藍(lán)梅金

(龍巖市第二醫(yī)院腎內(nèi)科，福建 龍巖 364030)

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)作為常見的自身免疫性疾病中，其主要是因狼瘡性腎炎(LN)引發(fā)，嚴(yán)重時(shí)會(huì)導(dǎo)致殘疾、死亡等后果[1-2]。目前研究分析發(fā)現(xiàn)HMGB1(細(xì)胞因子高遷移率族蛋白1)為重要致病因素，而TLR4受體細(xì)胞及IL17表達(dá)也與病癥的致炎有著緊密的關(guān)系[3-4]。為分析辛伐他汀對狼瘡性腎炎小鼠腎組織中IL17、HMGB1、TLR4的影響，本文進(jìn)行分組對照，報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

選取14只16周齡雄性BSXSB小鼠為LN試驗(yàn)?zāi)Ｐ停w質(zhì)量均在18～24g之間，隨機(jī)標(biāo)號均分成對照組(7只)和研究組(7只)，研究組根據(jù)用藥劑量不同分為研究A組(3只)、研究B組(2只)和研究C組(2只)，另外同時(shí)選取相同周齡7只C57BL/6小鼠為正常組，體質(zhì)重18～24g，所有選取小鼠均引種自美國Jackson實(shí)驗(yàn)室，實(shí)驗(yàn)前先飼養(yǎng)一周，飼養(yǎng)期間均給予相同的環(huán)境，均自由飲食、飲水，實(shí)驗(yàn)時(shí)間段：12～16周齡末。

1.2 主要試劑

免疫組化試劑盒、免抗小鼠TLR4多克隆抗體、免疫小鼠HMGB1多克隆抗體、免抗小鼠IL17多克隆抗體、辛伐他汀。

1.3 實(shí)驗(yàn)及標(biāo)本采集方法

1.3.1實(shí)驗(yàn)方法

三組模型小組建立后，其中對照組和正常組小鼠均予常規(guī)飼養(yǎng)，不予其他處理，而研究組小鼠于試驗(yàn)起點(diǎn)時(shí)，開始灌服含有辛伐他汀的0.1%PBS溶液，研究A組劑量為5mg·kg-1·d-1；研究B組劑量為10·kg-1·d-1，研究C組劑量為15mg·kg-1·d-1，每天灌服一次，直至實(shí)驗(yàn)?zāi)┢凇?/p>

1.3.2標(biāo)本采集方法

三組小鼠均于實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)時(shí)，行眼眶取血，常規(guī)血清分離致死。然后取小鼠腎皮質(zhì)組織，用多聚甲醛(4%)和戊二醇(2%)固定。同時(shí)，部分組織被切割和冷凍，并儲(chǔ)存在-72℃下供日后使用。

1.4 檢測方法

對三組小鼠BUN水平進(jìn)行檢測，同時(shí)對樣本腎臟組織中的IL17、HMGB1及TLR4蛋白的表達(dá)水平進(jìn)行檢測：行常規(guī)切片→脫蠟水化→HE染色→抗原修復(fù)→稀釋后IL17多克隆抗體、HMGB1多克隆抗體及TLR4多克隆抗體處理→4℃過夜；陰性對照用PBS代替一抗，觀察和記錄陽性信號。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 BUN水平對比

對照組顯著高于正常組(P<0.05)。研究A組(8.34±0.80)、研究B組(7.67±0.82)、與對照組及正常組相比差異顯著(P<0.05)。研究C組與對照組相比差異顯著(P<0.05)，但與正常組相比差異較小(P>0.05)。病理圖如圖1，各組小鼠BUN水平見表1。

表1 各組小鼠BUN水平對比情況

2.2 腎組織中IL17、7、HMGB1、TLR4蛋白表達(dá)水平對比

研究組三項(xiàng)均值顯著低于對照組，但顯著高于正常組，組間比較差異顯著(P<0.05)。其中研究C組IL17、7、HMGB1、TLR4均顯著優(yōu)于研究A組及B組(P<0.05),與正常組比較差異不顯著(P>0.05)。詳細(xì)見下表2、圖2、圖3。

表2 三組小鼠腎組織中IL17、HMGB1、TLR4蛋白表達(dá)水平對比

研究組(400×)對照組(400×)圖1 兩組小鼠腎組織IL17蛋白的表達(dá)

3 討論

狼瘡腎炎是SLE患者最常見的并發(fā)癥，病理改變多樣且不均勻，以腎小球、血管、小管和間質(zhì)損傷為特征。急性或慢性進(jìn)展為腎纖維化甚至腎功能衰竭是SLE患者死亡的主要原因之一[5]。

系統(tǒng)性狼瘡腎炎的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，與遺傳、T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞功能等諸多因素有關(guān)。此外，本病的早發(fā)相對隱蔽或突然，起病危險(xiǎn)，治療后易復(fù)發(fā)，給臨床治療帶來困難[6-7]。目前，關(guān)于狼瘡性腎炎的發(fā)病機(jī)制還沒有得到證實(shí)和可重復(fù)的結(jié)論。大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為[8]，某些外來抗原(如逆轉(zhuǎn)錄病毒)和內(nèi)源性抗原(如DNA、基本免疫蛋白和淋巴細(xì)胞表面抗原)具有異常免疫調(diào)節(jié)功能的患者導(dǎo)致B淋巴細(xì)胞高度活躍的增殖和大量自身抗體的產(chǎn)生。與相應(yīng)抗原相關(guān)的免疫復(fù)合物沉積在腎小球是狼瘡性腎炎的主要發(fā)病機(jī)制[9-10]。DNA與腎小球基底膜結(jié)合，并與循環(huán)抗DNA抗體形成原位免疫復(fù)合物，這也可能與狼瘡性腎炎有關(guān)[11]。某些補(bǔ)體成分也會(huì)增加免疫復(fù)合物在組織中的沉積，加重組織損傷[12]。補(bǔ)體激活、趨化因子形成、白細(xì)胞聚集以及一系列炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子的釋放導(dǎo)致小血管炎癥和腎小球損傷[13]。

狼瘡性腎炎的常規(guī)治療藥物是糖皮質(zhì)激素與環(huán)磷酰胺，但療效并不穩(wěn)定，長期使用還會(huì)導(dǎo)致感染、高血糖和肝毒性、性腺損害等不良反應(yīng)[14-15]。辛伐他汀是HMG-CoA還原酶抑制劑，據(jù)報(bào)道，它可以減少蛋白尿和腎小球損傷。表1中的數(shù)據(jù)分析表明，狼瘡性腎炎可直接導(dǎo)致小鼠血液中BUN含量增加，表明該疾病可直接損害小鼠的腎功能[16]。但經(jīng)辛伐他汀治療后，小鼠組BUN水平較對照組有所下降，表明辛伐他汀有助于改善小鼠腎功能，并且根據(jù)數(shù)據(jù)可知，劑量越大，腎功能改善越明顯[17-18]。而表2的數(shù)據(jù)分析顯示，與正常組相比，狼瘡性腎炎模型小鼠腎組織中IL17、HMGB1和TLR4蛋白表達(dá)水平顯著升高，提示三者可能在腎臟炎癥中起一定的炎癥作用，且三者具有協(xié)同作用。此外，研究小組在給小鼠服用辛伐他汀后，發(fā)現(xiàn)這組小鼠腎組織中三項(xiàng)指標(biāo)的蛋白表達(dá)水平明顯低于對照組，表明辛伐他汀治療效果顯著，可抑制上述蛋白表達(dá)，具有抗炎作用，結(jié)果得到相關(guān)證實(shí)[19-20]。

綜上，辛伐他汀能抑制IL17、HMGB1、TLR4在腎臟組織中的表達(dá)，預(yù)防狼瘡性腎炎，且劑量越大，效果更優(yōu)，可作臨床參考。