楊曉華 吳淑華

甲狀腺乳頭狀癌占甲狀腺惡性腫瘤的80%～90%，受腫瘤轉(zhuǎn)移、分期等影響，預(yù)后較差[1]，且易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移[2]。根據(jù)甲狀腺乳頭狀癌的綜合癥狀，及早發(fā)現(xiàn)預(yù)后檢測(cè)指標(biāo)對(duì)于改善預(yù)后意義重大。磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K)作為信號(hào)傳導(dǎo)蛋白激酶，可通過(guò)不同途徑被多種細(xì)胞因子激活，活化后影響下游信號(hào)通路從而進(jìn)行信號(hào)傳導(dǎo)，參與細(xì)胞增殖、分化、凋亡、轉(zhuǎn)移等多種生理過(guò)程[3]；作為經(jīng)典腫瘤信號(hào)通路重要調(diào)控因子，在甲狀腺乳頭狀癌中激活PI3K可促進(jìn)甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞增殖和侵襲，從而加重疾病進(jìn)程[4]。其中PI3Kp110α、PI3Kp110β作為PI3K催化亞單元α、β的蛋白產(chǎn)物，在細(xì)胞中廣泛存在，正常表達(dá)時(shí)能夠調(diào)控DNA合成，促進(jìn)細(xì)胞的正常發(fā)育。有研究表明，大腸癌中呈高表達(dá)，與大腸癌發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[5]。我們檢測(cè)甲狀腺乳頭狀癌病人癌組織中PI3Kp110α、PI3Kp110β表達(dá)情況，探討其與預(yù)后的關(guān)系。

對(duì)象與方法

一、對(duì)象

2008年1月～2013年7月甲狀腺乳頭狀癌病人60例(甲狀腺乳頭狀癌組)，結(jié)節(jié)性甲狀腺腫60例(結(jié)節(jié)性甲狀腺腫組)，其他非癌病例中正常甲狀腺組織60例(正常組)。甲狀腺乳頭狀癌、結(jié)節(jié)性甲狀腺腫均經(jīng)病理檢查確診。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)均符合診斷標(biāo)準(zhǔn)；(2)首次治療，且均未接受過(guò)化療；(3)臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)甲狀腺乳頭狀癌合并結(jié)節(jié)性甲狀腺腫；(2)合并其他惡性腫瘤疾病；(3)合并內(nèi)分泌相關(guān)疾病及嚴(yán)重的心腦血管疾??；(4)妊娠期。

二、方法

收集甲狀腺乳頭狀癌病人一般資料，包括年齡、性別、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、TNM分期。

1.樣品收集及保存：甲狀腺乳頭狀癌病人癌組織、結(jié)節(jié)性甲狀腺腫病人甲狀腺腫塊以及正常組的正常甲狀腺組織，經(jīng)手術(shù)切除術(shù)后樣本至4%多聚甲醛中固定，固定后石蠟包埋并切片，室溫保存待用。

2.PI3Kp110α、PI3Kp110β蛋白表達(dá)檢測(cè)：免疫組化法檢測(cè)各組PI3Kp110α、PI3Kp110β的表達(dá)情況。脫蠟后檸檬酸高壓熱修復(fù)，分別滴加一抗PI3Kp110α、PI3Kp110β后4℃過(guò)夜，滴加二抗，DAB顯色，蘇木素復(fù)染、鹽酸酒精分化，中性樹(shù)膠封片。染色強(qiáng)度與陽(yáng)性細(xì)胞的百分率相結(jié)合判定免疫組化染色結(jié)果。染色強(qiáng)度：不著色0分，淡黃色1分，棕黃色2分，黃褐色3分。陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<5%計(jì)0分，5%≤陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<30%計(jì)1分，30%≤陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<60%計(jì)2分，≥60%計(jì)3分。兩者乘積為染色總分，陰性(-)：0分，弱陽(yáng)性(+)：1～4分，中度陽(yáng)性(++)：5～8分，強(qiáng)陽(yáng)性(+++)：9～12分。

3.隨訪：甲狀腺乳頭狀癌病人自術(shù)后隨訪5年，截止隨訪時(shí)間2018年8月，最短隨訪時(shí)間為14個(gè)月，最長(zhǎng)隨訪時(shí)間為60個(gè)月，中位隨訪時(shí)間為(52.63±5.81)個(gè)月。生存時(shí)間計(jì)算為手術(shù)至截止隨訪為止，或因復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移等原因造成復(fù)發(fā)而預(yù)后變差時(shí)間。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS25.0、GraphPad軟件分析數(shù)據(jù)計(jì)數(shù)資料以例(%)表示，采用χ2檢驗(yàn)；采用Cox回歸分析影響甲狀腺乳頭狀癌病人預(yù)后的因素；Kaplan-Meier生存曲線分析甲狀腺乳頭狀癌病人PI3Kp110α、PI3Kp110β陽(yáng)性組和陰性組生存情況，行Log-rank檢驗(yàn)；Spearman法分析甲狀腺乳頭狀癌病人PI3Kp110α與PI3Kp110β的相關(guān)性。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

1.3組PI3Kp110α、PI3Kp110β陽(yáng)性表達(dá)比較見(jiàn)表1。分別與正常組、結(jié)節(jié)性甲狀腺腫組相比，甲狀腺乳頭狀癌組PI3Kp110α、PI3Kp110β陽(yáng)性率升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表1 3組PI3Kp110α、PI3Kp110β表達(dá)比較(例，%)

2.甲狀腺乳頭狀癌病人PI3Kp110α、PI3Kp110β陽(yáng)性表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系見(jiàn)表2。甲狀腺乳頭狀癌病人癌組織PI3Kp110α、PI3Kp110β陽(yáng)性表達(dá)均與年齡、性別無(wú)明顯相關(guān)性(P>0.05)，與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、TNM分期相關(guān)性明顯相關(guān)(P<0.05)。

3.影響甲狀腺乳頭狀癌預(yù)后不良的因素：?jiǎn)我蛩胤治鲲@示，PI3Kp110α、PI3Kp110β、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期均為影響甲狀腺乳頭狀癌預(yù)后不良的危險(xiǎn)因素(P<0.05)。多因素分析顯示，PI3Kp110α、PI3Kp110β、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期均是影響甲狀腺乳頭狀癌預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)。見(jiàn)表3。

4.PI3Kp110α、PI3Kp110β與甲狀腺乳頭狀癌病人預(yù)后關(guān)系：60例病人術(shù)后隨訪，其中14例病人出現(xiàn)復(fù)發(fā)，無(wú)失訪病例。PI3Kp110α、PI3Kp110β陽(yáng)性累計(jì)生存率明顯低于PI3Kp110α、PI3Kp110β陰性累計(jì)生存率(Log-rank=8.738、5.767，P=0.003、0.016均<0.05)。見(jiàn)圖1。

表2 甲狀腺乳頭狀癌病人PI3Kp110α、PI3Kp110β陽(yáng)性表達(dá)與臨床病理特征關(guān)系(例，%)

表3 影響甲狀腺乳頭狀癌預(yù)后不良的因素

注：A.PI3Kp110α；B.PI3Kp110β

5.甲狀腺乳頭狀癌病人癌組織中PI3Kp110α與PI3Kp110β的相關(guān)性分析：Spearman法分析顯示，甲狀腺乳頭狀癌病人癌組織中PI3Kp110α與PI3Kp110β呈正相關(guān)(r=0.791，P=0.000<0.05)。見(jiàn)圖2。

討論

甲狀腺乳頭狀癌屬內(nèi)分泌器官惡性腫瘤，是內(nèi)分泌系統(tǒng)中造成死亡的重要原因，嚴(yán)重影響病人生存質(zhì)量[6]。甲狀腺乳頭狀癌預(yù)后影響因素較多，早期癥狀不明顯，尚無(wú)公認(rèn)的腫瘤免疫學(xué)指標(biāo)評(píng)估預(yù)后[7]。因此，及早發(fā)現(xiàn)甲狀腺乳頭狀癌預(yù)后評(píng)估指標(biāo)，根據(jù)預(yù)后情況及早干預(yù)，對(duì)于提高5年生存率具有重要意義。

圖2 甲狀腺乳頭狀癌病人癌組織中PI3Kp110α與PI3Kp110β的相關(guān)性

PI3K在腫瘤發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用，具體分型為Ⅰ型PI3K，Ⅰ型PI3K根據(jù)特異性的酶底物及激活機(jī)制的不同分為ⅠA型和ⅠB型，其中ⅠA型PI3K由一個(gè)調(diào)節(jié)亞基p85α和一個(gè)催化亞基p110組成[8]。PI3Kp85α本身有較強(qiáng)的致癌作用，在甲狀腺乳頭狀癌癌組織中水平高于增生組織，可作為甲狀腺乳頭狀癌和甲狀腺良性病變的診斷依據(jù)之一[9]。PI3Kp110由p110α、p110β、p110δ三種亞基構(gòu)成，PI3Kp110α在垂體腺瘤中研究較多，作為一種致癌基因，可導(dǎo)致組織過(guò)度生長(zhǎng)如纖維脂肪過(guò)度生長(zhǎng)、節(jié)段性過(guò)度生長(zhǎng)、皮膚異常、血管異常、腫瘤、脊柱側(cè)凸等，加重疾病進(jìn)程[10]；在甲狀腺乳頭狀癌中表達(dá)上調(diào)，可能參與甲狀腺乳頭狀癌的病理過(guò)程[11]。PI3Kp110β作為PI3Kp110另一亞基，其在維持腫瘤抑制基因第10號(hào)染色體缺失的磷酸酶及張力蛋白同源的基因缺失的腫瘤細(xì)胞增殖中發(fā)揮促癌作用，高表達(dá)病人預(yù)后較差[12]。本研究發(fā)現(xiàn)，與正常組、結(jié)節(jié)性甲狀腺腫組相比，甲狀腺乳頭狀癌組PI3Kp110α、PI3Kp110β陽(yáng)性率升高，高表達(dá)PI3Kp110α可以激活信號(hào)通路并促進(jìn)細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲過(guò)程，抑制PI3Kp110α表達(dá)可降低惡性腫瘤惡性生物學(xué)行為，可能成為治療疾病的靶點(diǎn)[13]，提示絨毛狀腺瘤、鋸齒狀腺瘤、伴癌的腺瘤中均高表達(dá)，其高表達(dá)可能是腺瘤發(fā)展為腺癌的危險(xiǎn)因素；PI3Kp110β與細(xì)胞凋亡因子B細(xì)胞淋巴癌基因-2關(guān)系密切，且促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、抑制腫瘤細(xì)胞凋亡,促進(jìn)細(xì)胞體外侵襲能力，加重疾病進(jìn)程[14]。提示PI3Kp110α、PI3Kp110β可能影響細(xì)胞增殖、遷移、侵襲過(guò)程從而影響疾病。PI3Kp110α、PI3Kp110β陽(yáng)性表達(dá)均與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、TNM分期相關(guān)性較明顯，提示PI3Kp110α、PI3Kp110β的高表達(dá)在甲狀腺乳頭狀癌中可能影響癌細(xì)胞遷移從而增加TNM分期，加重疾病。且PI3Kp110α、PI3Kp110β陽(yáng)性表達(dá)增加甲狀腺乳頭狀癌預(yù)后不良的風(fēng)險(xiǎn)，在臨床上檢測(cè)甲狀腺乳頭狀癌病人癌組織中PI3Kp110α、PI3Kp110β水平可在一定程度上預(yù)測(cè)預(yù)后狀況。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，PI3Kp110α與PI3Kp110β呈正相關(guān)，提示甲狀腺乳頭狀癌癌組織中PI3Kp110α與PI3Kp110β可能共同處于激活狀態(tài)影響細(xì)胞遷移，加重疾病。

甲狀腺乳頭狀癌病人癌組織中PI3Kp110α、PI3Kp110β陽(yáng)性表達(dá)升高，二者與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期關(guān)系密切，可作為甲狀腺乳頭狀癌病人預(yù)測(cè)預(yù)后的指示性因子。在臨床上抑制PI3Kp110α、PI3Kp110β表達(dá)情況可能作為治療靶點(diǎn)。由于本研究受例數(shù)限制，結(jié)果可能與實(shí)際存在一定偏差。