雷 燕，李瀚林，陳俊材，萬健美

（1.宜賓學(xué)院質(zhì)量管理與檢驗檢測學(xué)部，四川 宜賓 644000；2.成都大帝漢克生物科技有限公司，四川 成都 611130；3.成都百沃英生物科技有限公司，四川 成都 610000；4.西南大學(xué)動物科技學(xué)院，重慶 400715；5.臨沂職業(yè)技術(shù)學(xué)院，山東 臨沂 276007）

隨著禁抗的實施，市場上各種替抗產(chǎn)品應(yīng)運而生。結(jié)合歐洲的替抗經(jīng)驗與國內(nèi)的現(xiàn)行實踐可知，替抗產(chǎn)品中的酸化劑對動物腸道健康非常重要，效果較穩(wěn)定，且性價比高[1]。酸化劑可酸化飼料，降低飼料系酸力，改善飼料適口性，提高動物采食量。酸化劑可補充胃酸不足，能夠提高飼料消化利用率，調(diào)節(jié)微生態(tài)平衡，特別是幼齡動物階段顯得尤為重要[2-4]。有研究表明，酸化劑可抑制飼料貯存過程中微生物的生長，防止畜禽攝入有害微生物，降低影響畜禽健康的風(fēng)險[1]；飼料中添加酸化劑也可抑制霉菌生長[5]。目前有關(guān)酸化劑包被與否對于飼料中細(xì)菌和微生物的研究較少。因此，本試驗通過菌落法研究包被與非包被酸化劑對飼料中細(xì)菌及霉菌數(shù)量的影響，為實際生產(chǎn)中酸化劑的選擇提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗設(shè)計

采用2×2 因子完全隨機試驗設(shè)計，共4 個處理組，每組3個重復(fù)?；烊胨峄瘎┣埃謩e檢測母豬料、玉米和魚粉中的細(xì)菌總數(shù)、霉菌總數(shù)。按0.5%比例混入包被與非包被酸化劑，室溫貯存4 d，檢測細(xì)菌、霉菌總數(shù)。按水料比70∶30 加入蒸餾水，室溫放置4 h，檢測水料混合物中的細(xì)菌、霉菌總數(shù)。

1.2 試驗材料

妊娠母豬全價料（購自市場）、玉米和魚粉混合物（玉米80%+魚粉20%，購自市場）。

包被與非包被酸化劑，均購自成都大帝漢克生物科技有限公司。

1.3 測定指標(biāo)及方法

飼料中細(xì)菌、霉菌總數(shù)測定參考GB/T 13093—2006。稱取試樣10 g，加入含有90 mL 稀釋液的滅菌三角燒瓶內(nèi)（瓶內(nèi)預(yù)先加入適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠）。吸取經(jīng)充分振搖制得的1∶10稀釋液1 mL，沿管壁注入含有9 mL稀釋液的試管內(nèi)（注意吸管尖端不要觸及管內(nèi)稀釋液），振搖混勻制成1∶100稀釋液。按上述操作順序，做10倍遞增稀釋。

根據(jù)飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求，選擇3個適宜稀釋度做10倍遞增稀釋，移1 mL 稀釋液于滅菌平皿內(nèi)，每個稀釋度做2 個平皿。將45 ℃水浴保溫的平板計數(shù)用培養(yǎng)基注入平皿約15 mL，混勻。稀釋試樣至傾注培養(yǎng)基時間不超過15 min。瓊脂凝固后，倒置平皿，37 ℃培養(yǎng)72 h，計數(shù)平板內(nèi)菌落數(shù)目。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼料中細(xì)菌及霉菌總數(shù)（見表1）

表1 飼料中細(xì)菌及霉菌總數(shù)Tab.1 Bacterial and mold amount in feed

由表1可知，正常情況下，未添加酸化劑的母豬料和玉米魚粉混合物中均含有不同程度的細(xì)菌和霉菌。

2.2 包被酸化劑與非包被酸化劑對飼料貯存后細(xì)菌數(shù)量及霉菌數(shù)量的影響（見表2）

表2 包被酸化劑與非包被酸化劑對飼料貯存后細(xì)菌及霉菌數(shù)量的影響Tab.2 Effect of coated and uncoated acidifier on bacterial and mold amount in storage feed

由表2可知，飼料在正常貯存條件下，包被酸化劑與非包被酸化劑對飼料細(xì)菌總數(shù)以及霉菌總數(shù)的影響無明顯差異。

2.3 包被酸化劑與非包被酸化劑對水料混合物細(xì)菌及霉菌數(shù)量的影響（見表3）

由表3 可知，包被酸化劑對水料混合物中的細(xì)菌總數(shù)無影響，但包被處理降低了酸化劑對水料混合物中霉菌的抑制能力。

表3 包被酸化劑與非包被酸化劑對水料混合物細(xì)菌及霉菌數(shù)量的影響Tab.3 Effect of coated and uncoated acidifier on bacterial and mold amount in water mixed feed

3 討論

目前，包被的酸化劑已商品化，廣泛應(yīng)用于畜禽飼料生產(chǎn)中，尤其是豬料和禽料。對比包被與非包被的酸化劑，包被酸化劑效果更好[1]。有研究表明，包被的酸化劑可提高生物活性，促進上皮細(xì)胞增殖[6]。酸化劑的使用效果受多種因素影響，包括其化學(xué)狀態(tài)（酸形式、鹽形式，包被或非包被）、酸的pK 值、分子質(zhì)量、使用劑量、動物品種和生長階段等[1]?？箟难岷蜌ぞ厶腔旌衔锿ㄟ^抑制假種皮上細(xì)菌和霉菌的生長，延長石榴假種皮的保質(zhì)期[7]。水產(chǎn)青貯料中加入酸化劑，可有效緩解細(xì)菌感染的影響，預(yù)防疫病發(fā)生，提高存活率[8]。Vazquez 等[9]研究發(fā)現(xiàn)，與菌素產(chǎn)生的抑菌效果相比，乳酸菌產(chǎn)生的乳酸和乙酸的抑菌貢獻更大。本試驗發(fā)現(xiàn)，包被處理可降低酸化劑在體外對水料混合物中霉菌的抑制能力，可能是由不同的酸化劑種類和含量導(dǎo)致。

目前主要認(rèn)為酸化劑抑菌通過2 個路徑，其一為通過水溶液中解離的氫離子，降低有害微生物生存環(huán)境的pH值，抑制有害微生物的生長[1,10-12]。本試驗結(jié)果表明，飼料正常貯存條件下，酸化劑包被與否對飼料細(xì)菌總數(shù)及霉菌總數(shù)的影響無差異，可能是由于無合適的水環(huán)境解離氫離子，從而發(fā)揮抑菌作用。

另一個抑菌的路徑為小分子的有機酸可透過病原菌細(xì)胞壁，進入細(xì)胞內(nèi)解離氫離子，病原菌因極力排除氫離子消耗ATP耗能而死。酸根離子還能夠干擾細(xì)菌DNA和RNA 的合成，破壞病原菌細(xì)胞膜的完整性，達到抑菌殺菌的作用[1,10-12]。本試驗結(jié)果表明，包被處理對水料混合物中的細(xì)菌總數(shù)無影響，但包被處理降低了酸化劑對水料混合物中霉菌的抑制能力。有研究表明，飼料中添加0.25%～1.00%的酸化劑可通過降低飼料pH 值防止飼料霉變[13]。甲酸、丙酸和羥基甲硫基丁酸均具有廣譜抗菌性，可抑制霉菌生長[14-15]。上述結(jié)果與本試驗結(jié)果不同，原因可能是體外環(huán)境中酸化劑種類和含量不同。

4 結(jié)論

包被處理可降低酸化劑在體外對水料混合物中霉菌的抑制能力，有關(guān)體內(nèi)包被酸化劑的效果的研究仍需探索。