湯明，方春田，彭唯

作者單位：1洪湖市人民醫(yī)院，a腫瘤科，b婦產科，湖北 荊州433200；

2洪湖市婦幼保健院婦產科，湖北 荊州433200

宮頸癌作為女性發(fā)病率最高的惡性腫瘤性疾病之一，早期確診并采取恰當?shù)闹委煼绞绞莾?yōu)化病人結局的最佳方式。對于腫瘤分期較早的ⅠB～ⅡB 期宮頸癌病人，根治性手術是首選方式，直接開展手術或是先行新輔助化療目前仍存在爭議。新輔助化療是一種術前應用的保守治療方式，通過靜脈給予化療藥物預先減小病灶體積，為后續(xù)手術實施奠定基礎。本研究選擇接受新輔助化療的宮頸癌病人作為研究對象，對比其化療前后宮頸癌組織惡性生物學行為的差異，具體從宮頸癌相關增殖基因、侵襲基因、自噬基因三方面展開闡述。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2015 年4 月至2018 年1 月間在洪湖市人民醫(yī)院接受治療的ⅠB～ⅡB 期宮頸癌病人157 例，均接受術前新輔助化療＋根治性手術治療。留取新輔助化療前后宮頸癌組織標本各157份作為研究對象。本研究符合《世界醫(yī)學協(xié)會赫爾辛基宣言》相關要求。

1.2 入組及排除標準

入組標準：（1）病理組織確診原發(fā)性宮頸癌；（2）首次確診、入院前未經任何治療；（3）順利完成新輔助化療及后續(xù)手術，標本保存完好、相關數(shù)據(jù)收集完整；（4）本人或近親屬簽署知情同意書。

排除標準：（1）合并其他類型原發(fā)惡性腫瘤性疾病；（2）合并宮頸組織嚴重感染；（3）無法耐受新輔助化療所致毒副作用或者自主中斷治療。

1.3 新輔助化療

入組病人接受紫杉醇、順鉑聯(lián)合化療，具體如下：紫杉醇140 mg/m溶入5%葡萄糖液500 mL 中，靜脈滴注，d1；順鉑75 mg/m溶入5%葡萄糖液250 mL 中，靜脈滴注，d3。以21 d 為1 療程，連續(xù)化療2療程后行根治性手術。

1.4 宮頸癌病灶中惡性生物學行為相關基因表達量檢測

新輔助化療前后，均留取病人的宮頸病灶組織標本，采用熒光定量PCR 法檢測其中惡性生物學行為相關基因的表達量，具體包括增殖相關基因：FOXP3、HOXA7、USP22、Sox2、TSLC1；侵襲相關基因：FAK、MACC1、GRP94、PRPS2、TPX2；自噬相關基因：Beclin1、LC3-B、PI3KC3。

1.5 統(tǒng)計學方法

數(shù)據(jù)分析選擇SPSS 19.0 統(tǒng)計軟件，以x ± s 描述定量資料，t 檢驗；以例數(shù)結合率描述定性資料，行χ檢驗。以α=0.05為檢驗水準。

2 結果

2.1 增殖相關基因

新輔助化療后，宮頸癌組織中FOXP3、HOXA7、USP22、Sox2 mRNA 的表達量低于新輔助化療前，TSLC1 mRNA 的表達量高于新輔助化療前，均差異有統(tǒng)計學意義（P ＜0.05）。見表1。

2.2 侵襲相關基因

新輔助化療后，宮頸癌組織中FAK、MACC1、GRP94、PRPS2、TPX2 mRNA 的表達量低于新輔助化療前，均差異有統(tǒng)計學意義（P ＜0.05）。見表2。

表1 ⅠB～ⅡB期宮頸癌病人157例新輔助化療前后各157份宮頸癌組織標本中增殖相關基因表達量的比較/x ± s

表2 ⅠB～ⅡB期宮頸癌病人157例新輔助化療前后各157份宮頸癌組織標本中侵襲相關基因表達量的比較/-x ± s

2.3 自噬相關基因

新輔助化療后，宮頸癌組織中Beclin1、LC3-B、PI3KC3 mRNA的表達量均高于新輔助化療前，均差異有統(tǒng)計學意義（P ＜0.05）。見表3。

表3 ⅠB～ⅡB期宮頸癌病人157例新輔助化療前后各157份宮頸癌組織標本中自噬相關基因表達量的比較/x ± s

3 討論

ⅠB～ⅡB 期宮頸癌病人的治療以根治性手術為主，目前較多學者推薦在術前應用新輔助化療，旨在殺滅微小轉移灶并縮小腫瘤體積，為后續(xù)手術實施創(chuàng)造便利條件。新輔助化療能否為早期宮頸癌病人帶來較大的臨床獲益存在爭議，本次研究對比新輔助化療前后原發(fā)性宮頸癌病人癌細胞的惡性生物學行為差異，為此類病人術前輔助治療提供借鑒。

宮頸癌細胞的惡性生物學行為首先表現(xiàn)為其無限增殖潛能，多種增殖相關基因共同調控癌細胞的這一行為。FOXP3 對維持Treg 細胞功能具有重要作用，推測其在腫瘤細胞的免疫逃逸過程中發(fā)揮重要作用，目前已經在人類胰腺癌、肺癌、乳腺癌等惡性腫瘤性疾病中存在該基因的過度表達。HOXA7包含轉錄因子，在早期發(fā)育過程中扮演重要作用，已經在胃腸道惡性腫瘤細胞中發(fā)現(xiàn)該基因異常高表達，敲低該基因后腫瘤細胞增殖活力下降。USP22參與組蛋白H2A的泛素化，可調控基因轉錄、表達。研究發(fā)現(xiàn)，在宮頸癌組織中存在USP22 基因異常高表達，可促進Hela 細胞增殖且降低機體對化療藥物的敏感性。Sox2 是發(fā)現(xiàn)最早的干細胞轉錄因子，可維持胚胎干細胞多潛能性、器官發(fā)生及細胞分化。作為原癌基因，Sox2 可促進細胞周期進展并增強其增殖能力、抑制細胞凋亡。TSLC1 是最先發(fā)現(xiàn)于肺癌組織中的抑癌基因，該基因有助于保持上皮間緊密連接并抑制細胞遷移。目前已經在膀胱癌、卵巢癌等多種惡性腫瘤組織中發(fā)現(xiàn)其表達減少甚至缺失，且在宮頸癌細胞實驗中利用腺病毒過表達TSLC1 后，發(fā)現(xiàn)癌細胞的增殖能力下降。文中宮頸癌病人接受術前新輔助化療后，病灶組織中FOXP3、HOXA7、USP22、Sox2 mRNA 的表達量較治療前下降，TSLC1 mRNA的表達量較治療前增加，證實新輔助化療可有效抑制宮頸癌細胞的增殖活力。

宮頸癌進展必然伴隨著癌細胞的侵襲轉移，其本質是多種促侵襲基因異常高表達、侵襲抑制基因異常低表達。FAK 是存在于細胞質中的非受體酪氨酸激酶，參與細胞內多條信號通路傳導。研究發(fā)現(xiàn)FAK 在多種實體瘤及非實體瘤中國均存在異常高表達，在調節(jié)癌細胞運動、遷移方面具有重要意義。MACC1 是HGF/c-Met 信號通路中的關鍵調節(jié)因子，與啟動子結合激活該通路后，可調控下游分子轉錄并促使c-Met 本身發(fā)生磷酸化，促使腫瘤細胞發(fā)生侵襲轉移。GRP94 屬于葡萄糖調節(jié)蛋白，具有調控新陳代謝等重要作用，目前該基因在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用備受關注，研究證實其過度表達與癌細胞淋巴結轉移及腫瘤復發(fā)相關。PRPS2 是核苷酸合成關鍵酶，是促進腫瘤發(fā)生的關鍵基因，在Burkitt’s 淋巴瘤模型中存在PRPS2 過表達，且特異性敲低PRPS2 基因表達后Burkitt’s 淋巴瘤細胞凋亡活性增加。TPX2 的表達水平與細胞周期密切相關，是調節(jié)細胞有絲分裂的蛋白質，在宮頸癌細胞中過表達TPX2 可抑制癌細胞凋亡并增強其侵襲能力。文中宮頸癌病人接受術前新輔助 化 療 后，病 灶 組 織 中FAK、MACC1、GRP94、PRPS2、TPX2 mRNA 的表達量較治療前大幅下降，證實新輔助化療可有效抑制宮頸癌細胞的侵襲活力。

自噬參與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展，在腫瘤發(fā)生早期自噬可清除致癌分子并防止其在細胞內堆積、發(fā)揮抑癌作用；隨腫瘤進展，自噬可幫助腫瘤細胞逃避缺血缺氧等造成的應激狀態(tài)并提高其生存能力、促進腫瘤發(fā)展及耐藥性形成。Beclin1 是一種重要的自噬相關基因，經活化PI3K 而形成自噬小體、增加細胞自噬活性。研究發(fā)現(xiàn)，Beclin1 基因表達缺失的小鼠易發(fā)生腫瘤性疾病。LC3-B 是細胞自噬的標記性分子，其表達量與細胞自噬活性相關，與Beclin1 聯(lián)合形成細胞自噬中心，其異常低表達參與多種惡性腫瘤發(fā)生。PI3KC3 是PI3K 的核心結構，可促進Atg21 等自噬蛋白結合到膜上并形成PAS，參與自噬延伸，將受損、變性蛋白質運輸?shù)饺苊阁w中進行消化降解。文中宮頸癌病人接受術前新輔助化療后，病灶組織中自噬相關基因Beclin1、LC3-B、PI3KC3 mRNA的表達量均大幅增加，證實新輔助化療可有效增強宮頸癌細胞的自噬活力。

綜上所述，ⅠB～ⅡB期宮頸癌病人接受術前新輔助化療，可有效抑制癌細胞的增殖及侵襲活力、增強自噬活性，為后續(xù)根治性手術實施創(chuàng)造良好條件，推薦在日后同類病人中普及應用。