張新宇，劉超楠，楊乾龍，韓菲菲，張如春，李光玉，劉晗璐

(中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所，特種經(jīng)濟(jì)動(dòng)物分子生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，長(zhǎng)春 130112)

貉是一種珍貴經(jīng)濟(jì)動(dòng)物，是我國(guó)毛皮動(dòng)物中最易養(yǎng)殖的品種，而提升毛皮品質(zhì)是提高貉經(jīng)濟(jì)效益的重要措施。機(jī)體毛色隨著毛黑色素含量的變化而變化，而酪氨酸酶是影響黑色素生成的重要限速酶[1]。酪氨酸酶有兩個(gè)含銅離子位點(diǎn)構(gòu)成的活性中心[2-3]，黑色素的生物合成是一個(gè)由酪氨酸酶活性中心催化體內(nèi)酪氨酸羥化而啟動(dòng)一系列生化反應(yīng)生成黑色素的過程[4]。國(guó)內(nèi)學(xué)者對(duì)卡拉庫爾羊的毛色研究發(fā)現(xiàn)，銅元素含量在毛中呈現(xiàn)黑色毛>雜色毛>白色毛的規(guī)律[5]。許蘭嬌等[6]在對(duì)烏骨雞的研究中發(fā)現(xiàn)，添加適量的銅會(huì)影響器官、組織的黑色素含量以及酪氨酸酶活性。由此得知，飼糧中改變銅的含量會(huì)影響機(jī)體毛色的改變。此外，飼糧銅添加水平會(huì)明顯改變血清中一些抗氧化酶的活性，國(guó)內(nèi)學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，飼喂不同銅水平的飼糧，會(huì)影響豬、兔、羊、牛等動(dòng)物血清中銅藍(lán)蛋白和銅鋅超氧化物歧化酶的活性，提高清除體內(nèi)自由基能力，從而提高機(jī)體免疫力[7-10]。我國(guó)是世界毛皮生產(chǎn)大國(guó)，但由于高檔毛皮產(chǎn)量較低，因此也是毛皮進(jìn)口大國(guó)，為提高貉的毛皮品質(zhì)，減少貉在飼養(yǎng)中的疾病問題，本試驗(yàn)通過在飼糧中添加不同含量的蛋氨酸銅，探討毛皮品質(zhì)、血清生化指標(biāo)、器官指數(shù)及相關(guān)酶的活性等指標(biāo)變化情況，為烏蘇里貉飼糧中銅含量的最佳水平提供建議值，為貉的飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與飼養(yǎng)管理

飼養(yǎng)試驗(yàn)在中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所長(zhǎng)白山野生生物資源重點(diǎn)野外科學(xué)觀測(cè)試驗(yàn)站進(jìn)行。隨機(jī)選取(135±5)日齡、健康、體重相近((6.32±0.02)kg)的雄性烏蘇里貉105只，隨機(jī)分成7組(對(duì)照組和Ⅰ～Ⅵ組)，每組15只，單籠飼養(yǎng)。所有試驗(yàn)動(dòng)物常規(guī)免疫、單籠飼養(yǎng)，每日07:00與15:30各飼喂1次，自由飲水。預(yù)飼期7 d，正式試驗(yàn)60 d。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與試驗(yàn)飼糧

試驗(yàn)采用單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)，各組基礎(chǔ)飼糧相同，分別添加蛋氨酸螯合銅(C10H20S2N2O4Cu)0(對(duì)照組)、30(Ⅰ組)、45(Ⅱ組)、60(Ⅲ組)、75(Ⅳ組)、90(Ⅴ組)、200(Ⅵ組)mg·kg-1，試驗(yàn)所用蛋氨酸螯合銅購(gòu)自秦皇島市三晶新農(nóng)飼料有限公司，含量為12%(以銅元素計(jì))。各處理組飼糧實(shí)際銅含量為4.1(對(duì)照組)、34.1(Ⅰ組)、49.1(Ⅱ組)、64.1(Ⅲ組)、79.1(Ⅳ組)、94.1(Ⅴ組)、204.1(Ⅵ組)mg·kg-1。

試驗(yàn)參考狐NRC(1982)[11]及大中型養(yǎng)殖場(chǎng)中生產(chǎn)實(shí)踐中應(yīng)用效果較好的烏蘇里貉育成期各營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)需要量，配制貉基礎(chǔ)日糧，其組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。

表1 試驗(yàn)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1.3 樣品采集與指標(biāo)測(cè)定

1.3.1 血清樣品制備及生化指標(biāo)測(cè)定 飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，每組隨機(jī)選取8只健康烏蘇里貉，活體空腹稱重后采心血10 mL并處死，血液收集于促凝采血管中，經(jīng)3 500 r·min-1離心8 min，將分離出的血清分裝在1.5 mL編好號(hào)的Eppendorf管中，置于-80 ℃保存，備用。丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase，ALT)、天門冬酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferase，AST)、堿性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)、乳糖脫氫酶(lactic dehydrogenase，LDH)、血清葡萄糖(glucose，GLU)的測(cè)定采用試劑盒，以上試劑盒均購(gòu)自中生北控生物科技股份有限公司，按照試劑盒說明，使用VITALIB-E全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定。

血清中總超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase，T-SOD)、銅鋅超氧化物歧化酶(copper and zinc superoxide dismutase，Cu-Zn SOD)、銅藍(lán)蛋白(ceruloplasmin，CER)活力的測(cè)定采用試劑盒，以上試劑盒均購(gòu)自南京建成生物科技有限公司，按照試劑盒說明，使用紫外分光光度計(jì)測(cè)定吸光度并計(jì)算酶活力。

1.3.2 毛皮品質(zhì)指標(biāo)測(cè)定 烏蘇里貉的體長(zhǎng)是把處死的貉平放于水平地面上，鼻尖至尾根的距離。鮮皮長(zhǎng)為貉皮去油后，上楦板，測(cè)量鼻尖到尾根的距離。測(cè)量貉皮重量為鮮皮重。之后平穩(wěn)地在貉背中部取帶毛囊的樣本三束，分別放入自封袋內(nèi)。帶回實(shí)驗(yàn)室后，使用游標(biāo)卡尺測(cè)定貉的針毛長(zhǎng)與絨毛長(zhǎng)，采用光學(xué)纖維直徑分析儀測(cè)定貉背部針絨毛細(xì)度，以最粗部位直徑進(jìn)行數(shù)據(jù)記錄

1.3.3 臟器指數(shù)測(cè)定 上述各組中8只烏蘇里貉處死，取皮后迅速取出心、肝、脾和腎，用濾紙吸干臟器表面的血液后進(jìn)行稱重記錄，然后計(jì)算各臟器指數(shù)：臟器指數(shù)=器官重量÷體重×100%。

1.3.4 肝中相關(guān)基因的實(shí)時(shí)熒光定量PCR

1.3.4.1 肝總RNA提取與cDNA的合成：貉肝樣品中的RNA提取使用TransZolUP方法，試劑盒由北京全式金生物技術(shù)有限公司提供。使用北京全式金生物技術(shù)有限公司反轉(zhuǎn)錄試劑盒按照試劑盒說明，進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，反應(yīng)體系為20 μL。

1.3.4.2 引物設(shè)計(jì)與合成：內(nèi)參基因參照劉志藍(lán)狐試驗(yàn)中的引物設(shè)計(jì)及參考犬類的mRNA序列，利用Primer premier 5.0和Oligo 6.0軟件設(shè)計(jì)相關(guān)基因特異性引物(表2)。

表2 引物序列

1.3.4.3 PCR擴(kuò)增及檢測(cè)：用合成的引物對(duì)貉肝CER、CHR、IGF-1與Cu-ZnSOD基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增體系為50 μL：2×Es TapMasterMix(Dye)25 μL，上、下游引物(10 μmol·L-1)各2 μL，模板 DNA 0.5 μL，ddH2O補(bǔ)至50 μL。擴(kuò)增反應(yīng)條件：94 ℃ 2 min；94 ℃ 30 s，52 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，30個(gè)循環(huán)；72 ℃ 2 min。PCR產(chǎn)物測(cè)定采用1.5%瓊脂糖凝膠電泳。5 μL樣品與上樣緩沖液混合后點(diǎn)樣，同時(shí)點(diǎn)Marker DL1000 5 μL；電壓110 V電泳30 min 后，紫外燈下觀察，凝膠成像系統(tǒng)(Bio-Rad公司產(chǎn)品)采集圖像。

1.3.4.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR：以各組貉肝的cDNA 為模板，使用SYBR GreenⅠ嵌合熒光進(jìn)行PCR，試劑盒采購(gòu)自北京全式金生物技術(shù)有限公司。qPCR擴(kuò)增反應(yīng)體系(20 μL)：模板 1 μL，上、下游引物各0.5 μL，2×Transstart Tip Green qPCR SuperMix 10 μL，Passive Reference Dye 0.5 μL，ddH2O補(bǔ)至20 μL。qPCR擴(kuò)增反應(yīng)條件：94 ℃ 30 s；94 ℃ 5 s，52 ℃ 15 s，72 ℃ 10 s，40個(gè)循環(huán)。使用2-ΔΔCt法對(duì)目的基因的相對(duì)表達(dá)量進(jìn)行計(jì)算。

1.4 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)通過SAS 9.4中單因素方差分析(one-way ANOVA)Duncan’s法進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)。P<0.05為差異顯著。

2 結(jié) 果

2.1 飼糧銅水平對(duì)冬毛期烏蘇里貉毛皮品質(zhì)的影響

銅水平對(duì)冬毛期烏蘇里貉毛皮品質(zhì)影響見表3。Ⅲ與Ⅴ組體長(zhǎng)顯著高于對(duì)照組(P=0.05)。Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ與Ⅵ組鮮皮長(zhǎng)顯著高于對(duì)照組(P=0.04)。Ⅲ組針毛長(zhǎng)顯著高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ與Ⅵ組，Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ與Ⅵ組針毛長(zhǎng)顯著高于對(duì)照組(P<0.01)。Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組針毛細(xì)度顯著高于對(duì)照組與Ⅰ、Ⅴ、Ⅵ組，Ⅴ、Ⅵ組針毛細(xì)度顯著高于對(duì)照組(P<0.01)。鮮皮重、絨毛長(zhǎng)與絨毛細(xì)各指標(biāo)組間差異不顯著(P>0.05)。

表3 飼糧銅水平對(duì)冬毛期期烏蘇里貉毛皮品質(zhì)的影響

2.2 飼糧銅水平對(duì)冬毛期烏蘇里貉器官指數(shù)的影響

如表4所示，飼糧銅水平對(duì)冬毛期烏蘇里貉肝臟指數(shù)、心臟指數(shù)、脾臟指數(shù)與腎臟指數(shù)差異不顯著(P>0.05)。Ⅲ組的肝臟指數(shù)最大，Ⅵ組的肝臟指數(shù)最小。

表4 飼糧銅水平對(duì)冬毛期烏蘇里貉器官指數(shù)的影響

2.3 飼糧銅水平對(duì)冬毛期烏蘇里貉血清生化指標(biāo)的影響

由表5已知，Ⅵ組血清GLU濃度顯著高于其余各組，Ⅴ組血清GLU濃度顯著高于對(duì)照組與Ⅰ、Ⅱ組，Ⅲ組血清GLU濃度顯著高于對(duì)照組與I組(P<0.01)。血清ALP酶活各組間差異不顯著(P>0.05)。Ⅵ組血清LDH酶活顯著高于Ⅴ組，Ⅴ組血清LDH酶活顯著高于對(duì)照組與Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組(P<0.01)。Ⅵ組血清ALT、AST酶活顯著高于Ⅴ組，Ⅴ組血清ALT、AST酶活顯著高于對(duì)照組與Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組(P<0.01)。Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ與Ⅵ組血清CER酶活顯著高于Ⅱ組，Ⅱ組血清CER酶活顯著高于Ⅰ組，Ⅰ組CER酶活顯著高于對(duì)照組(P<0.01)。Ⅴ與Ⅵ組血清T-SOD酶活顯著高于Ⅰ組，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組血清T-SOD酶活顯著高于對(duì)照組(P<0.01)。Ⅴ與Ⅵ組血清Cu-Zn SOD酶活顯著高于對(duì)照組與Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組，Ⅲ、Ⅳ組血清Cu-Zn SOD酶活顯著高于對(duì)照組與Ⅰ組(P<0.01)。

表5 飼糧銅水平對(duì)冬毛期烏蘇里貉血清生化指標(biāo)的影響

2.4 飼糧銅水平對(duì)冬毛期烏蘇里貉肝相關(guān)基因表達(dá)的影響

用貉肝RNA反轉(zhuǎn)錄所得的cDNA為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，條帶清晰，擴(kuò)增結(jié)果長(zhǎng)度符合引物設(shè)計(jì)預(yù)期大小(圖1)。日糧不同銅添加水平對(duì)貉肝CER、GHR、IGF-1與Cu-ZnSOD基因相對(duì)表達(dá)量的影響如圖2所示，Ⅴ與Ⅵ組的肝CER基因表達(dá)水平顯著高于Ⅰ組，Ⅰ組肝CER基因表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。Ⅴ組的肝GHR基因表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。Ⅴ組的肝IGF-1基因表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。Ⅴ與Ⅵ組的肝Cu-ZnSOD基因表達(dá)水平顯著高于Ⅰ組，Ⅰ組肝Cu-ZnSOD基因表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。

圖1 目的基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖

不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)

3 討 論

3.1 飼糧銅水平對(duì)冬毛期烏蘇里貉毛皮品質(zhì)的影響

毛皮品質(zhì)是評(píng)價(jià)烏蘇里貉經(jīng)濟(jì)效益的重要標(biāo)準(zhǔn)，而飼糧營(yíng)養(yǎng)水平是其重要影響因素。其中，毛皮面積和被毛保溫性能是衡量毛皮品質(zhì)的重要標(biāo)準(zhǔn)。鮮皮長(zhǎng)和體長(zhǎng)的提升有助于獲得最大的毛皮面積[12]，這可能與銅對(duì)貉有促生長(zhǎng)作用密切相關(guān)[13]。毛皮重量和其延展性息息相關(guān)，當(dāng)毛皮重量過輕時(shí)，延展性降低，本次試驗(yàn)中毛皮重量沒有顯著變化，可以推斷，銅可以提升毛皮的面積，但不會(huì)影響毛皮的延展性。李道林[14]在兔的研究中發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加銅會(huì)對(duì)生長(zhǎng)性能及毛皮品質(zhì)有著顯著提升。Yang等[15]和程忠剛等[16]在豬的研究中發(fā)現(xiàn)，銅具有促進(jìn)豬生長(zhǎng)的作用，并且可以提升血清中IGF-1的含量。保溫性能主要由被毛厚度相關(guān)，針絨毛的長(zhǎng)度是決定被毛厚度的重要指標(biāo)之一。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加銅會(huì)提升被毛中針毛的長(zhǎng)度，隨著針毛長(zhǎng)度的增加，針毛細(xì)度也隨之增加[17-18]，并進(jìn)一步提升了髓質(zhì)腔容納空氣的能力。髓質(zhì)腔內(nèi)靜止空氣的量越多，被毛保溫性能越好[19-20]。綜上，飼糧添加適量銅可以增加體長(zhǎng)和鮮皮長(zhǎng)，從而提升貉的毛皮面積，提高針毛長(zhǎng)度和細(xì)度，增加被毛厚度，使被毛保溫性能得到提升。在本試驗(yàn)條件下，當(dāng)飼糧銅添加水平為45～75 mg·kg-1時(shí)，可以得到最佳的毛皮品質(zhì)。

3.2 飼糧銅水平對(duì)冬毛期烏蘇里貉器官指數(shù)的影響

臟器指數(shù)可以反映器官生長(zhǎng)發(fā)育情況，以及機(jī)體的器官功能的強(qiáng)弱，也可表明機(jī)體的健康情況。銅廣泛分布于各個(gè)器官，其中肝是銅代謝的主要器官，當(dāng)銅積蓄過量時(shí)，肝會(huì)嚴(yán)重受損[21]。Kumar等[22]通過對(duì)大鼠飼喂高劑量銅的日糧發(fā)現(xiàn)，大鼠腎、腦以及肝都嚴(yán)重受損。此外有研究表明，銅缺乏會(huì)引起心外觀肥厚，從而導(dǎo)致心肌病[23-24]，此外，銅缺乏還會(huì)導(dǎo)致脾萎縮[25]。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，貉對(duì)銅有較好的耐受量，當(dāng)飼糧中銅添加水平為200 mg·kg-1時(shí)，臟器指數(shù)沒有顯著變化，對(duì)肝、腎、心和脾的功能沒有影響。未添加組的心臟指數(shù)沒有顯著變化，說明飼糧中銅可以滿足日常需要，不會(huì)產(chǎn)生心肌肥大、心肌病等。在小鼠與水貂等研究中也同樣發(fā)現(xiàn)，動(dòng)物機(jī)體對(duì)銅代謝調(diào)控能力較強(qiáng)，適當(dāng)劑量的銅對(duì)臟器指數(shù)沒有影響[26-27]。但李秀霞等[28]在小鼠中的研究中發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加銅可以促進(jìn)脾發(fā)育，具有延緩胸腺退化的功效。王寶維等[29]在鵝的研究中也發(fā)現(xiàn)相似結(jié)論。因此，在實(shí)踐生產(chǎn)中，雖然，日糧中銅含量不會(huì)造成銅缺乏的現(xiàn)象，但是在不影響腎、肝和心代謝的情況下，可以適當(dāng)提高飼糧中銅含量，有助于脾發(fā)育，延緩胸腺退化和提升機(jī)體免疫力。

3.3 飼糧銅水平對(duì)冬毛期烏蘇里貉血清生化指標(biāo)的影響

機(jī)體的能量主要由GLU提供，為維持體內(nèi)各組織器官的能量需要，GLU必需要保持動(dòng)態(tài)平衡。本試驗(yàn)中貉血清中GLU濃度隨著銅含量的升高而升高，這可能是由于Cu/Zn過高，抑制鋅離子吸收，導(dǎo)致繼發(fā)性缺鋅[30-31]，而胰島素分子中含有兩個(gè)金屬鋅原子，缺鋅會(huì)導(dǎo)致胰島素失性，從而影響血糖代謝。ALP活力與骨骼發(fā)育和鈣化密切相關(guān)，在生長(zhǎng)階段，ALP的酶活顯著升高[32]，在冬毛期貉已經(jīng)生理性成熟，骨骼停止發(fā)育，所以ALP的含量趨于穩(wěn)定。LDH廣泛分布于肝、心、脾、腎等細(xì)胞胞質(zhì)中，是糖酵解通路的主要酶，常被用來檢測(cè)心肌梗死、肝炎、肝硬化等疾病[27]。血清AST和ALT是肝功能檢測(cè)的硬性指標(biāo)，當(dāng)機(jī)體肝硬化、肝中毒時(shí)，ALT與AST的血清酶活成倍上升[33]。在鵝研究中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)鵝飼糧銅含量超過400 mg·kg-1時(shí)，血清中LDH、AST與ALT的酶活明顯上升，死亡率達(dá)到30%[34]。在小鼠的慢性銅中毒試驗(yàn)中也同樣發(fā)現(xiàn)，血清中AST與LDH的酶活顯著上升[35]。當(dāng)飼糧中銅水平為90與200 mg·kg-1時(shí)，血清中LDH、AST與ALT的酶活呈倍數(shù)升高，證明高銅飼喂增加了肝代謝負(fù)擔(dān)，造成肝細(xì)胞破損，使細(xì)胞中LDH等酶釋放到了血清中。

Cu-Zn SOD與CER的活性中心由銅離子構(gòu)成，對(duì)于清除機(jī)體自由基，抗氧化有著重要作用，CER能催化血液中的Fe3+還原成Fe2+,還可以間接減少O2-生成[36]。Cu-Zn SOD是機(jī)體重要的抗氧化酶,主要有清除O2-、保護(hù)組織細(xì)胞的作用[37-38]。本研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中銅含量為60 mg·kg-1時(shí)，血清中CER、T-SOD與Cu-Zn SOD的酶活趨于穩(wěn)定，隨著銅水平的提升，其活力不會(huì)再有顯著變化。有研究表明，在雛雞飼糧中提高銅的含量，血清中Cu-Zn SOD與CER酶活上升[33]。劉強(qiáng)[32]也曾報(bào)道，在豬飼糧中提升銅的含量，血清中Cu-Zn SOD酶活也會(huì)隨之升高。銅被小腸吸收，通過相關(guān)蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)到肝中，引起肝中銅濃度升高，而肝是合成CER與Cu-Zn SOD的主要場(chǎng)所，間接增強(qiáng)了肝合成CER與Cu-Zn SOD的能力。T-SOD的酶活與Cu-Zn SOD酶活成正比，由于機(jī)體的Cu-Zn SOD酶活隨著銅水平的升高，所以T-SOD的酶活也隨之升高。因此，在飼糧中添加適量銅會(huì)提高抗氧化酶的酶活，增強(qiáng)機(jī)體清除自由基的能力。

3.4 飼糧添加銅水平對(duì)冬毛期烏蘇里貉肝相關(guān)基因表達(dá)的影響

動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育主要通過生長(zhǎng)激素軸的調(diào)控，其中GH至IGF-I途徑是其中心環(huán)節(jié)，而GH只有與靶細(xì)胞上的GHR結(jié)合，通過細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制，使靶細(xì)胞分泌IGF-I，繼而通過血液運(yùn)輸?shù)浇M織器官，調(diào)控機(jī)體生長(zhǎng)。肝是GHR基因表達(dá)量最高的器官，也是IGF-I分泌的主要場(chǎng)所。在生長(zhǎng)階段GH、GHR和IGF-1等基因的表達(dá)水平明顯增高，血清中GH與IGF-I的含量顯著高于其余生長(zhǎng)時(shí)期[39]。Pierzchaa等[40-41]對(duì)仔豬的研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中提高銅的水平可以提高肝GHR與IGF-1基因的mRNA表達(dá)，進(jìn)而提升血清中生長(zhǎng)激素的水平。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，飼糧中添加銅使肝中GHR和IGF-1基因的mRNA表達(dá)含量顯著高于未添加組。進(jìn)一步證實(shí)，銅具有促進(jìn)貉機(jī)體生長(zhǎng)的作用。但是高銅飼糧使肝內(nèi)GHR和IGF-1基因表達(dá)降低，與高銅可以抑制動(dòng)物生長(zhǎng)的結(jié)論相符[42]，這可能是由于銅與二價(jià)離子發(fā)生拮抗作用，使其繼發(fā)性缺乏導(dǎo)致。血清中含銅酶的活力與飼糧中銅添加量密切相關(guān)，本試驗(yàn)結(jié)果表明，血清中CER與Cu-Zn SOD酶活隨著銅水平的升高而呈現(xiàn)先升高，然后趨于穩(wěn)定，CER與Cu-Zn SOD的主要產(chǎn)生場(chǎng)所是肝，通過對(duì)肝內(nèi)的CER與Cu-ZnSOD基因的mRNA表達(dá)的檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)CER與Cu-ZnSOD基因的表達(dá)也呈現(xiàn)相似規(guī)律，進(jìn)一步表明，飼糧中添加銅確實(shí)可以促進(jìn)貉肝內(nèi)CER與Cu-Zn SOD的合成。

4 結(jié) 論

本研究中，隨著飼糧銅水平的升高，肝內(nèi)GHR與IGF-1基因表達(dá)水平呈現(xiàn)先升高在降低的趨勢(shì)，與貉的體長(zhǎng)和鮮皮長(zhǎng)的變化趨勢(shì)相似，而在飼糧銅添加水平為45～75 mg·kg-1時(shí)，貉可獲得最佳毛皮品質(zhì)。而CER與Cu-ZnSOD基因的表達(dá)水平呈現(xiàn)先升高然后趨于穩(wěn)定的趨勢(shì)，當(dāng)飼糧在60～75 mg·kg-1時(shí)，血清CER與Cu-Zn SOD活力達(dá)到平穩(wěn)，此后，隨飼糧銅水平的升高，兩種酶的活力不會(huì)有顯著變化。當(dāng)飼糧銅添加水平為90～200 mg·kg-1時(shí)，血清中ALT、AST與LDH的活力急劇升高，表明飼糧中銅已經(jīng)損傷貉肝等器官細(xì)胞，使細(xì)胞中的ALT、AST與LDH釋放到血液中。綜上所述，為提升貉的毛皮品質(zhì)，抗氧化能力以及降低銅對(duì)貉機(jī)體的危害，建議貉飼糧中銅添加水平為60～75 mg·kg-1。