李京燁，許進(jìn)榮，馬德亮，孫治剛，秦靜

（臨沂市中心醫(yī)院，山東 臨沂 276400）

0 引言

胃癌發(fā)病率在所有惡性腫瘤中位居首位，疾病早期多無明顯臨床表現(xiàn)，極易被人們忽視，多數(shù)患者前往醫(yī)院就診時已經(jīng)發(fā)展到晚期，錯失了最佳手術(shù)機(jī)會，化療成為該類患者的主要輔助療法[1]。對晚期胃癌術(shù)后化療患者療效做出準(zhǔn)確判斷有著重要意義。調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞（Treg）于人體的免疫系統(tǒng)內(nèi)有著負(fù)向調(diào)節(jié)作用，不僅可以抑制不恰當(dāng)免疫反應(yīng)，還可限定免疫應(yīng)答范圍、程度和作用時間，抑制效應(yīng)細(xì)胞增殖和免疫活性[2]。經(jīng)研究顯示[3]，胃癌患者外周血Treg 水平有一定升高，同時腫瘤的惡性程度越高，外周血Treg 水平就越高，患者預(yù)后越差，原因和免疫抑制以及腫瘤進(jìn)展相關(guān)。但當(dāng)前有關(guān)Treg 對局部晚期胃癌術(shù)后化療患者轉(zhuǎn)歸預(yù)測作用的研究較少。為此，本文就CD4+CD25+CD127-T 細(xì)胞對局部晚期胃癌術(shù)后化療患者轉(zhuǎn)歸的預(yù)測作用開展分析，內(nèi)容如下。

1 資料和方法

1.1 研究資料

將2019 年1 月至2019 年12 月本院收治的局部晚期胃癌術(shù)后化療患者共62 例為研究對象，其中包含男性39 例，女性23 例。年齡在32-76 歲，均值（56.25±10.34）歲。

納 入 標(biāo) 準(zhǔn)[4]：（1）年 齡≥18 歲。（2）均 經(jīng) 病 理 確 診為初治無法切除的晚期或者復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移胃癌。（3）功能狀態(tài)評分（KPS）≥60 分。（4）外周血常規(guī)顯示中性粒細(xì)胞＞4000/mm3，同 時 血 小 板 計 數(shù)＞10000/mm3。（5）肝 腎功能檢查顯示總膽紅素＜17.1μmol/L，丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶或者天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶＜2 倍正常上限，肌酐清除率＞50mL/min，血清肌酐＜132.6μmol/L。（6）均取得患者和其家屬知情同意。

排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）存在腦轉(zhuǎn)移者。（2）存在腸梗阻者。

1.2 方法

1.2.1 試劑與儀器

美國BD 公司生產(chǎn)FACS 溶血素、鼠抗人CD25-PE 單抗、CD4-perCP 單 抗、CD127-FITC 單 抗，及 其 同 型 的 鼠抗人IgG1-PE/IgG1-FITC 對照抗體；美國BD 公司生產(chǎn)FACSCalibur 流式細(xì)胞儀與流式上樣管。

1.2.2 標(biāo)本采集

分別在治療前1 周和化療期間每隔2 周抽取患者的外周靜脈血液開展CD4+CD25+CD127-T 細(xì)胞水平檢測，抽取血液后放入肝素鈉抗凝管內(nèi)，單次采集2mL 血量，完成采集后放入4°C 的冰箱內(nèi)保存待測。

1.2.3 標(biāo)本制備

收集患者的2mL 外周血，于附帶100μL 抗凝全血管內(nèi)依次加進(jìn)5μL 的鼠抗人CD4-perCP、CD25-PE 以及CD127-FITC 單抗，充分混勻，避開光線放置12min，以1500r/min 速度開展5min 離心處理，將上清液棄去，加進(jìn)PBS 300μL 的重懸細(xì)胞，放入流式細(xì)胞儀中開展檢測。分別加進(jìn)同種型號的鼠抗人CD4-perCP、IgG1-pe 以及IgG1-FITC 單抗當(dāng)作陰性對照。

1.2.4 外周血中的T 細(xì)胞檢測

檢測前應(yīng)做好儀器光路校準(zhǔn)，采取流式細(xì)胞儀中的FACSDiva 軟件開展數(shù)據(jù)分析，各樣本均收集分析細(xì)胞1×105個，Treg 水平采取CD4+CD25+CD127-Treg 于CD4+T 細(xì)胞內(nèi)的占比表示。

1.3 統(tǒng)計指標(biāo)

觀察化療前和化療2 周期、4 周期后的外周血Treg 水平，同時對比化療2 周期后未緩解和緩解患者外周血Treg 水平。療效評定標(biāo)準(zhǔn)[5]：完全緩解：能測量的目標(biāo)病灶全部消失；部分緩解：基線病灶的最大徑總和與基線狀態(tài)對比減少≥30%，同時未產(chǎn)生新病灶；穩(wěn)定：基線病灶的最大徑總和減少但沒有達(dá)到部分緩解標(biāo)準(zhǔn)或增加但沒有達(dá)到進(jìn)展標(biāo)準(zhǔn)。進(jìn)展：基線病灶的最大徑總和增加≥20%，或出現(xiàn)新的病灶。將化療后完全緩解和部分緩解患者納入緩解組，穩(wěn)定以及進(jìn)展患者納入未緩解組。

1.4 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果

2.1 化療前后的外周血Treg 水平對比

化療2 周期以及4 周期后，患者的外周血Treg 水平比化療前均有顯著降低（P＜0.05）；化療2 周期和4 周期后外周血Treg 水平無顯著差異（P＞0.05），見表1。

表1 化療前后的外周血Treg 水平對比（%，n=62）

2.2 化療2 周期后未緩解和緩解患者的外周血Treg 水平對比

化療2 周期后，62 例患者中共32 例緩解，30 例未緩解。未緩解患者的外周血Treg 水平比緩解患者更高（P＜0.05），見表2。

表2 化療2 周期后未緩解和緩解患者的外周血Treg 水平對比（%）

3 討論

胃癌在臨床十分常見，TNM 分期內(nèi)T4、N3 以及M1 內(nèi)任意一項均是晚期胃癌，該類患者多無法經(jīng)手術(shù)徹底切除病灶，以化療為主內(nèi)科綜合治療是其主要治療方式[6]。因此，對患者術(shù)后化療療效開展評定十分重要。Treg 屬于近年來研究較多一類有著免疫抑制功能T 細(xì)胞亞群，免疫功能下降屬于腫瘤出現(xiàn)關(guān)鍵原因，胃癌患者的免疫功能和其體內(nèi)的Treg 水平緊密相關(guān)[7-8]。當(dāng)前，關(guān)于Treg 和晚期胃癌患者術(shù)后化療轉(zhuǎn)歸間的關(guān)系研究較少。

研究顯示[9]，CD4+CD25+Treg 特異性表達(dá)Foxp3，是Treg相對特異形態(tài)與功能性標(biāo)志，于CD4+CD25+Treg 發(fā)育及功能中有著關(guān)鍵性作用，于Treg 發(fā)育過程中參加CD4+T 細(xì)胞往Treg 分化，同時于維持Treg 功能中也有著重要作用。但需先固定細(xì)胞同時破膜后才能檢測Foxp3，原因是其分布在細(xì)胞內(nèi)而非細(xì)胞膜表面，除Treg 外還有部分細(xì)胞也能表達(dá)出Foxp3，因此將其當(dāng)作Treg 檢測標(biāo)志物不合適。據(jù)有關(guān)研究顯示[10]，Treg 的低表達(dá)CD127 和其陽性表達(dá)Foxp3、CD25 有著良好關(guān)系，體內(nèi)激活效應(yīng)T 細(xì)胞能表達(dá)出高水平CD127，因此CD4+CD25+CD127-T 細(xì)胞可以較好區(qū)分出機(jī)體中激活效應(yīng)T 細(xì)胞，將其當(dāng)作Treg 檢測標(biāo)記物比Foxp3 更合理。本次研究發(fā)現(xiàn)，化療2 周期以及4 周期后，患者的外周血Treg 水平比化療前均顯著下降（P＜0.05），提示CD4+CD25+CD127-T 細(xì)胞數(shù)量和化療療效之間有著密切關(guān)系，經(jīng)化療后能下調(diào)晚期胃癌患者腫瘤環(huán)境內(nèi)Treg 水平，進(jìn)而降低Treg 給機(jī)體帶來的免疫抑制作用，提升機(jī)體抗腫瘤免疫功能[11]?；? 周期后，未緩解患者的外周血Treg 水平比緩解患者更高，進(jìn)一步說明了Treg 水平與局部晚期胃癌術(shù)后化療轉(zhuǎn)歸有著密切聯(lián)系。

總之，CD4+CD25+CD127-T 細(xì)胞對局部晚期胃癌術(shù)后化療患者轉(zhuǎn)歸具有一定預(yù)測價值，能一定程度反映出化療療效。