郭丹丹，徐 靜，郝永彪，李 雋，陳愛芳

(北京王府中西醫(yī)結合醫(yī)院藥劑科，北京 102209)

青黛是爵床科植物馬藍、蓼科植物蓼藍或十字花科植物菘藍的葉或莖葉加工品，具有清熱解毒、涼血消斑和瀉火定驚之功效，是臨床較常用的中藥[1]。研究結果表明，靛藍、靛玉紅等吲哚類成分被認為是青黛的主要活性成分，具有保肝、消炎和抗腫瘤等多種藥理作用[2-6]。青黛的炮制加工主要在原產(chǎn)地進行。在炮制加工的過程中，原植物莖葉中的物質(zhì)會進行轉化，變?yōu)榈逅{與靛玉紅。現(xiàn)行青黛的炮制加工多采用水飛法，該方法成本較低、便于操作，而且可以除去青黛中含有的石灰、重金屬等雜質(zhì)，能夠提高青黛的質(zhì)量[7]。

隨著科學的進步和近年來中醫(yī)藥事業(yè)的發(fā)展，目前中藥材不局限于傳統(tǒng)的中藥飲片，還出現(xiàn)了小包裝、單味藥配方顆粒等多種形式的中藥。不同形式的中藥因其特有的優(yōu)勢在中藥市場上占據(jù)著不同的地位。其中，配方顆粒近年來發(fā)展較快，其是單味中藥飲片經(jīng)過水提、分離、濃縮、干燥和制粒而成，因服用方便、便攜和保存期長，在臨床上受到了更多患者的接受。2021年2月10日，中藥配方顆粒結束試點工作，質(zhì)量監(jiān)管正式納入中藥飲片范疇[5，8-11]。

青黛宜入丸劑、散劑，外用適量，但臨床上常采用布包后入煎劑的方法?！吨腥A人民共和國藥典：一部》(2020年版)規(guī)定，中藥青黛按干燥品計算，含靛玉紅(C16H10N2O2)不得少于0.13%，含靛藍(C16H10N2O2)不得少于2.0%[1]。但對于包煎后的青黛煎液和青黛顆粒中有效成分的含量并未作出更加明確的說明。因此，為明確中藥青黛的臨床合理服用方法，本研究收集了3種不同形式的中藥青黛，分別為青黛飲片、布包后的煎煮液(包煎液)和配方顆粒劑，采用液相法，在相同色譜條件下對不同形式的中藥青黛同時測定其有效成分靛藍、靛玉紅的含量。通過實驗結果對比，可進一步明確不同形式中藥對有效成分含量的影響，可為提高中藥青黛臨床服用方法的合理性提供參考。

1 材料

1.1 儀器

JA1003B型電子天平(上海越平科學儀器有限公司)；YJD20D-L型煎藥機(北京東華原醫(yī)療設備有限責任公司)；LC-20AT型液相色譜儀(日本島津公司)。

1.2 藥品與試劑

青黛飲片(北京本草方源藥業(yè)有限公司，批號為20161125)；青黛顆粒1(廣東一方制藥有限公司，批號為10050513)；青黛顆粒2(北京康仁堂藥業(yè)有限公司，批號為19044811)；青黛包煎液(青黛飲片由北京王府中西醫(yī)結合醫(yī)院(以下簡稱“我院”)代煎，批號為20191125)；靛藍(中國食品藥品檢定研究院，批號為110716-201612)；靛玉紅(中國食品藥品檢定研究院，批號為110717-201805)；三氯甲烷(北京化學試劑公司，分析純)；無水硫酸鈉(北京化學試劑公司，分析純)；水合氯醛(北京化學試劑公司，分析純)；N，N-二甲基甲酰胺(北京化學試劑公司，分析純)；甲醇(美國Fisher公司，色譜純)。

2 方法

2.1 色譜條件

參考相關文獻[12-17]，對靛藍和靛玉紅進行色譜分析。色譜柱為Waters XBridge C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)。進樣量為10 μl；以甲醇-水(V∶V=70∶30)為流動相進行洗脫，流速為1.0 ml/min；柱溫為35 ℃；PDA檢測器檢測波長為606 nm(靛藍)、292 nm(靛玉紅)，對應分析時間為15、30 min，各測試樣品平行測定2次，最終結果取平均值。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備：(1)精密稱取靛藍標準品2.5 mg，置于250 ml容量瓶中，加2%水合氯醛的三氯甲烷溶液(取干燥24 h后的水合氯醛2.0 g，加三氯甲烷至100 ml，靜置至出現(xiàn)渾濁，以無水硫酸鈉脫水，濾過，即得)溶解，超聲處理(功率250 W，頻率33 kHz)1.5 h，冷卻至室溫(25 ℃)，定容，搖勻，即得每1 ml中含靛藍10 μg的靛藍對照品溶液。(2)精密稱取靛玉紅對照品2.5 mg，置于50 ml容量瓶中，加N，N-二甲基甲酰胺適量，超聲處理(功率250 W，頻率33 kHz)使溶解，冷卻至室溫，定容，搖勻。精密量取上述溶液10 ml，置于100 ml容量瓶中，加N，N-二甲基甲酰胺至刻度，搖勻，即得每1 ml中含靛玉紅5 μg的靛玉紅對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備：(1)青黛包煎液。采用臨床常用的服用方法和相應劑量獲得，即用青黛飲片10 g煎煮30 min，煎煮液過濾，最后濃縮成100 ml即得，稱重109 g。(2)靛藍供試品溶液。取樣品(A-1為青黛飲片；B-1為青黛顆粒1；C-1為青黛顆粒2)40 mg，精密稱定細粉置于200 ml容量瓶中，加2%水合氯醛的三氯甲烷溶液180 ml超聲(功率11 W，頻率100 kHz)30 min使其溶解溶解，冷卻至室溫，定容，搖勻，用0.45 μm尼龍濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得。包煎液粉末標記為D-1樣本，稱取包煎液粉末185 mg(青黛包煎液冷凍干燥得)于200 ml容量瓶中，加2%水合氯醛的三氯甲烷溶液180 ml超聲(功率11 W，頻率100 kHz)溶解30 min，放至室溫，用2%水合氯醛的三氯甲烷溶液定容至刻度，混勻，過0.45 μm尼龍濾膜過濾，取續(xù)濾液，上機備用。(3)靛玉紅供試品溶液。取樣品(A-2為青黛粉末；B-2為青黛顆粒1；C-2為青黛顆粒2)50 mg精密稱定，細粉置于25 ml容量瓶中，加N,N-二甲基甲酰胺20 ml超聲(功率11 W，頻率100 kHz)30 min使其溶解，定容，搖勻，用0.45 μm尼龍濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得。包煎液粉末標記為D-2樣本，稱取包煎液粉末185 mg(青黛包煎液冷凍干燥得)于25 ml容量瓶中，加N,N-二甲基甲酰胺20 ml超聲(功率11 W，頻率100 kHz)溶解30 min，放至室溫，用N,N-二甲基甲酰定容至刻度，混勻，過0.45 μm尼龍濾膜，上機備用。

2.3 線性關系考察

分別精密吸取靛藍和靛玉紅的對照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、5.0和7.0 ml，分別置于10 ml容量瓶中，用50%甲醇定容至刻度。分別精密吸取上述各濃度的對照品溶液10 μl進樣，按“2.1”項下所述色譜條件測定，記錄峰面積。以進樣量(X)為橫坐標，色譜峰峰面積(Y)為縱坐標，繪制標準曲線。

2.4 青黛含量測定

取青黛飲片、青黛包煎液和青黛顆粒，按照“2.2.2”項下方法配制所需溶液，并照“2.1”中所述條件進行測定，并計算各樣品中靛藍、靛玉紅的含量。

3 結果

3.1 線性關系考察結果

通過線性關系考察，得到靛藍標準品的回歸方程Y=27.739X-2.015(r=0.999 8)，靛玉紅標準品的回歸方程為Y=15.508X-0.058 4(r=0.999 7)。表明靛藍在18.66～261.24 μg范圍內(nèi)，靛玉紅在1.04～14.57 μg范圍內(nèi)，與峰面積呈良好的線性關系。標準品的液相圖見圖1—2。

圖1 標準品液相色譜圖(靛藍)[606 nm，4 nm(1.00)]

3.2 靛藍和靛玉紅供試品的色譜結果分析

按照“2.1”項下色譜方法，將制作好的供試品A、B、C和D 4個樣品進行液相分析，每個樣品進行2次平行實驗，所得結果見表1—2，液相色譜圖見圖3—4。由表1可知，青黛飲片、配方顆粒中靛藍的含量均符合《中華人民共和國藥典：一部》(2020年版)標準。其中，青黛飲片樣品中靛藍的含量最高，為15.5%；包煎液中靛藍的含量低于下限值，未檢出。由表2可知，青黛飲片、配方顆粒中靛玉紅的含量均符合《中華人民共和國藥典：一部》(2020年版)標準。其中，青黛飲片中靛玉紅的含量較顆粒劑、包煎液高，為0.18%；包煎液中靛玉紅的含量低于下限值，未檢出。

表2 樣品中靛玉紅目標物檢測結果

A.飲片；B.顆粒劑1；C.包煎液；D.顆粒劑2

表1 樣品中靛藍目標物檢測結果

4 討論

4.1 布包存在不影響煎煮效果

包煎液中靛藍、靛玉紅的含量低于下限值，未檢出，考慮到可能是由于布包存在造成青黛沒有煎透的原因，為了驗證是否有此種因素干擾結果，采用“2.2.2”中相同的方法，煎煮完成后，撕開布包觀察，青黛粉末充分浸潤煎透，排除了因存在布包未煎透造成靛藍、靛玉紅未檢出的因素。

圖2 標準品液相色譜圖(靛玉紅)[292 nm，4 nm(1.00)]

4.2 中藥青黛在處方中使用時，不宜包煎入藥

結合本研究測定的靛藍和靛玉紅含量結果可知，中藥青黛幾乎不溶于水，與直接沖服飲片和配方顆粒劑相比，包煎入藥時有效成分煎出量極少，影響臨床療效。另外，臨床工作中發(fā)現(xiàn)，含有青黛的中藥處方在我院代煎時，如果采用包煎入藥，當煎煮不充分時，發(fā)生過代煎液酸敗脹袋現(xiàn)象，考慮可能是青黛加工過程中殘存的石灰在代煎過程中發(fā)生再熟化反應。因此，中藥青黛合理服用方法宜沖服或入丸劑、散劑，不宜包煎入藥。

4.3 青黛的配方顆粒劑在內(nèi)服處方中可直接沖服使用

結合本研究結果可知，中藥青黛的配方顆粒劑中靛藍、靛玉紅含量均符合《中華人民共和國藥典：一部》(2020年版)規(guī)定，臨床上在內(nèi)服處方中可參考青黛飲片服用方法，直接沖服使用。

A.飲片；B.顆粒劑1；C.包煎液；D.顆粒劑2

本研究對我院所使用的的中藥青黛進行抽查，通過實驗結果可使藥師更加了解中藥青黛飲片、青黛顆粒和青黛包煎液三者之間有效成分的差異，為今后合理指導患者用藥提供了參考；同時，進一步檢查了我院所用中藥青黛的質(zhì)量情況，以便更好地掌握我院所使用中藥飲片的質(zhì)量問題，以期更好地為患者提供服務。