趙 燕，侯鳳香，鄭遠(yuǎn)博，林立焓，張慧慧，李圣才，金俊杰

（溫州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院動(dòng)物科學(xué)研究所，浙江溫州 325000）

黑水虻是一種雙翅目水虻科昆蟲，幼蟲營(yíng)腐生，能夠快速將畜禽糞便、餐廚垃圾等有機(jī)廢棄物分解轉(zhuǎn)化為自身的生物量。黑水虻含有較高的蛋白質(zhì)、脂肪以及氨基酸、脂肪酸等，可作為蛋白質(zhì)飼料應(yīng)用于動(dòng)物生產(chǎn)，因此引起了國內(nèi)外高度關(guān)注。陳曉瑛等[1]研究表明，黑水虻幼蟲粉替代30% 魚粉不影響黃顙魚幼魚的生長(zhǎng)性能和肌肉呈味氨基酸組成。張放等[2]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加25‰黑水虻蟲粉不影響生長(zhǎng)豬的生產(chǎn)性能，可以替代生長(zhǎng)豬基礎(chǔ)飼糧中的部分豆粕。Cutrigenelli等[3]用黑水虻幼蟲粉完全替代豆粕飼喂蛋雞，發(fā)現(xiàn)蛋雞采食量減少，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率降低，但小腸酶活性與盲腸揮發(fā)性脂肪酸含量增加。以上研究基本都是將黑水虻幼蟲粉作為豆粕或魚粉替代物，研究其對(duì)動(dòng)物各指標(biāo)的影響[1-3]。近年來，黑水虻幼蟲補(bǔ)飼放養(yǎng)雞深受養(yǎng)殖戶歡迎。受雞生理行為影響，放養(yǎng)雞特別喜歡啄食黑水虻幼蟲，尤其是活蟲[4]。但目前活蟲在遠(yuǎn)距離運(yùn)輸上存在一定困難，蟲干能否替代活蟲補(bǔ)飼放養(yǎng)雞，尚未開展研究。本試驗(yàn)旨在研究黑水虻幼蟲干對(duì)放養(yǎng)肉雞生產(chǎn)性能、健康狀況、腸道發(fā)育及雞肉養(yǎng)分含量的影響，以期為黑水虻幼蟲在放養(yǎng)雞生產(chǎn)上的應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 黑水虻幼蟲由浙江昆微農(nóng)業(yè)科技有限公司養(yǎng)殖基地用廚余垃圾飼養(yǎng)，幼蟲經(jīng)分離干燥制成蟲干，其養(yǎng)分含量由廠家抽樣測(cè)定，見表1。

表1 黑水虻幼蟲干營(yíng)養(yǎng)成分（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)雞為廣東香雞公雞，飼養(yǎng)于蒼南縣月樂農(nóng)業(yè)開發(fā)有限公司。選取體重（196.22±0.42）g、健康狀況良好的15 d 雛雞1 440 只，隨機(jī)分成4 組，即對(duì)照組、2%蟲干組、4%蟲干組、6%蟲干組，每組5 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)72 只。4 組試驗(yàn)雞分別置于4 個(gè)獨(dú)立的雞棚內(nèi)，每個(gè)雞棚用鐵絲網(wǎng)隔成5 個(gè)獨(dú)立的區(qū)域，每個(gè)區(qū)域配套環(huán)境與面積相同的果桑林放養(yǎng)場(chǎng)地。每組試驗(yàn)雞均在07:00 放養(yǎng)前、19:00 歸舍時(shí)補(bǔ)飼。預(yù)試14 d 后，開始在基礎(chǔ)飼糧中添加黑水虻幼蟲干，添加量分別為0（對(duì)照組）、2%、4%、6%。試驗(yàn)雞自由采食、自由飲水，采用自然光照，免疫程序正常進(jìn)行。正試期42 d?；A(chǔ)飼糧調(diào)制與養(yǎng)分含量計(jì)算參照《雞的飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)-地方品種肉用雞的飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》（ZB B 43005-86）和《蛋雞和肉雞配合飼料》（GB/T 5916-2008），其組成和營(yíng)養(yǎng)成分見表2。

表2 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)成分（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.3 測(cè)定指標(biāo)與方法

1.3.1 生長(zhǎng)性能 試驗(yàn)第1 天和第56 天（包括預(yù)試期，考慮到預(yù)試期試驗(yàn)條件相同，并且雞群數(shù)量大，全部抓應(yīng)激較大，所以正試期開始雞沒有稱重），每天09:00空腹稱重。每周記錄重復(fù)組試驗(yàn)雞飼料消耗量。試驗(yàn)結(jié)束后，分別計(jì)算每組試驗(yàn)雞平均日增重（g/d）、平均日采食量（g/d）、耗料增重比（日采食量/日體增重）和蟲干消耗量（kg）。

1.3.2 血清生化指標(biāo) 試驗(yàn)結(jié)束后，在對(duì)照組、6%蟲干組的每個(gè)重復(fù)隨機(jī)取2 只雞，翅靜脈采血5 mL，靜置30 min，3 000 r/min 離心15min，取上層血清，置于離心管中，-20℃保存?zhèn)溆?。采用VetTest-8008 生化儀進(jìn)行谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLO）、血糖（Glu）、膽固醇（Chol）、甘油三酯（TG）測(cè)定，試劑盒購自上海華澍生物有限公司。

1.3.3 臟器指數(shù) 試驗(yàn)結(jié)束后，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)取2 只雞（共計(jì)40 只）進(jìn)行屠宰，打開腹腔，分離出心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟，稱重，計(jì)算臟器指數(shù)：

臟器指數(shù)=臟器質(zhì)量（g）/宰前活重（kg）

1.3.4 小腸絨毛高度與隱窩深度 分離十二指腸、空腸、回腸，在每段腸道中斷取2 cm 左右腸道樣品，用生理鹽水將腸道內(nèi)容物沖洗干凈，放到10% 中性福爾馬林固定液中常溫保存，以備制作石蠟切片。切片由北京博度恒益科技有限公司制作。切片正置光學(xué)顯微鏡（40×）下進(jìn)行觀察、拍照，每個(gè)切片隨機(jī)抽取5 個(gè)典型視野（絨毛完整、走向平直）測(cè)量小腸絨毛高度、隱窩深度。

1.3.5 雞肉養(yǎng)分含量 取胸肌約50 g 左右置封口袋中，-20℃保存，用于測(cè)定雞肉水分、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪、氨基酸、脂肪酸含量。按照《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中水分的測(cè)定》（GB 5009.3-2016），采用直接干燥法測(cè)定水分；按照《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中粗蛋白質(zhì)的測(cè)定》（GB 5009.15-2016），采用凱氏定氮法測(cè)定粗蛋白質(zhì)；按照《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中脂肪的測(cè)定》（GB 5009.6-2016），采用索氏抽提法測(cè)定粗脂肪。氨基酸測(cè)定參照《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中氨基酸的測(cè)定》（GB 5009.124-2016），進(jìn)行前處理，上機(jī)采用OPA 和FMOC 柱前衍生液相色譜法測(cè)定。脂肪酸測(cè)定參照《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中脂肪酸的測(cè)定》（GB 5009.168-2016），采用歸一化法測(cè)定，上機(jī)采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS17.0 軟件的One-Way ANOVA 程序進(jìn)行方差分析，并采用LSD 法進(jìn)行組間差異顯著性檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異顯著，P＜0.01 為差異極顯著。試驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果

2.1 不同黑水虻幼蟲干添加量對(duì)肉雞生產(chǎn)性能的影響由表3 可知，添加黑水虻幼蟲干對(duì)肉雞平均日增重、平均日采食量、耗料增重比、蟲干消耗量影響不顯著。

表3 不同黑水虻幼蟲干添加量對(duì)肉雞生產(chǎn)性能的影響

2.2 不同黑水虻幼蟲干添加量對(duì)肉雞血液生化指標(biāo)的影響由表4 可知，與對(duì)照組相比，6% 蟲干組肉雞ALT、AST、TP、ALB、GLO、Chol、TG 無顯著變化，但Glu升高31.72%（P＜0.01）。

表4 不同黑水虻幼蟲干添加量對(duì)肉雞血液生化指標(biāo)的影響

2.3 不同黑水虻幼蟲干添加量對(duì)肉雞臟器指數(shù)的影響由表5 可知，黑水虻幼蟲干添加量對(duì)肉雞各臟器指數(shù)無顯著影響。6%蟲干組肉雞心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟指數(shù)均高于其他組。

表5 不同黑水虻幼蟲干添加量對(duì)肉雞臟器指數(shù)的影響 g/kg

2.4 不同黑水虻幼蟲干添加量對(duì)肉雞小腸絨毛高度與隱窩深度的影響 由表6 可知，黑水虻幼蟲干添加量對(duì)肉雞十二指腸、空腸的絨毛高度、隱窩深度及回腸隱窩深度無顯著影響。2%、4%、6% 蟲干組回腸絨毛高度分別比對(duì)照組高58.20%（P＜0.05）、13.58%（P＞0.05）、46.71%（P＜0.05），2%蟲干組分別比4%、6%蟲干組高39.28%（P＜0.05）、7.83%（P＞0.05）。

表6 不同黑水虻幼蟲干添加量對(duì)肉雞腸道形態(tài)的影響 μm

2.5 不同黑水虻幼蟲干添加量對(duì)肉雞雞肉養(yǎng)分含量的影響 由表7 可知，黑水虻幼蟲干添加量對(duì)雞肉水分、粗脂肪含量無顯著影響。2%、4%、6%蟲干組雞肉粗蛋白質(zhì)含量較對(duì)照組分別增加12.30%（P＜0.05）、10.00%（P＞0.05）、8.42%（P＞0.05）。

表7 不同黑水虻幼蟲干添加量對(duì)雞肉養(yǎng)分含量的影響（鮮肉） %

由表8 可知，隨著黑水虻幼蟲干添加量的增加，雞肉氨基酸總量呈升高趨勢(shì)，2%、4%、6% 蟲干組較照組分別提高3.26%（P＞0.05）、3.77%（P＞0.05）、6.10%（P＜0.05）。2%、6% 蟲干組甘氨酸較對(duì)照組分別增加17.92%（P＜0.05）、22.64%（P＜0.05）。2%、4%蟲干組亮氨酸較對(duì)照組分別增加4.43%（P＞0.05）、12.81%（P＜0.01）。與對(duì)照組相比，2%、4%、6% 蟲干組苯丙氨酸分別增加11.46%（P＞0.05）、28.13%（P＜0.01）、11.46%（P＞0.05），酪氨酸分別增加29.21%（P＜0.01）、37.08%（P＜0.01）、22.47%（P＜0.01），半胱氨酸分別增加53.33%（P＜0.01）、40.00%（P＜0.05）、66.67%（P＜0.01），組氨酸分別增加56.86%（P＜0.01）、50.98%（P＜0.01）、52.94%（P＜0.01）。丙氨酸、絲氨酸、脯氨酸、谷氨酸、甲硫氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、蘇氨酸在對(duì)照組與蟲干組間無顯著差異。蟲干組精氨酸降低，其中4%蟲干組低于對(duì)照組（P＜0.05）。

由表9 可知，雞肉長(zhǎng)鏈脂肪酸含量呈現(xiàn)一定變化。與對(duì)照組相比，2%、4%、6% 蟲干組C14:0 分別提高71.51%（P＜0.05）、55.38%（P＞0.05）、17.20%（P＞0.05），C16:0 分別提高3.03%（P＞0.05）、2.36%（P＞0.05）、4.82%（P＜0.05），C17:0 分別提高57.89%（P＞0.05）、65.79%（P＞0.05）、86.84%（P＜0.05），C17:1 分別增加0.25（P＞0.05）、0（P＞0.05）、0.30（P＜0.05）。

表8 不同黑水虻幼蟲干添加量對(duì)雞肉氨基酸含量的影響 g/100g 鮮肉

表9 不同黑水虻幼蟲干添加量對(duì)雞肉長(zhǎng)鏈脂肪酸含量的影響（干物質(zhì)基礎(chǔ)） %

3 討 論

3.1 不同黑水虻幼蟲干添加量對(duì)肉雞生產(chǎn)性能的影響本試驗(yàn)中黑水虻幼蟲干對(duì)肉雞平均日增重、平均日采食量、耗料增重比影響不顯著，與Moula 等[4]用8% 黑水虻鮮蟲替代基礎(chǔ)飼糧后肉雞平均日增重、耗料增重比無顯著變化的結(jié)果一致。而Marono 等[5]研究發(fā)現(xiàn)黑水虻幼蟲粉替代豆粕，蛋雞采食量極顯著降低；Nekrasov等[6]則發(fā)現(xiàn)飼糧中添加黑水虻幼蟲有助于提高生長(zhǎng)豬的平均日增重，與本研究結(jié)果相悖，可能與動(dòng)物品種、黑水虻收獲期、加工方式有關(guān)。與幼蟲期收獲的黑水虻相比，預(yù)蛹期收獲的黑水虻含有較高的甲殼素[7]，較高的甲殼素含量會(huì)使飼料蛋白質(zhì)消化率降低[3]，導(dǎo)致動(dòng)物采食量降低，從而降低日增重。同時(shí)，黑水虻的脫脂程度也會(huì)影響飼糧消化率，低脫脂黑水虻幼蟲粉飼糧組肉雞粗脂肪消化率與代謝能顯著升高[8]。本試驗(yàn)用黑水虻在預(yù)蛹量達(dá)10%時(shí)收獲，未脫脂。

3.2 不同黑水虻幼蟲干添加量對(duì)肉雞血液生化指標(biāo)的影響 血液生化指標(biāo)是衡量動(dòng)物是否健康的重要指標(biāo)，可以反映動(dòng)物的生理機(jī)能和代謝狀況。血清AST、ALT活性通常與肝臟損傷有關(guān)，其活性升高標(biāo)志著肝臟在一定程度受損。TP 濃度包括ALB 與GLO，與機(jī)體免疫功能、肝腎功能有密切關(guān)系。本試驗(yàn)中不同組間肉雞血清AST、ALT、TP、ALB 與GLO 無顯著變化，結(jié)合對(duì)臟器指數(shù)的影響，說明黑水虻幼蟲干不會(huì)對(duì)肝、腎健康及機(jī)體免疫功能造成影響。本試驗(yàn)結(jié)果與Belghit 等[9]、Wallace 等[10]研究結(jié)果一致，即黑水虻幼蟲粉替代魚粉對(duì)大西洋鮭魚、珍珠雞血清ALT、AST、ALB、TP、Chol、TG 無影響。但是，當(dāng)黑水虻幼蟲粉替代魚粉量達(dá)到66% 時(shí)大西洋鮭魚Glu 顯著升高[9]。本研究中當(dāng)蟲干添加量達(dá)到6%時(shí)，血清Glu 含量極顯著升高，可能與黑水虻含有較豐富的中鏈脂肪酸有關(guān)，中鏈脂肪酸主要是C16-C12，被認(rèn)為是生理活性化合物，被優(yōu)先用作能源，減少脂肪組織的沉積[11]；本試驗(yàn)Glu 升高與Chol、TG 降低相符，但其代謝途徑及其作用機(jī)理還有待于深入研究。

3.3 不同黑水虻幼蟲干添加量對(duì)肉雞臟器指數(shù)的影響關(guān)于黑水虻對(duì)雞臟器指數(shù)影響的研究較少。Moula 等[4]研究表明，黑水虻活蟲對(duì)本地雞胃、心、肝、脾重量沒有影響。Biasato 等[12]研究發(fā)現(xiàn)，黑水虻幼蟲粉飼糧對(duì)仔豬胃、腸、肝、腎、脾、肺各組織病理學(xué)評(píng)分無顯著影響。這與本試驗(yàn)結(jié)果一致。結(jié)合血清生化指標(biāo)結(jié)果，初步判斷，黑水虻幼蟲干不會(huì)對(duì)肉雞各臟器組織的生長(zhǎng)發(fā)育造成影響。

3.4 不同黑水虻幼蟲干添加量對(duì)肉雞小腸絨毛高度與隱窩深度的影響 小腸是動(dòng)物消化吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的重要器官，消化吸收的主要部位是腸道絨毛和隱窩。一般來說，絨毛高度越高，腸道與食糜接觸的上皮細(xì)胞的表面積越大，消化酶分泌增多，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收率變強(qiáng)；而隱窩深度越淺，說明腸上皮細(xì)胞的成熟率越高，細(xì)胞分泌的消化液增加，吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的能力變強(qiáng)。Cutrignelli 等[3]研究發(fā)現(xiàn)，黑水虻幼蟲粉能夠促進(jìn)蛋雞十二指腸絨毛高度增加，卻抑制了空腸、回腸絨毛的生長(zhǎng)。Spranghers等[13]研究表明，黑水虻飼糧對(duì)斷奶仔豬空腸絨毛高度與隱窩深度無影響。研究結(jié)果的不同可能與飼糧構(gòu)成、理化性質(zhì)、動(dòng)物品種、日齡等有關(guān)。本試驗(yàn)中，隨蟲干添加量的增加，肉雞十二指腸、空腸絨毛高度有減低趨勢(shì)，但回腸絨毛高度顯著增加。

3.5 不同黑水虻幼蟲干添加量對(duì)肉雞雞肉養(yǎng)分含量的影響 一般來說，動(dòng)物肌肉養(yǎng)分構(gòu)成直接受飼糧影響。陳曉瑛等[1]研究發(fā)現(xiàn)，黑水虻幼蟲粉替代魚粉有利于增加黃顙魚幼魚肌肉粗蛋白質(zhì)、氨基酸含量。Belghit 等[9]通過用黑水虻幼蟲粉替代魚粉飼喂大西洋鮭魚，發(fā)現(xiàn)魚體中C12:0、n-3/n-7 隨替代量增加而顯著增加。Li等[11]研究表明，黑水虻油能夠提高鯉魚肌肉C12:0、C14:0、C22:6n-3 含量。但也有研究表明，采食黑水虻飼糧后，動(dòng)物肌肉粗蛋白質(zhì)、氨基酸、粗脂肪[14]或脂肪酸含量[4]沒有顯著變化。本研究表明，黑水虻蟲干能夠顯著提高雞肉粗蛋白質(zhì)、甘氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、組氨酸與C14:0、C16:0、C17:0、C17:1 含量。飼養(yǎng)基質(zhì)不同，黑水虻蟲體養(yǎng)分含量不同，可能導(dǎo)致了研究結(jié)果的不一致。變質(zhì)果蔬或牛糞飼養(yǎng)的黑水虻幼蟲粗纖維含量較高，而以廚余垃圾為食的黑水虻幼蟲脂肪含量較高[7]。本試驗(yàn)中黑水虻由廚余垃圾飼養(yǎng)而成，其粗蛋白質(zhì)、粗脂肪含量相對(duì)較高。

4 結(jié) 論

本研究結(jié)果表明，肉雞飼糧中補(bǔ)飼黑水虻幼蟲干不影響肉雞生產(chǎn)性能，可以提高雞肉蛋白質(zhì)、氨基酸、脂肪酸含量，在6%添加量范圍內(nèi)，不會(huì)對(duì)肉雞肝、腎功能造成健康影響。