亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        黃芪甲苷對過敏性鼻炎小鼠HMGB1/TLR4/NF-κB信號通路的影響

        2021-03-03 07:36:44田瀅張飛段傳新
        現(xiàn)代免疫學 2021年1期
        關(guān)鍵詞:甲苷黃芪通路

        田瀅,張飛,段傳新

        (湖北省婦幼保健院 耳鼻喉科,武漢 430069)

        過敏性鼻炎(allergic rhinitis,AR),亦稱為變應(yīng)性鼻炎,是一種由IgE介導的Ⅰ型超敏反應(yīng)疾病,臨床表現(xiàn)為打噴嚏、鼻癢、鼻塞、流涕等癥狀,可導致患者生活質(zhì)量嚴重下降[1-3]。全球受AR影響的人約占40%,其在我國11個主要城市中的患病率為8.7%~24.1%,而且發(fā)病率近年來呈上升趨勢[4-5]。目前,治療AR的主要臨床藥物為皮質(zhì)類固醇及抗組胺藥,但無法避免激素抵抗、嗜睡等副作用[6-8],療效不甚理想。AR,又稱“鼻鼽”,主要由于肺氣虛弱,衛(wèi)陽不固,風邪趁虛而入所致。我國傳統(tǒng)醫(yī)學在千百年的臨床實踐中對于鼻鼽的治療積累了豐富的經(jīng)驗。黃芪,性甘溫,歸肺、脾、肝經(jīng),具有增強機體免疫力、抑炎、抗應(yīng)激等作用,黃芪甲苷(astragaloside Ⅳ)是黃芪的主要活性成分之一,研究表明,黃芪甲苷具有抑炎、抗纖維化和免疫調(diào)節(jié)等藥理作用[9-10],是常用中成藥通竅鼻炎片中的主要藥用成分。近年來研究發(fā)現(xiàn),在AR小鼠模型鼻黏膜組織中高遷移率族蛋白B1(high mobi-lity group box 1 protein,HMGB1)和TLR4蛋白表達水平升高,而抑制HMGB1/TLR4途徑可減輕小鼠AR癥狀[11]。黃芪甲苷對TLR4/NF-κB信號通路具有較好的抑制效果[12],但其對AR中HMGB1/TLR4/NF-κB信號通路的影響卻鮮有報道。因此,本研究通過使用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)構(gòu)建AR小鼠模型,觀察黃芪甲苷對AR小鼠的治療效果,同時檢測AR小鼠體內(nèi)HMGB1/TLR4/NF-κB信號通路變化,旨在探討黃芪甲苷對AR小鼠的療效及其免疫機制。

        1 材料與方法

        1.1 動物20只SPF級C57BL/6小鼠,4~6周齡,體質(zhì)量16~20 g,購自湖北省實驗動物研究中心,于華聯(lián)科生物技術(shù)有限公司模型動物研究院飼養(yǎng)。

        1.2 材料黃芪甲苷、羧甲基纖維素鈉(carboxymethylcellulose sodium,CMC-Na),購自上海阿拉丁生化科技股份有限公司;OVA、氫氧化鋁[Al(OH)3],購自Sigma-Aldrich公司;蘇木精、伊紅染液,中性樹脂,小鼠IL-4、IL-6、IL-10、IL-1β、IgE、TNF-α、細胞間黏附分子1(intercellular cell adhesion molecule 1,ICAM-1)和血管細胞黏附分子1(vascular cell adhesion molecule 1,VCAM-1)ELISA試劑盒,兔抗HMGB1抗體,兔抗TLR4抗體和兔抗GAPDH抗體,購自武漢華聯(lián)科生物技術(shù)有限公司;PVDF膜和化學發(fā)光試劑,購自Millipore公司;兔抗NF-κB p65抗體及兔抗p-NF-κB p65抗體,購自Abcam公司。

        1.3 方法

        1.3.1 AR小鼠模型的構(gòu)建[13]將20只C57BL/6小鼠隨機分為5組:正常組,模型組,黃芪甲苷低、中、高劑量組,每組4只。除正常組外,其他4組小鼠均采用OVA誘導AR模型。造模前14 d進行基礎(chǔ)致敏,采用50 μg OVA+5 mg Al(OH)3+1 mL生理鹽水混合液腹腔注射小鼠,隔天1次。第15天給予5% OVA溶液雙側(cè)鼻腔點鼻,每側(cè)20 μL,1次/ d,連續(xù)激發(fā)7 d。同期正常組小鼠使用等量的生理鹽水處理。

        1.3.2 模型評分 在最后一次OVA滴注15 min后,記錄小鼠抓鼻、打噴嚏等癥狀發(fā)生情況;根據(jù)已有報道[14],采用疊加法記錄總分,總分>5則為造模成功。(表1)

        表1 AR小鼠造模評分標準

        1.3.3 給藥處理 黃芪甲苷低、中、高劑量組分別按照12.5、25.0和50.0 mg/kg的劑量于造模成功后第2天進行灌胃給藥處理,正常組和模型組小鼠給予等量的1% CMC-Na灌胃,連續(xù)給藥27 d。

        1.3.4 樣本采集 藥物干預結(jié)束后,于小鼠頸動脈取血,離心后分離血清用于ELISA檢測。所有小鼠處死后,從鼻腔中迅速剝離鼻黏膜組織,將其分為2份,一份用于觀察病理變化,另一份提取蛋白用于分子檢測。

        1.3.5 蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin, HE)染色 取適量鼻黏膜組織進行脫水浸蠟處理,切成厚度為4~5 μm的切片,乙醇脫蠟,二甲苯透明,HE染色;脫水透明后,中性樹脂封片。將染色后的切片置于顯微鏡下觀察其組織形態(tài)及炎癥細胞浸潤情況。

        1.3.6 ELISA檢測 實驗操作嚴格按照ELISA試劑盒說明書進行,采用雙抗體夾心法測定小鼠血清中IL-4、IL-6、IL-10、IL-1β、IgE、TGF-β1、ICAM-1和VCAM-1的濃度。

        1.3.7 Western blotting檢測 剪碎鼻黏膜組織,將20 mg組織加入200 μL裂解液中,勻漿直至完全裂解。裂解后,4 ℃ 12 000×g離心15 min,取上清液。采用BCA法測定蛋白質(zhì)濃度,取20 μg樣本進行SDS-PAGE。濕轉(zhuǎn)法將目的蛋白轉(zhuǎn)印至PVDF膜上,并用含5%脫脂奶粉的封閉液室溫封閉2 h。加入稀釋后的一抗(HMGB1,1∶1 000;TLR4,1∶1 000;NF-κB,1∶1 000;p-NF-κB,1∶5 000),室溫孵育1 h后,PBST漂洗3次。加入抗IgG-HRP二抗,室溫孵育1 h,PBST漂洗3次。加入化學發(fā)光試劑,充分作用后將膜置于全自動化學發(fā)光分析儀中檢測。

        2 結(jié)果

        2.1 黃芪甲苷對小鼠鼻部癥狀的影響正常組小鼠基本無抓鼻、打噴嚏、流涕癥狀,而模型組小鼠出現(xiàn)頻繁抓鼻,鼻頭紅腫甚至輕微出血,流清水涕的癥狀,評分為6.25±0.50,提示實驗造模成功。經(jīng)過黃芪甲苷治療后,小鼠癥狀得到緩解,低劑量組的評分為4.00±1.15,中劑量組為3.00±0.00,高劑量組為1.00±0.00。

        2.2 黃芪甲苷對鼻黏膜病理變化的影響與正常組比較,模型組小鼠鼻黏膜組織中出現(xiàn)大量嗜酸性粒細胞浸潤、組織水腫等現(xiàn)象,經(jīng)過不同劑量的黃芪甲苷干預后,組織中的嗜酸性粒細胞減少,組織結(jié)構(gòu)逐漸恢復完整,其中,高劑量組的治療效果最佳。(圖1)

        圖1 黃芪甲苷對小鼠鼻黏膜組織病理變化的影響(×400)

        2.3 黃芪甲苷對血清中相關(guān)細胞因子水平的影響與正常組比較,模型組小鼠血清中IL-4、IL-6、IL-1β、IgE、TNF-α、ICAM-1和VCAM-1濃度顯著升高(P<0.05),而IL-10濃度顯著降低(P<0.05)。與模型組比較,經(jīng)過黃芪甲苷干預的小鼠血清中IL-4、IL-6、IL-1β、IgE、TNF-α、ICAM-1和VCAM-1濃度降低,IL-10濃度升高,特別是中、高劑量組的效果更顯著(P<0.05)。(表2)

        表2 黃芪甲苷對小鼠血清細胞因子水平的影響

        2.4 黃芪甲苷對HMGB1/TLR4/NF-κB表達的影響Western blotting檢測HMGB1、TLR4、NF-κB及p-NF-κB蛋白表達水平。結(jié)果顯示,與正常組比較,模型組小鼠鼻黏膜組織中HMGB1、TLR4及p-NF-κB蛋白相對表達量顯著升高(P<0.05)。與模型組和低劑量組比較,中、高劑量組的HMGB1、TLR4及p-NF-κB蛋白相對表達量顯著降低(P<0.05)。(圖2、圖3)

        圖2 Western blotting檢測HMGB1、TLR4和p-NF-κB的表達

        注:A.HMGB1相對表達量比較;B.TLR4相對表達量比較;C.p-NF-κB相對表達量比較。與正常組比較,*P<0.05;與模型組比較,#P<0.05;與低劑量組比較,△P<0.05。圖3 黃芪甲苷對小鼠HMGB1/TLR4/NF-κB蛋白表達的影響

        3 討論

        HMGB1是一種高度保守的DNA結(jié)合蛋白,正常生理狀態(tài)下存在于細胞核內(nèi),而當機體受到刺激時,被釋放到細胞外,不僅可以刺激免疫系統(tǒng)產(chǎn)生多種促炎因子引起炎癥反應(yīng),還參與了細胞的信號轉(zhuǎn)導[15-16]。研究發(fā)現(xiàn),HMGB1在AR患兒的鼻腔沖洗液中水平較高,并與AR的嚴重程度相關(guān),推測HMGB1是AR的潛在治療靶點,可通過降低其表達緩解AR[15]。Shimizu等[17]的研究結(jié)果也證實,在AR患者的鼻腔分泌物中HMGB1的濃度明顯升高,其通過TLR4上調(diào)細胞分泌IL-6和IL-8的能力,參與了AR的發(fā)病。有研究報道,HMGB1可與TLR4結(jié)合,相互作用促進NF-κB的轉(zhuǎn)錄激活,促進促炎因子的產(chǎn)生和分泌[18]。NF-κB是一種轉(zhuǎn)錄因子,可觸發(fā)TNF-α、IL-6等細胞因子的上調(diào),從而啟動炎癥反應(yīng)[19]。本研究結(jié)果顯示,AR模型小鼠抓鼻、打噴嚏等癥狀明顯,鼻黏膜組織炎癥細胞浸潤嚴重,血清中促炎因子濃度明顯升高,而鼻黏膜組織中HMGB1、TLR4及p-NF-κB蛋白表達升高,提示在OVA的刺激下,小鼠體內(nèi)HMGB1/TLR4/NF-κB通路被激活和上調(diào),從而導致炎癥反應(yīng)的發(fā)生。

        黃芪是一種常用中藥,黃芪甲苷是黃芪的主要成分。Zhou等[12]研究結(jié)果表明,黃芪甲苷可通過TLR4/NF-κB信號通路抑制促炎因子的釋放,從而抑制細胞炎癥反應(yīng),改善腎間質(zhì)纖維化。Leng等[20]發(fā)現(xiàn),黃芪甲苷可抑制TLR4/NF-κB信號通路,減少IL-6、TNF-α、ICAM-1和VCAM-1的分泌,從而發(fā)揮抑制炎癥反應(yīng),改善血管內(nèi)皮功能障礙的作用(圖4)。因此推測,黃芪甲苷可通過抑制TLR4/NF-κB通路治療AR小鼠。在本研究中,中、高劑量黃芪甲苷干預可緩解AR小鼠癥狀,減少鼻黏膜組織中炎癥細胞的浸潤,同時也降低了血清中IL-4、IL-6、IL-1β、IgE、TNF-α、ICAM-1和VCAM-1的濃度,并使IL-10濃度升高。進一步研究其治療相關(guān)作用機制,發(fā)現(xiàn)小鼠鼻黏膜組織中HMGB1、TLR4及p-NF-κB蛋白表達顯著減少。

        圖4 黃芪甲苷作用機制[20]

        本研究通過OVA誘導AR小鼠模型,黃芪甲苷對其具有較好的治療效果,改善了AR小鼠癥狀及鼻黏膜組織中炎癥細胞浸潤,作用機制可能與其抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信號通路從而減少促炎因子產(chǎn)生有關(guān),該研究結(jié)果將為AR的臨床治療提供理論基礎(chǔ)。但本研究尚存在樣本量小的缺點,后續(xù)需擴大樣本量進一步研究。

        猜你喜歡
        甲苷黃芪通路
        Huangqi decoction (黃芪湯) attenuates renal interstitial fibrosis via transforming growth factor-β1/mitogen-activated protein kinase signaling pathways in 5/6 nephrectomy mice
        “補氣之王”黃芪,你吃對了嗎?
        黃芪是個寶
        海峽姐妹(2019年3期)2019-06-18 10:37:30
        曲美他嗪聯(lián)合黃芪甲苷對心力衰竭犬心肌細胞Ca2+水平的影響
        中成藥(2018年5期)2018-06-06 03:12:05
        Kisspeptin/GPR54信號通路促使性早熟形成的作用觀察
        proBDNF-p75NTR通路抑制C6細胞增殖
        通路快建林翰:對重模式應(yīng)有再認識
        黃芪甲苷對特發(fā)性肺纖維化模型大鼠肺組織CD34表達的影響
        HPLC-ELSD法測定牛黃降壓丸中黃芪甲苷的含量
        HPLC-ELSD法同時測定玉屏風總苷中黃芪皂苷Ⅱ及黃芪甲苷
        中成藥(2014年8期)2014-02-28 22:28:38
        国产日产高清欧美一区| 精品久久亚洲中文字幕| 欧美又粗又长又爽做受| 台湾佬综合网| 91精品国产91热久久p| 精品国产一区二区三区九一色| 亚洲综合另类小说色区| 婷婷亚洲久悠悠色悠在线播放| 国产主播在线 | 中文| 国产三级精品三级在专区中文| 亚洲中文字幕日产无码| 熟妇的荡欲色综合亚洲| 亚洲一区二区三区av在线免费| 99久久久69精品一区二区三区| 日本一卡二卡3卡四卡免费观影2022| 亚洲乱码国产一区三区| 久久99精品这里精品动漫6| 日本一区二区三区丰满熟女| 女人被男人爽到呻吟的视频| 国产suv精品一区二区69| 亚洲人成在线播放a偷伦| 三上悠亚亚洲精品一区| 少妇高潮一区二区三区99| 91视频88av| 亚洲天堂一区二区精品| 国产精品沙发午睡系列| 国产无人区码一码二码三mba| 久久久久久99精品| 精品久久一区二区三区av制服| 亚洲男同gay在线观看| 久久精品亚洲牛牛影视| 中文字幕久久熟女人妻av免费| 欧美成人精品第一区| 亲子乱aⅴ一区二区三区下载| 国产精品不卡无码AV在线播放 | 初女破初的视频| 亚洲国产成人精品91久久久| 亚洲中文中文字幕乱码| 色婷婷五月综合久久| 亚洲视频天堂| 亚洲女人天堂成人av在线|