黃)。韌皮纖維鮮黃色,多成束,呈紡錘形或長梭形,壁厚,紋孔較稀,孔溝較粗(黃連)。種皮石細(xì)胞黃色或淡棕色,長多角形、長方形或形狀不規(guī)則,壁厚,紋孔甚大,胞腔棕黃色[梔子(姜制)]。冠毛為多列性非腺毛,邊緣細(xì)胞稍向外突出(旋覆花)。韌皮纖維淡黃色,梭形,壁厚,孔溝細(xì)(黃芩)。晶體半透明,斷面具絹絲樣光澤(石膏)。淀粉粒復(fù)粒由2~12 分粒組成(白芷)。粉末特征見圖1。

        圖1 黃連上清丸粉末特征圖

        黃連上清丸(濃縮丸)工藝中菊花、蔓荊子、黃芩、甘草均煎煮后浸膏入藥,故不考慮黃芩、甘草的粉末特征作為顯微鑒別依據(jù)。

        2.4 樣品篩查

        按照擬定的顯微鑒別標(biāo)準(zhǔn)共篩查67 批次黃連上清丸,樣品均來自國家抽檢項(xiàng)目,覆蓋32 個(gè)生產(chǎn)企業(yè),結(jié)果在不同的生產(chǎn)企業(yè)樣品中均可見標(biāo)準(zhǔn)中的粉末顯微特征,說明樣品質(zhì)量在顯微鑒別結(jié)果上無明顯差異。

        3 討論

        3.1 黃連上清丸粉末特征的篩選

        黃連上清丸(大蜜丸、水蜜丸、水丸)工藝中黃連生粉入藥,黃連藥典來源有味連、雅連、云連三種,其中味連、雅連含有石細(xì)胞,云連不含石細(xì)胞,故最后黃連的石細(xì)胞特征不作為顯微鑒別依據(jù)。粉末特征非腺毛、淀粉粒單粒、花粉粒、木纖維,均存在藥材間的干擾,不宜列入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

        3.2 小結(jié)

        本研究中黃連上清丸共十七味處方,其中大蜜丸、水蜜丸、水丸標(biāo)準(zhǔn)確定九味藥材的專屬性粉末顯微特征,濃縮丸確定七味藥材的專屬性粉末顯微特征。

        為進(jìn)一步控制本品的質(zhì)量,本課題正在同步進(jìn)行其他理化鑒別及含量測定研究,完善質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),為黃連上清丸質(zhì)量控制提供依據(jù)。

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