范雁東，羅坤，丁崇學(xué)，李彥東，孫宏杰，周凱

垂體腺瘤(pituitary adenoma，PA)是臨床常見(jiàn)的腫瘤性疾病之一，占全部顱內(nèi)腫瘤的10%，其術(shù)后復(fù)發(fā)率較高，對(duì)患者預(yù)后及生活質(zhì)量影響明顯[1-2]。研究顯示，部分垂體腺瘤的發(fā)生與原癌基因的激活和抑癌基因的失活導(dǎo)致基因突變有關(guān)[3-4]。PA可分為無(wú)功能垂體腺瘤(NFPA)和功能性垂體腺瘤(FPA)，F(xiàn)PA根據(jù)其分泌激素的不同又可進(jìn)一步分為促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)型、生長(zhǎng)激素(GH)型、催乳素(PRL)型及混合型等[5]。手術(shù)是PA常見(jiàn)的治療方式，放療和藥物治療亦有一定幫助[6]。近年來(lái)，研究發(fā)現(xiàn)微小RNA(microRNA，miR)在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中有重要意義[7-8]。 研究顯示miR-145在垂體腺瘤組織中的表達(dá)存在明顯差異[9-10]，但其具體表達(dá)情況、與患者臨床特點(diǎn)的關(guān)系及對(duì)預(yù)后判斷的價(jià)值研究目前少有報(bào)道?，F(xiàn)分析miR-145在垂體腺瘤患者腫瘤組織中的表達(dá)及其與臨床特征和預(yù)后的關(guān)系，為進(jìn)一步解釋垂體腺瘤的發(fā)病機(jī)制及臨床治療提供思路，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2016年1月—2019年1月新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院神經(jīng)外科行蝶竇入路行垂體腺瘤切除術(shù)患者120例(PA組)，包括NFPA亞組60例和FPA亞組60例，其中FPA包括ACTH型3例，GH型7例，PRL型32例及混合型18例[5]。PA組患者年齡36～76歲，中位年齡52歲。另選取同期經(jīng)病理檢查為正常垂體的尸體標(biāo)本20份作為對(duì)照組，患者死亡年齡41～75歲，中位年齡54歲。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者或家屬知情同意并簽署同意書。

1.2 病例選擇標(biāo)準(zhǔn) (1)納入標(biāo)準(zhǔn)：①手術(shù)切除垂體標(biāo)本經(jīng)病理及免疫組化確診為垂體腺瘤；②所有垂體腺瘤患者均為初治；③患者臨床病理特征資料完整。(2)排除標(biāo)準(zhǔn)：①入組前經(jīng)過(guò)化療、生物治療及其他藥物治療者；②有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者；③合并其他部位腫瘤者；④不同意參與研究者。

1.3 檢測(cè)指標(biāo)與方法

1.3.1 垂體組織miR-145測(cè)定：手術(shù)及尸檢后取出垂體標(biāo)本立即放入液氮保存，存入-80℃冰箱待檢。垂體腺瘤及其亞型采用免疫組化方法進(jìn)行。目標(biāo)miRNA的測(cè)量經(jīng)過(guò)分離—逆轉(zhuǎn)錄—定量檢測(cè)等過(guò)程。其中垂體組織總RNA分離采用TRIzol試劑(美國(guó)Invitrogen Inc公司)進(jìn)行，而后經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄試劑盒完成cDNA的合成，采用SYBR Green RT-PCR試劑盒(日本Takara公司)進(jìn)行PCR。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCT)對(duì)垂體組織miR-145表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)。該實(shí)驗(yàn)過(guò)程中各加樣步驟均采用加樣器進(jìn)行，所得最終實(shí)驗(yàn)結(jié)果以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。miR-145 的引物(廣州復(fù)能基因有限公司)均用Primer5.0設(shè)計(jì)完成，其中miR-145逆轉(zhuǎn)錄引物序列為：5’-GTCGTATCCAGTGCGTGTCGTGGAGTCGGCAATTGCCACTGGATACGAC

AGGGAT-3’。miR-145 PCR(美國(guó)BIO公司)反應(yīng)的上、下游引物序列分別為5’-GTCCAGTTTTCCCAGGA-3’和 5’-TGCGTGTCGTGGAGTC-3’。

1.3.2 隨訪：對(duì)120例患者定期于門診復(fù)查或電話等方式進(jìn)行隨訪，隨訪時(shí)間為出院日至2019年7月31日，患者死亡、脫失或復(fù)發(fā)即為終止。

2 結(jié) 果

2.1 各組垂體miR-145表達(dá)比較 對(duì)照組miR-145相對(duì)表達(dá)量為3.278±0.261(2.803～3.723)，高于PA組的2.228±2.160(0.134～7.492)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.165，P=0.032)；FPA及NFPA亞組相對(duì)表達(dá)量分別為4.169±1.318、0.287±0.117，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=22.725，P=0.000)。

2.2 垂體瘤組織miR-145表達(dá)在不同臨床/病理特征中比較 垂體腺瘤患者miR-145的表達(dá)在不同年齡、是否具有侵襲性及腫瘤分型中比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)；而在不同性別及腫瘤直徑中比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表1。

表1 120例垂體腺瘤患者miR-145表達(dá)在不同臨床/病理特征中比較

2.3 復(fù)發(fā)情況 本研究中垂體組織miR-145相對(duì)表達(dá)量中位數(shù)為0.268，以此為分界值將FPA患者分為miR-145高表達(dá)亞組(≥0.268)和miR-145低表達(dá)亞組(<0.268)。PA患者120例隨訪6～36個(gè)月，失訪病例10例(低表達(dá)亞組6例，高表達(dá)亞組4例)，復(fù)發(fā)32例(29.09%)，其中miR-145高表達(dá)亞組復(fù)發(fā)10例(17.85%，10/56)，miR-145低表達(dá)亞組復(fù)發(fā)22例(40.74%，22/54)，2亞組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=3.851，P=0.050)，見(jiàn)圖1。

圖1 miR-145表達(dá)與垂體腺瘤患者復(fù)發(fā)之間的關(guān)系

3 討 論

垂體腺瘤是原發(fā)于垂體的腫瘤性疾病，臨床數(shù)據(jù)顯示，垂體腺瘤占全部顱內(nèi)腫瘤的10%以上。該腫瘤一般惡性程度較低，很少引起遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，但因其位置特殊，手術(shù)切除難度較大。盡管放化療技術(shù)和分子研究已不斷深入，目前手術(shù)治療仍是垂體腺瘤的主要治療方式。但臨床實(shí)踐發(fā)現(xiàn)，術(shù)后復(fù)發(fā)是該病較為棘手的問(wèn)題。體積較大的垂體腺瘤可對(duì)周圍組織產(chǎn)生壓迫而造成臨床癥狀，功能性垂體腺瘤因分泌不同激素可造成相應(yīng)的臨床表現(xiàn)[11]。因此，從垂體腺瘤發(fā)生機(jī)制著手方可徹底解決這一難題。

微小RNA是一類長(zhǎng)度為21～25個(gè)核酸并可靶向結(jié)合mRNA的RNA家族，其可抑制靶向mRNA翻譯或?qū)е缕渥冃?，進(jìn)而影響下游基因的表達(dá)。越來(lái)越多的研究表明，眾多腫瘤組織中存在許多異常表達(dá)的miRNA。國(guó)外學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，在ACTH型垂體腺瘤組織中存在188種表達(dá)上調(diào)、160種表達(dá)下調(diào)的miRNA，并提出這些異常表達(dá)的miRNA對(duì)垂體腺瘤的發(fā)生發(fā)展有重要作用[12]。此外，少數(shù)研究也表明NFPA同樣存在部分異常表達(dá)的miRNA[13]。有學(xué)者通過(guò)對(duì)垂體腺瘤組織進(jìn)行基因差異性分析得到部分差異性表達(dá)的miRNA[14]，其中miR-145屬于表達(dá)下降的miRNA。國(guó)內(nèi)學(xué)者對(duì)miR-145的研究主要集中在消化系統(tǒng)腫瘤上，如肝癌、結(jié)腸癌等[15]，研究顯示miR-145在這些腫瘤中均低表達(dá)。

本研究采用qRT-PCR技術(shù)檢測(cè)miR-145在垂體腺瘤患者中的表達(dá)，分析其與臨床特征、分型及預(yù)后的相關(guān)性。結(jié)果提示，miR-145在PA患者中的表達(dá)較正常者顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示miR-145低表達(dá)可能是PA發(fā)生的危險(xiǎn)因素，但通過(guò)對(duì)垂體腺瘤亞型的分析卻發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)PA中miR-145的表達(dá)卻明顯升高，這提示FPA與NFPA的發(fā)生機(jī)制可能存在差異，在治療中也應(yīng)該分別對(duì)待。miR-145在垂體腺瘤患者中的表達(dá)與患者年齡、是否具有侵襲性及分型密切相關(guān)，即年齡≥45歲、具有侵襲性及NFPA患者miR-145表達(dá)顯著下降。這與Pertichetti等[16]的研究結(jié)果類似。隨訪分析顯示，miR-145高表達(dá)組垂體腺瘤患者術(shù)后復(fù)發(fā)率顯著低于低表達(dá)組(P<0.05)，提示垂體腺瘤患者miR-145的低表達(dá)是不良預(yù)后的預(yù)測(cè)因素。

綜上，miR-145參與了垂體腺瘤的發(fā)生、發(fā)展，可作為垂體腺瘤患者尤其是NFPA患者潛在的預(yù)后標(biāo)志物及可能的治療靶點(diǎn)。本研究的不足之處在于，研究例數(shù)較少，隨訪的時(shí)間不夠長(zhǎng)，對(duì)具體參與分子機(jī)制的研究有待進(jìn)一步加強(qiáng)。

利益沖突：所有作者聲明無(wú)利益沖突

作者貢獻(xiàn)聲明

范雁東、周凱：設(shè)計(jì)研究方案，實(shí)施研究過(guò)程，論文撰寫；羅坤、丁崇學(xué)：提出研究思路，分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)，論文審核；李彥東、孫宏杰：實(shí)施研究過(guò)程，資料搜集整理，論文修改