李 南

（河南中醫(yī)藥大學(xué)，河南鄭州 450046）

虎尾輪根為豆科兔尾草屬植物貓尾射Uraria crinita（L.）Desv.ex DC 的根［1］。主要分布于河南、云南、湖北、廣東等省。味甘性溫，入腎、肺、胃三經(jīng)，在民間廣泛應(yīng)用，具有益腎強(qiáng)腰，理氣化痰的功效。主治腰背酸痛、遺精、氣滯痰飲?！度荼静荨?載有“益腎滋肝，治腎虛遺精”。其主要化學(xué)成分為黃酮、香豆素、有機(jī)酸、三萜、多糖、甾體類［2-3］。王燕燕等［4］研究表明其具有拮抗腎陽(yáng)虛小鼠生殖器官萎縮、抗疲勞、增強(qiáng)免疫力、提高小鼠應(yīng)激能力的作用。為闡明虎尾輪根抗腎間質(zhì)纖維化的物質(zhì)基礎(chǔ)，尋找抗腎間質(zhì)纖維化活性天然化合物。本研究對(duì)虎尾輪根乙醇提取物的化學(xué)成分進(jìn)行研究，從中分離得到16 個(gè)化合物，除化合物3 外，均為首次從虎尾輪根中分離得到?；衔?、4～5、7～8、11～12、14 對(duì)腎間質(zhì)纖維化指標(biāo)有不同程度的抑制作用。本研究豐富了虎尾輪根化學(xué)成分的資源庫(kù)，以期為后續(xù)對(duì)其腎間質(zhì)纖維化的研究提供參考。

1 材料

Bruker AV 400 型核磁共振波譜儀（瑞士Bruker 公司）；Sephadex LH-20（美國(guó)Pharmacia 公司）；OHAUS CP214 型電子天平（奧豪斯儀器有限公司）；柱色譜硅膠（100～200、300～400 目，青島海洋化工廠）；GF254薄層硅膠板（青島海洋化工廠）；UPLC-T5291 型高分辨質(zhì)譜儀（美國(guó)Agilent 公司）；膠原纖維Ⅳ、Ⅲ型前膠原蛋白、層粘連蛋白（美國(guó)Gibco 公司）；ZK-31D 型暗箱式紫外分析儀（上海電光儀器廠）；RET1200 型暗箱式紫外分析儀（上海顧村電光儀器有限公司）；ADP440 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（英國(guó)Bellingham Stanley 公司）；RE-3506A 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）；SephadeX LH-20（美國(guó)GE Pharmacia 公司）。噻唑藍(lán)（MTT，美國(guó)Amresco 公司）；DMEM培養(yǎng)基（美國(guó)Gibco 公司）；二甲基亞砜（DMSO，上海阿達(dá)瑪斯試劑有限公司）；順鉑（上海麥克林試劑公司，批號(hào)C18151213）。提取分離所用溶劑均為分析純。

虎尾輪根采自河南省鄭州市，經(jīng)河南中醫(yī)藥大學(xué)趙獻(xiàn)敏副教授鑒定為虎尾輪Uraria crinita（L.）Desv.ex DC 的根，標(biāo)本收藏于河南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院標(biāo)本室。

2 提取與分離

取干燥虎尾輪根36.4 kg，加入95%乙醇加熱回流提取3 次（時(shí)間分別為2、2、1 h），提取液混合后，經(jīng)減壓濃縮回收溶劑，得虎尾輪根提取物8.6 kg。將提取物超聲溶解與水中，依次用石油醚、二氯甲烷、丙酮、正丁醇萃取，取上述萃取物濃縮得到石油醚部分（Fr.A，273.5 g）、二氯甲烷部分（Fr.B，251.6 g）、丙酮部分（Fr.C，172.4 g）、正丁醇部分（Fr.D，273.5 g）。將Fr.B 用硅膠柱色譜進(jìn)行分離，以石油醚-乙酸乙酯（100 ∶0～80 ∶20～50 ∶50～20 ∶80～0 ∶100）梯度洗脫，通過(guò)薄層硅膠板分析，合并相同組分，得到Fr.B-1～Fr.B-9。Fr.B-2 過(guò)硅膠色譜柱，以石油醚-乙酸乙酯（100 ∶0～60 ∶40～40 ∶60～0 ∶100）梯度洗脫，得到11 個(gè)組分Fr.B-2-1～Fr.B-2-11。Fr.B-2-2 經(jīng)硅膠柱色譜分離得化合物1（16 mg）。Fr.B-2-5 經(jīng)Sephadex LH-20 分離得到化合物4（26 mg）、8（23 mg）；Fr.B-2-9 經(jīng)重結(jié)晶得到化合物3（29 mg）。Fr.B-7 過(guò)硅膠色譜柱，以石油醚-乙酸乙酯（80 ∶20～50 ∶50～20 ∶80）梯度洗脫，得到9 個(gè)組分 Fr.B-7-1～Fr.B-7-9。Fr.B-7-3 經(jīng)Sephadex LH-20 分離得到化合物2（24 mg）、7（27 mg）；Fr.B-7-5 經(jīng)重結(jié)晶得到化合物11（23 mg）。將Fr.C 用硅膠柱色譜進(jìn)行分離，以石油醚-乙酸乙酯（80 ∶20～50 ∶50～20 ∶80）梯度洗脫，通過(guò)薄層硅膠板分析，合并相同組分，得到Fr.C-1～Fr.C-11。Fr.C-3 經(jīng)Sephadex LH-20 反復(fù)純化得化合物5（19 mg）。Fr.C-4 經(jīng)硅膠色譜柱分離，以二氯甲烷-甲醇（100 ∶0～70 ∶30～30 ∶70～0 ∶100）梯度洗脫，得到8 個(gè)組分Fr.C-4-1～Fr.C-4-8，F(xiàn)r.C-4-2經(jīng)硅膠色譜柱分離，以二氯甲烷-甲醇（50 ∶50）洗脫，得化合物 15（22 mg）；Fr.C-4-5 經(jīng)Sephadex LH-20 分離得化合物14（26 mg）、16（34 mg）。Fr.C-6 經(jīng)硅膠色譜柱分離，以二氯甲烷甲醇（100 ∶0～70 ∶30～30 ∶70～0 ∶100）梯度洗脫，得到10 個(gè)組分Fr.C-6-1～Fr.C-6-10，F(xiàn)r.C-6-2經(jīng)硅膠色譜柱分離，以二氯甲烷-甲醇（10 ∶90～90 ∶10）梯度洗脫，得化合物6（22 mg）、10（25 mg）；Fr.C-6-4 經(jīng)重結(jié)晶得化合物9（24 mg）、12（22 mg）；Fr.C-6-7 經(jīng)Sephadex LH-20 分離得化合物13（32 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：黃色粉末（丙酮），ESI-MS m／z：223.4 ［M+Na］+。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：7.79（1H，d，J ＝2.4 Hz，H-5′），7.36（1H，d，J ＝2.4 Hz，H-7′），6.58（1H，dd，J ＝8.4，2.4 Hz，H-6′），5.06（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-1′a），4.39（1H，m，H-5），4.35（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-1′e），4.05（2H，q，J ＝8.4 Hz，H-2″），2.42（2H，m，H-3），2.09（2H，m，H-4），1.42（3H，t，J ＝7.5 Hz，H-3″）；13C-NMR（150 MHz，DMSO-d6） δ：172.6（C-2），29.5（C-3），24.2（C-4），61.6（C-5），49.6（C-1′），179.3（C-2′），148.5（C-3′），151.7（C-5′），114.5（C-6′），122.4（C-7′），169.5（C-1″），63.7（C-2″），14.8（C-3″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［5］基本一致，故鑒定為divaricataester A

化合物2：黃色粉末（丙酮），ESI-MS m／z：296.3 ［M+Na］+。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：6.95（2H，d，J ＝8.4 Hz，H-2″，6″），6.85（1H，d，J ＝2.4 Hz，H-3），6.68（2H，d，J ＝8.4 Hz，H-3″，5″），6.08（1H，d，J ＝2.4 Hz，H-4），4.43（2H，t，J ＝8.4 Hz，H-1′），4.17（2H，s，H-6），3.52（2H，q，J ＝8.4 Hz，H-7），3.15（2H，t，J ＝8.4 Hz，H-2′），1.18（3H，t，J ＝8.4 Hz，H-8）；13C-NMR（150 MHz，DMSO-d6）δ：133.1（C-1），1252.6（C-3），109.7（C-4），140.9（C-5），64.2（C-6），65.4（C-7），14.6（C-8），180.6（C-9），41.3（C-1′），36.8（C-2′），128.6（C-1″），129.7（C-2″），114.2（C-3″），153.1（C-4″），114.2（C-5″），129.7（C-6″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［6］基本一致，故鑒定為pyrrolezanthine-6-ethyl ether。

化合物3：無(wú)色針晶（甲醇），ESI-MS m／z：443.1 ［M+Na］+。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：13.16（d，5-OH），11.17（d，7-OH），6.79（d，J ＝8.4 Hz，H-6′），6.73（d，J ＝8.4 Hz，H-5′），5.97（2H，d，J ＝2.4 Hz，H-6，H-8），5.91（2H，s，-OCH2O-），4.47（dd，J ＝10.2，8.4 Hz，H-2），4.41（dd，J ＝5.6，8.4 Hz，H-2），4.29（dd，J ＝ 10.2，8.4 Hz，H-3），3.39（s，-OCH3）；13C-NMR（150 MHz，DMSO-d6） δ：69.5（C-2），48.1（C-3），196.5（C-4），163.2（C-5），97.1（C-6），167.1（C-7），94.8（C-8），162.7（C-9），102.6（C-10），1119.5（C-1′），140.5（C-2′），138.2（C-3′），150.2（C-4′），100.8（C-5′），124.1（C-6′），101.7（-OCH2O-），60.2（-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［7］基本一致，故鑒定為5，7-二羥基-2′-甲氧基-3′，4′-亞甲基二氧異黃酮。

化合物4：無(wú)色粉末（丙酮），ESI-MS m／z：235.9 ［M+Na］+。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：8.24（1H，d，J ＝2.4 Hz，H-6），8.06（1H，dd，J ＝8.4，2.4 Hz，H-4），7.12（1H，d，J ＝2.4 Hz，H-3），6.58（1H，s，H-8），4.05（3H，s，2-OCH3），2.57（3H，s，H-2′），2.31（3H，s，H-10），1.95（3H，s，H-11）；13C-NMR（150 MHz，DMSO-d6） δ：157.2（C-1），129.8（C-2），125.3（C-3），134.5（C-4），129.1（C-5），133.4（C-6），197.3（C-7），110.9（C-8），163.4（C-9），29.1（C-10），26.1（C-11），191.8（C-1′），19.7（C-2′），55.7（-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［8］基本一致，故鑒定為dehydroespeleton。

化合物5：無(wú)色結(jié)晶（丙酮），ESI-MS m／z：435.1 ［M+Na］+。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：5.36（1H，t，J ＝8.4 Hz，H-6），5.08（1H，m，H-11），4.93（1H，d，J ＝2.4 Hz，H-12），3.48（1H，m，H-3），0.98（3H，d，J ＝8.4 Hz，H-21），0.87（3H，s，H-19），0.79（3H，d，J ＝8.4 Hz，H-26），0.75（3H，d，J ＝2.4 Hz，H-27），0.73（3H，t，J ＝8.4 Hz，H-29），0.72（3H，s，H-18）；13C-NMR（150 MHz，DMSO-d6）δ：38.2（C-1），32.5（C-2），72.3（C-3），41.7（C-4），141.3（C-5），122.5（C-6），24.9（C-7），51.7（C-8），50.9（C-9），36.2（C-10），130.2（C-11），137.2（C-12），41.6（C-13），57.2（C-14），23.6（C-15），29.1（C-16），55.4（C-17），11.9（C-18），20.3（C-19），35.8（C-20），18.5（C-21），40.6（C-22），26.1（C-23），45.6（C-24），28.7（C-25），20.3（C-26），18.6（C-27），23.1（C-28），11.7（C-29）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9］基本一致，故鑒定為pleuchiol。

化合物6：白色形粉末（甲醇），ESI-MS m／z：373.2 ［M+Na］+。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：8.13（2H，d，J ＝8.4 Hz，H-2″，6″），8.09（2H，d，J ＝8.4 Hz，H-2′，6′），7.58（2H，dd，J ＝8.4，2.4 Hz，H-4′，4″），7.41（4H，m，H-3′，5′，3″，5″），6.08（2H，m，H-5，6），6.05（1H，ddd，J ＝8.4，2.4，2.4 Hz，H-4），5.73（1H，ddd，J ＝10.2，8.4，2.4 Hz，H-3），5.08（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-7α），5.04（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-7β），4.72（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-2）；13C-NMR（150 MHz，DMSO-d6） δ：134.8（C-1），69.5（C-2），75.3（C-3），123.7（C-4），1249.3（C-5），125.2（C-6），65.1（C-7），130.2（C-1′），130.1（C-2′），129.5（C-3′），132.6（C-4′），129.5（C-5′），130.1（C-6′），167.2（C-7′），129.3（C-1″），130.2（C-2″），129.7（C-3″），132.1（C-4″），129.7（C-5″），130.2（C-6″），167.2（C-7″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10］基本一致，故鑒定為1，6-desoxypipoxide。

化合物7：白色粉末（丙酮），ESI-MS m／z：290.2 ［M+Na］+。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：9.31（1H，s，4′-OH），7.48（2H，d，J ＝8.4 Hz，H-2，6），7.41（1H，dd，J ＝8.4，2.4 Hz，H-4），7.39（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-7′），7.36（2H，dd，J ＝8.4，2.4 Hz，H-3，5），6.92（2H，d，J ＝2.4 Hz，H-2′，6′），6.72（2H，d，J ＝2.4 Hz，H-3′，5′），6.57（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-8′），5.68（1H，s，NH），3.29（2H，t，J ＝8.4 Hz，H-8），2.72（2H，t，J ＝8.4 Hz，H-7）；13CNMR（150 MHz，DMSO-d6） δ：134.3（C-1），128.7（C-2），130.1（C-3），131.6（C-4），130.1（C-5），128.7（C-6），33.6（C-7），39.7（C-8），130.4（C-1′），130.2（C-2′），114.6（C-3′），156.2（C-4′），114.6（C-5′），130.2（C-6′），139.4（C-7′），121.7（C-8′），164.7（C-9′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10］基本一致，故鑒定為p-coumaroyl-β-phenethylamine。

化合物8：白色粉末（丙酮），ESI-MS m／z：483.7 ［M+Na］+。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：7.51（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-7?），7.12（1H，brs，H-2?），6.91（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-6?），6.73（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-5?），6.57（2H，brs，H-2，5），6.49（1H，dd，J ＝8.4，2.4 Hz，H-6），6.27（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-8?），4.32（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-1′），4.18（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-1″），2.72（2H，m，H-7）；13C-NMR（150 MHz，DMSO-d6） δ：131.2（C-1），117.3（C-2），146.2（C-3），144.5（C-4），115.7（C-5），119.6（C-6），34.8（C-7），69.4（C-8），102.6（C-1′），72.3（C-2′），77.6（C-3′），68.2（C-4′），76.2（C-5′），68.3（C-6′），104.6（C-1″），73.5（C-2″），76.9（C-3″），69.2（C-4″），76.5（C-5″），60.8（C-6″），125.8（C-1?），115.6（C-2?），146.1（C-3?），149.2（C-4?），117.2（C-5?），122.3（C-6?），145.3（C-7?），114.1（C-8?），167.3（C-9?）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［11］基本一致，故鑒定為isolugrandoside。

化合物9：黃色粉末（丙酮），ESI-MS m／z：462.7 ［M+Na］+。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：9.26（1H，brs，7-OH），6.93（1H，d，J ＝10.2 Hz，H-6′），6.72（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-5），6.61（1H，d，J ＝2.4 Hz，H-3′），6.51（1H，dd，J ＝10.2，2.4 Hz，H-5′），6.31（1H，dd，J ＝8.4，2.5 Hz，H-6），6.20（1H，d，J ＝2.4 Hz，H-8），4.08（1H，dq，J ＝8.4，2.4 Hz，H-2β），4.02（1H，t，J ＝8.4 Hz，H-2α），3.27（1H，m，H-3α），3.76（3H，s，2′-OCH3），2.75（1H，dd，J ＝8.4，2.4 Hz，H-4β），3.72（3H，s，-OCH3），2.68（1H，ddd，J ＝10.2，8.4，2.4 Hz，H-4α）；13C-NMR（150 MHz，DMSO-d6） δ：70.2（C-2），30.6（C-3），29.8（C-4），128.4（C-5），107.6（C-6），160.2（C-7），103.6（C-8），157.1（C-9），113.7（C-10），119.5（C-1′），155.2（C-2′），99.2（C-3′），158.3（C-4′），105.3（C-5′），128.2（C-6′），55.6（-OCH3），55.1（-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［12］基本一致，故鑒定為紫苜蓿烷。

化合物10：無(wú)色結(jié)晶（丙酮），ESI-MS m／z：295.2 ［M+Na］+。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：12.41（1H，brs，5-OH），9.83（1H，br s，4′-OH），6.79（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-6′），6.40（1H，d，J ＝2.4 Hz，H-3′），6.28（1H，dd，J ＝8.4，2.4 Hz，H-5′），5.68（2H，brs，H-6，8），4.46（1H，t，J ＝8.4 Hz，H-2α），4.30（1H，dd，J ＝8.4，2.4 Hz，H-2β），4.09（1H，dd，J ＝8.4，2.4 Hz，H-3β），3.72（3H，s，7-OCH3）；13CNMR（150 MHz，DMSO-d6） δ：69.4（C-2），45.2（C-3），196.2（C-4），163.2（C-5），96.5（C-6），163.8（C-7），96.2（C-8），163.4（C-9），100.2（C-10），113.6（C-1′），159.1（C-2′），99.5（C-3′），157.6（C-4′），106.3（C-5′），129.2（C-6′），55.2（-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］基本一致，故鑒定二氫木豆異黃酮。

化合物11：黃色粉末（丙酮），ESI-MS m／z：409.3 ［M+Na］+。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：7.51（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-7），7.40（1H，d，J ＝2.4 Hz，H-2），7.31（1H，d，J ＝2.4 Hz，H-2′），7.18（1H，s，H-7′），6.95（1H，dd，J ＝8.4，2.4 Hz，H-6′），6.92（1H，dd，J ＝8.4，2.4 Hz，H-6），6.68（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-5′），6.62（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-5），6.51（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-8）；13C-NMR（150 MHz，DMSO-d6）δ：127.6（C-1），108.6（C-2），149.2（C-3），144.2（C-4），112.8（C-5），121.8（C-6），148.3（C-7），117.2（C-8），167.6（C-9），55.4（3-OCH3），123.7（C-1′），113.2（C-2′），147.1（C-3′），139.4（C-4′），115.1（C-5′），124.2（C-6′），148.2（C-7′），139.6（C-8′），165.2（C-9′），55.4（3′-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］基本一致，故鑒定為8-O-4-dehydrodiferulic acid。

化合物12：白色晶體（丙酮），ESI-MS m／z：244.1 ［M+Na］+。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：7.22（1H，dd，J ＝8.4，2.4 Hz，H-3），6.08（1H，dd，J ＝8.4，2.4 Hz，H-4），5.93（1H，dt，J ＝8.4，2.4 Hz，H-5），5.62（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-2），5.51（1H，dqt，J ＝10.2，8.4，2.4 Hz，H-9），5.41（1H，dtq，J ＝10.2，8.4，2.4 Hz，H-8），3.22（2H，dd，J ＝8.4，2.4 Hz，H-2′），2.23（4H，m，H-6，7），1.79（1H，seqt，J ＝8.4 Hz，H-3′），1.57（3H，brd，J ＝8.4 Hz，H-10），0.87（6H，d，J ＝8.4 Hz，H-4′，5′）；13CNMR（150 MHz，DMSO-d6） δ：165.8（C-1），119.5（C-2），139.7（C-3），129.3（C-4），144.7（C-5），33.4（C-6），29.1（C-7），130.6（C-8），127.3（C-9），13.8（C-10），47.2（C-2′），28.3（C-3′），19.6（C-4′，5′），19.6（C-5′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14］基本一致，故鑒定為8，9-dehydropellitorine。

化合物13：白色粉末（丙酮），ESI-MS m／z：332.1 ［M+Na］+。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：7.68（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-7），7.57（2H，m，H-2，6），7.35（3H，m，H-3，4，5），6.47（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-8），5.08（d，J ＝8.4 Hz，2.4H，H-α），4.51（d，J ＝8.4 Hz，2.4H，Hβ）；13C-NMR（150 MHz，DMSO-d6） δ：136.4（C-1），130.8（C-2），132.4（C-3），32.9（C-4），132.4（C-5），130.8（C-6），1147.3（C-7），119.2（C-8），169.1（C-9），99.1（C-1′），75.2（C-2′），78.2（C-3′），71.6（C-4′），75.1（C-5′），64.6（C-6′），93.6（C-1″），75.7（C-2″），74.1（C-3″），69.5（C-4″），72.1（C-5″），64.6（C-6″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［15］基本一致，故鑒定為6-O-（E）-肉桂?；?α／β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物14：白色粉末（丙酮），ESI-MS m／z：369.3 ［M+Na］+。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：8.06（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-4），7.60（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-5），6.79（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-6），6.31（1H，d，J ＝2.4 Hz，H-4′），6.30（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-3），4.40（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-3′），1.92（6H，s，-COCH3×2），1.38（3H，s，2′-CH3），1.29（3H，s，2′-CH3）；13C-NMR（150 MHz，DMSO-d6） δ：1160.2（C-2），111.5（C-3），145.1（C-4），130.2（C-5），114.2（C-6），157.1（C-7），106.8（C-8），154.2（C-9），111.6（C-10），9.7（-COCH3× 2，-CH3），78.4（C-2′），71.8（C-3′），60.3（C-4′），23.6（-CH3），25.1（-CH3），170.1（-COCH3×2，-C ＝O）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［16］基本一致，故鑒定為trans-3′，4′-diacetylkhellacton。

化合物15：白色粉末（甲醇），ESI-MS m／z：366.8 ［M+Na］+。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：7.61（1H，dd，J ＝8.4，2.4 Hz，H-6），7.50（1H，d，J ＝2.4 Hz，H-2），7.20（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-5），5.02（1H，d，J ＝8.4 Hz，glc-1），3.92（3H，s，3-OCH3），3.79（3H，s，-OCH3），3.61（1H，dd，J ＝8.4，2.4 Hz，H-glc-6a），3.51-3.34（5H，m，H-glc-2，3，4，5，6b）；13CNMR（150 MHz，DMSO-d6） δ：126.1（C-1），117.2（C-2），153.1（C-3），149.6（C-4），113.1（C-5），125.0（C-6），169.1（C-7），101.7（Cglc-1），74.8（C-glc-2），79.2（C-glc-3），70.8（C-glc-4），77.5（C-glc-5），61.8（C-glc-6），56.5（3-OCH3），53.2（-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［17］基本一致，故鑒定為3-甲氧基-4-O-β-D-吡喃葡萄糖基苯甲酸甲酯。

化合物16：黃色粉末（甲醇），ESI-MS m／z：476.3 ［M+Na］+。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：12.62（1H，s，6-OH），8.09（1H，s，H-4），7.43（1H，s，H-3），6.93（1H，s，H-7），2.75（3H，s，H-11），2.62（3H，s，H-13）；13C-NMR（150 MHz，DMSO-d6） δ：154.1（C-2），107.4（C-3），126.9（C-4），120.6（C-5），159.6（C-6），99.7（C-7），162.4（C-8），121.6（C-9），203.6（C-10），26.8（C-11），187.5（C-12），25.8（C-13）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［18］基本一致，故鑒定為euparone。

4 體外抗腎間質(zhì)纖維化活性篩選

采用MTT 法［19］測(cè)試化合物1～16 體外抗腎間質(zhì)纖維化指標(biāo)（膠原纖維Ⅳ、Ⅲ型前膠原蛋白，層粘連蛋白）的活性，陽(yáng)性對(duì)照物為順鉑。取膠原纖維Ⅳ、Ⅲ型前膠原蛋白，層粘連蛋白稀釋（均分別稀釋為20、60、180 μg／mL 3 個(gè)質(zhì)量濃度），每個(gè)質(zhì)量濃度設(shè)置3 個(gè)復(fù)孔，放置于96 孔板中，在37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)12 h，分別加入化合物 1～ 16（質(zhì)量濃度分別為 50、150、450 μg／mL），順鉑。在DMEM 培養(yǎng)基中培養(yǎng)48 h后，每孔加入15 μL MTT 溶液染色，繼續(xù)孵育3.0 h，然后加入500 μL DMSO，混合均勻后，在360 nm 波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，計(jì)算細(xì)胞抑制率。采用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)算目標(biāo)化合物的IC50值。結(jié)果表明化合物5、8 對(duì)膠原纖維Ⅳ、Ⅲ型前膠原蛋白，層粘連蛋白具有一定的體外抑制作用?；衔?1、14 對(duì)膠原纖維Ⅳ、Ⅲ型前膠原蛋白，具有一定的體外抑制作用?；衔?、7 對(duì)Ⅲ型前膠原蛋白具有一定的體外抑制作用?；衔?、12對(duì)膠原纖維Ⅳ，層粘連蛋白具有一定的體外抑制作用。其他化合物沒(méi)有明顯的體外抗腎間質(zhì)纖維化活性。見(jiàn)表1。

表1 各化合物體外抗腎間質(zhì)纖維化IC50值（，μg／mL，n＝3）Tab.1 IC50values of anti-renal interstitial fibrosis for various compounds in vitro（，μg／mL，n＝3）

表1 各化合物體外抗腎間質(zhì)纖維化IC50值（，μg／mL，n＝3）Tab.1 IC50values of anti-renal interstitial fibrosis for various compounds in vitro（，μg／mL，n＝3）

5 討論

虎尾輪根為民間常用藥，具有廣闊的應(yīng)用前景。本研究從虎尾輪根中分離得到16 個(gè)化合物，除化合物3 外，均為首次從虎尾輪根中分離得到，其中化合物1、4、6、7、9、11、15 為首次從兔尾草屬植物中分離得到。通過(guò)對(duì)虎尾輪根體外抗腎間質(zhì)纖維化活性進(jìn)行篩選，化合物5、8 對(duì)膠原纖維Ⅳ、Ⅲ型前膠原蛋白，層粘連蛋白具有一定的體外抑制作用，化合物2、4、7、11、12、14 對(duì)部分腎間質(zhì)纖維化指標(biāo)有不同程度的抑制作用。本研究結(jié)果豐富了虎尾輪根化學(xué)成分的物質(zhì)基礎(chǔ)，表明虎尾輪根具有較大的抗腎間質(zhì)纖維化開(kāi)發(fā)潛力，以期對(duì)抗腎間質(zhì)纖維化新藥的研發(fā)提供一定的幫助。