王 賽白 明苗明三

(河南中醫(yī)藥大學(xué),鄭州 450046)

陰虛證即陰液不足,不能制陽(yáng)的證。 陰液不足,則機(jī)體失去濡養(yǎng),臨床表現(xiàn)為口咽干燥,形體消瘦；陰虛不能制陽(yáng),陽(yáng)亢而虛熱內(nèi)生,臨床則表現(xiàn)為潮熱盜汗,煩躁,兩顴潮紅；陰虛火旺,膀胱化源不足,則見小便短赤且黃,大腸失去濡潤(rùn),則見便干,陰虛火旺,則見舌紅少苔,脈細(xì)數(shù)[1]。 具體癥候涉及到腎陰虛、肺陰虛、脾陰虛、胃陰虛、肝陰虛、心陰虛,涉及陰虛證的西醫(yī)疾病有糖尿病、高血壓、冠心病、中風(fēng)、乙型肝炎、圍絕經(jīng)期綜合征、肺癌、骨質(zhì)疏松等[2]。 現(xiàn)有的陰虛證造模方法既有涉及到西醫(yī)學(xué)的給大白鼠采取口服或注射西藥、手術(shù)和感染的方法,也有中醫(yī)從證的病因、病機(jī)和證候特點(diǎn)出發(fā),采取如破氣溫燥中藥等中醫(yī)病因理論來(lái)造模[3],造模方法較多但評(píng)價(jià)指標(biāo)卻不盡相同,本文通過(guò)總結(jié)所有公開報(bào)道的陰虛證動(dòng)物模型的一般觀察狀態(tài)、檢測(cè)指標(biāo)、藥物反證進(jìn)行總結(jié),為評(píng)價(jià)陰虛證動(dòng)物模型提供參考,為建立更統(tǒng)一的評(píng)價(jià)體系提供思路。

1 腎陰虛

1.1 造模方法

梁汝圣等[4]通過(guò)用甲狀腺素片150 mg/kg 配制成10 mg/mL 懸混液灌胃成功制備腎陰虛大鼠,也可以用甲狀腺素加利血平[5]這兩種方法都是通過(guò)提高基礎(chǔ)代謝率,從而引發(fā)類似腎陰虛的癥狀屬于病理模型。 戴冰等[6]通過(guò)灌胃氫化可的松,段曉紅等[7]通過(guò)腹腔注射氫化可的松均可成功復(fù)制腎陰虛動(dòng)物模型。

1.2 一般狀態(tài)觀察

體重下降,體溫上升,毛發(fā)枯槁、無(wú)光澤、易脫落,多飲,多食,多尿且黃,大便干結(jié)色黑,易怒躁動(dòng),拱背,不易抓取。

1.3 檢測(cè)指標(biāo)

現(xiàn)代研究表明腎陰虛與下丘腦-垂體-靶腺軸(腎上腺、甲狀腺) 的功能亢進(jìn)有關(guān),患者表現(xiàn)為下丘腦CRH、ACTH、TSH 增加, 促進(jìn)腎上腺皮質(zhì)釋放糖皮質(zhì)激素和甲狀腺合成甲狀腺激素,血中糖皮質(zhì)激素和甲狀腺激素含量增加[14],又因?yàn)镃RH 及糖皮質(zhì)激素的大量釋放在下丘腦、垂體、性腺多水平對(duì)性腺軸產(chǎn)生抑制作用,從而導(dǎo)致生殖內(nèi)分泌的紊亂,性激素等相關(guān)指標(biāo)也發(fā)生改變[15]；環(huán)磷酸腺苷、環(huán)磷酸鳥苷的雙向調(diào)節(jié)作用作為陰陽(yáng)學(xué)說(shuō)的基礎(chǔ),陰虛病人也會(huì)表現(xiàn)出環(huán)磷酸腺苷水平顯著升高的現(xiàn)象[16]。 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)檢測(cè)指標(biāo)見表1。

1.4 藥物反證

六味地黃是滋陰補(bǔ)腎之首方,用于治療腎陰虧損,用該藥可使血清中cAMP、ACTH、Cor.含量降低,cGMP、T 含量升高[17]。

2 肺陰虛

2.1 造模方法

肺陰虛造模主要以煙熏+灌服甲狀腺素或者灌服甲狀腺+利血平+SO2熏蒸[18]等復(fù)合方法,其原理是先利用甲狀腺素造成陰虛,再以煙熏的方式造成咳嗽,久咳不愈則傷及肺陰。

2.2 一般狀態(tài)觀察

體重減輕、皮毛(光澤差、毛發(fā)凌亂脫落)、行動(dòng)(煩躁易怒)、呼吸(咳嗽、少痰、哮鳴音、鼻部干燥)、肛溫顯著升高、面溫顯著升高、抓力顯著降低[19]。

2.3 檢測(cè)指標(biāo)

肺陰不足,虛熱內(nèi)生,虛熱上炎而潮熱顴紅,會(huì)出現(xiàn)顴紅耳赤等癥狀,故動(dòng)物面溫、肛溫升高。 肺熱為肺陰虛的基礎(chǔ),而熱則為炎癥反應(yīng)的表現(xiàn)[20],故炎癥因子TNF-α、IL-1 含量顯著升高。 陰虛證表現(xiàn)為交感神經(jīng)-β 受體-c AMP 系統(tǒng)功能亢奮,患者血漿中cAMP 含量增多, 甲狀腺激素分泌增加,則甲狀腺激素T3、T4 表達(dá)水平升高。 cAMP 能激活細(xì)胞內(nèi)的蛋白激酶,使細(xì)胞內(nèi)多種蛋白磷酸化,增強(qiáng)脂肪分解,使TC、TG 水平升高[20-23](見表2)。

2.4 藥物反證

肺陰虛證是津液消耗,肺失濡養(yǎng)而出現(xiàn)的陰津不足,以致肺失清潤(rùn),宣肅失職,虛熱內(nèi)生等臨床表現(xiàn)的統(tǒng)稱。 南沙參、玉竹、麥冬(同屬甘涼歸肺經(jīng))通過(guò)甘涼入肺從而改善物質(zhì)代謝異常,其作用機(jī)制可能是通過(guò)下調(diào)肺陰虛模型動(dòng)物體內(nèi)過(guò)高的甲狀腺激素、環(huán)核苷酸的水平,從而調(diào)節(jié)肺陰證引起的體內(nèi)紊亂,改善肺陰虛證的整體證侯表現(xiàn)[23]。

表1 腎陰虛檢測(cè)指標(biāo)Table 1 Detection of kidney yin deficiency

3 脾陰虛

3.1 造模方法

脾陰虛常采用復(fù)合因素造模法,前14 d 通過(guò)饑飽不勻,例如：間隔進(jìn)食或單日喂甘藍(lán),雙日喂豬油(大鼠每只3 mL),加上單日游泳至耐力極限使其疲勞過(guò)度造成脾氣虛,后16 d 在脾氣虛基礎(chǔ)上使用耗傷陰液藥,例如：附子、吳茱萸等,制成脾陰虛模型[24]。

3.2 一般狀態(tài)觀察

食量減少、體重減輕、便溏、神態(tài)萎靡、毛色干枯、蜷縮聚堆。

3.3 檢測(cè)指標(biāo)：

脾陰不足,脾主運(yùn)化功能失司,體內(nèi)的蛋白質(zhì)等精微物質(zhì)不能正常轉(zhuǎn)輸,大量的蛋白質(zhì)積于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)[27],則相關(guān)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白和蛋白激酶含量發(fā)生改變。 脾陰虛常與糖尿病、癡呆和消化系統(tǒng)疾病(胃炎、消化不良、厭食、便秘等),根據(jù)不同病癥,針對(duì)性檢測(cè)血糖、腦源性因子和MMC 含量(見表3)。

3.4 藥物反證

四君子湯為補(bǔ)益劑,具有補(bǔ)氣,益氣健脾之功效。 主治脾胃氣虛證,,脾虛動(dòng)物模型病理學(xué)觀察到脾、空腸、回腸粘膜破損、脫落,等現(xiàn)象,經(jīng)四君子顆粒治療后, 腸組織病理形態(tài)恢復(fù)正常,對(duì)脾虛證的蛋白質(zhì)代謝系統(tǒng)有復(fù)健作用[28],可使“脾虛證”模型復(fù)健,對(duì)其有反證效果。

4 胃陰虛

4.1 造模方法

選擇燥熱耗陰中藥草烏連續(xù)灌胃復(fù)制胃陰虛癥,每天用燥熱耗陰中藥草烏水煎濃縮煎劑灌胃1次, 連續(xù)至7 d[36]。

4.2 一般狀態(tài)觀察

躁動(dòng)不安、小便黃、饑不欲食、大便干燥。

4.3 檢測(cè)指標(biāo)

胃陰虛在臨床上常表現(xiàn)為胃炎相關(guān)疾病,胃部有炎癥反應(yīng),產(chǎn)生潰瘍,故炎癥相關(guān)因子水平升高,出現(xiàn)出血癥狀,紅細(xì)胞數(shù)量減少體積增大,又因?yàn)檠装Y細(xì)胞侵蝕胃黏膜則粘膜層變薄(見表4)。

表2 肺陰虛檢測(cè)指標(biāo)Table 2 Detection index of lung yin deficiency

表3 脾陰虛檢測(cè)指標(biāo)Table 3 Detection index of spleen yin deficiency

4.4 藥物反證

胃陰虛者,養(yǎng)陰生津降逆,宜清補(bǔ),如麥冬、沙參、杏仁、白芍、石斛、茯神、粳米、麻仁、白扁豆等。 已有研究證明沙參麥冬湯可改善患者血?dú)庵笜?biāo)(對(duì)照檢測(cè)指標(biāo)中的紅細(xì)胞計(jì)數(shù)與紅細(xì)胞體積)[36]。

5 肝陰虛

5.1 造模方法

在四氯化碳誘導(dǎo)大鼠慢性肝損傷的基礎(chǔ)上,結(jié)合溫?zé)嶂兴幑辔钢谱鞔笫蟾侮幪撟C動(dòng)物模型,也有研究結(jié)合長(zhǎng)期激怒法制造肝腎陰虛動(dòng)物模型[32],所造模型更接近臨床人為影響因素較少。

5.2 一般狀態(tài)觀察

形體消瘦、身熱、飲水增多、飲食減少、大便干硬、小便黃(反應(yīng)精液損傷情況)、毛發(fā)干枯、煩躁易怒、行動(dòng)遲緩、反應(yīng)遲鈍、舌紅少津。

5.3 檢測(cè)指標(biāo)：

肝陰虛患者腎素-血管緊張素系統(tǒng)功能增強(qiáng),故醛固酮含量升高[37],李莉等[36]研究結(jié)果表明肝陰虛患者存在TXB2 水平顯著增高,6-Keto-PGF1α水平顯著降低,在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中仍有體現(xiàn)(見表5)。

5.4 藥物反證

采用滋補(bǔ)肝腎中藥,能減輕肝組織的炎癥程度(IL-6、IL-10、TNF-α 水平降低)和纖維化程度,對(duì)于陰虛證相關(guān)的表征有一定的改善作用[44]。

表4 胃陰虛檢測(cè)指標(biāo)Table 4 Detection index of stomach yin deficiency

表5 肝陰虛檢測(cè)指標(biāo)Table 5 Detection index of liver yin deficiency

6 討論

動(dòng)物模型是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ),隨著中醫(yī)藥研究的發(fā)展,中醫(yī)癥候動(dòng)物模型的制備越來(lái)越受關(guān)注,如何判定造模成功與否也成為了大家思考的問題,通過(guò)查閱現(xiàn)有陰虛證動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)：陰虛證動(dòng)物模型的一般狀態(tài)主要包括體征和狀態(tài),這在模型評(píng)價(jià)中是很重要的一部分,動(dòng)物的表現(xiàn)往往與中醫(yī)臨床所對(duì)應(yīng),例如：動(dòng)物體重減輕相當(dāng)于患者形體消瘦,爪和尾的顏色(紅色程度)相當(dāng)于患者五心煩熱,飲水量與大小便情況反映出津液損傷等。 動(dòng)物的表觀指征與人的中醫(yī)癥的表現(xiàn)相對(duì)應(yīng),為判斷造模是否成功提供重要依據(jù)。 但也存在各臟腑的表現(xiàn)區(qū)別不大,特異性不明顯的缺點(diǎn),應(yīng)根據(jù)不同病癥部位再深入挖掘研究[49]。

在檢測(cè)指標(biāo)中,環(huán)核苷酸參與調(diào)節(jié)不同的生化代謝和生理功能,且在病理反應(yīng)過(guò)程中也起介導(dǎo)作用,對(duì)細(xì)胞功能處于穩(wěn)定狀態(tài)具有雙向控制調(diào)節(jié)作用[50],有研究證明陰虛時(shí)血漿cAMP 升高,cAMP/cGMP 比值無(wú)明顯變化,臨床上患者也出現(xiàn)這種現(xiàn)象[51],這一指標(biāo)常用來(lái)作為判定是否陰虛的依據(jù),但也有實(shí)驗(yàn)證明脾陰虛、肝陰虛時(shí)血漿cAMP 含量下降,故單用這一指標(biāo)證明脾陰虛、肝陰虛是否造模成功是存在爭(zhēng)議的,而腎陰虛和肺陰虛相關(guān)研究血漿cAMP 均為升高,除此之外,腎陰虛、肺陰虛模型血清T3、T4 也均為升高與兩種疾病都能引起甲狀腺功能亢奮相一致。 肺陰虛、脾陰虛、肝陰虛都檢測(cè)了炎癥因子的含量,結(jié)果均為升高,與臨床三種疾病都伴有炎癥反應(yīng)相一致。 檢測(cè)指標(biāo)應(yīng)根據(jù)不同的臟腑或其相聯(lián)系部位檢測(cè)相關(guān)指標(biāo)的變化從而反應(yīng)病理變化,例如臨床上腎陰虛與下丘腦-垂體-靶腺軸的功能亢進(jìn)有關(guān),反應(yīng)在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中也會(huì)出現(xiàn)甲狀腺、腎上腺指標(biāo)的改變；肺陰虛常伴隨炎癥反應(yīng),肺陰虛動(dòng)物模型中炎癥因子表達(dá)水平也會(huì)出現(xiàn)升高；中醫(yī)上脾主運(yùn)化,臨床上脾陰虛患者體內(nèi)的蛋白質(zhì)等物質(zhì)不能正常轉(zhuǎn)運(yùn),大量的蛋白質(zhì)積于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi),實(shí)驗(yàn)中脾陰虛動(dòng)物也會(huì)伴隨相關(guān)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白和蛋白激酶含量發(fā)生改變；胃陰虛患者在西醫(yī)臨床上常表現(xiàn)為胃炎、胃潰瘍等,在胃陰虛實(shí)驗(yàn)中,動(dòng)物胃部也會(huì)出現(xiàn)潰瘍和炎癥反應(yīng)與臨床相對(duì)應(yīng)；肝陰虛患者腎素-血管緊張素系統(tǒng)功能增強(qiáng),醛固酮增多,肝陰虛動(dòng)物模型也會(huì)出現(xiàn)這種癥狀。心陰虛的研究較少本文并沒有進(jìn)行總結(jié),日后有待加強(qiáng)相關(guān)研究。 本文針對(duì)每種虛證總結(jié)有效治療藥物,通過(guò)藥物反證,觀察表征是否得到改善,檢測(cè)指標(biāo)是否回歸正常,也可以在一定程度上判斷造模成功與否,為評(píng)價(jià)動(dòng)物模型提供新的思路。

由于造模后疾病會(huì)自然演化和環(huán)境因素的影響,可能出現(xiàn)兩種或者兩種以上證候交疊或前后出現(xiàn)的情況,導(dǎo)致癥候區(qū)分不明確,在指標(biāo)檢測(cè)中,不同臟腑的虛癥沒有明確的某一指標(biāo)作為依據(jù)來(lái)判斷造模成功,所以建立各個(gè)證型的動(dòng)物宏觀表現(xiàn)和客觀的理化指標(biāo)公認(rèn)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)是迫切之需[52]。