吉 琳申 琪郭向東

(1.河南中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院,鄭州 450000； 2.河南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院耳鼻喉科,鄭州 450000)

陽(yáng)氣的生長(zhǎng)、充盛至衰竭的過(guò)程貫穿著人體的整個(gè)生命歷程,陽(yáng)氣對(duì)維持人體各項(xiàng)生理機(jī)能發(fā)揮著不可或缺的重要作用。 陽(yáng)虛證是指人體陽(yáng)氣虧損,其溫養(yǎng)、推動(dòng)等功能減退,以畏寒肢冷為主要表現(xiàn)得虛寒證[1]。 為了更好的認(rèn)識(shí)和了解陽(yáng)虛本質(zhì),研究陽(yáng)虛的病理生理機(jī)制、診斷、治療等,復(fù)制穩(wěn)定并與臨床癥狀或機(jī)制相似的陽(yáng)虛動(dòng)物模型尤為重要。 隨著研究的不斷進(jìn)展,國(guó)內(nèi)外學(xué)者嘗試了多種有效的造模方法并制定了相應(yīng)的檢測(cè)指標(biāo)。 本文對(duì)當(dāng)前陽(yáng)虛動(dòng)物模型的多種造模方法及檢測(cè)指標(biāo)進(jìn)行歸納及綜述,從不同角度揭示陽(yáng)虛的發(fā)病機(jī)制,為今后尋求有效診斷方法,提高陽(yáng)虛及陽(yáng)虛相關(guān)疾病的診治率,發(fā)展有效的臨床治療方案提供思路。

1 陽(yáng)虛動(dòng)物模型的建立

目前,建立陽(yáng)虛實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的思路分別從模擬中醫(yī)病因、西醫(yī)病理、病證結(jié)合三個(gè)方面造模(見(jiàn)表1)。

1.1 模擬中醫(yī)病因

此類(lèi)模型按照中醫(yī)病因?qū)W說(shuō),使動(dòng)物在人為制造的特定致病環(huán)境中出現(xiàn)相應(yīng)的疾病,建立與臨床上某種證型表現(xiàn)相似的模型[2]。 模擬中醫(yī)病因建立陽(yáng)虛模型的方法目前包括勞倦過(guò)度,房事不節(jié)；驚恐傷腎；苦寒瀉下；寒濕困脾等。

模擬中醫(yī)病因建立的陽(yáng)虛動(dòng)物模型多以脾腎兩臟為主,并且多為復(fù)合因素建模。 李震等[3]將雄雌鼠同籠喂養(yǎng),雄鼠每天游泳至無(wú)力下沉?xí)r撈出,用4 周時(shí)間建立以“勞倦過(guò)度、房室不節(jié)”為病因的腎陽(yáng)虛動(dòng)物模型。 杜維祥等[4]通過(guò)貓嚇鼠的方式建立腎陽(yáng)虛模型,此法雖然遵循中醫(yī)“恐傷腎”理論,但不符合實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理,且一般實(shí)驗(yàn)室貓、鼠共同飼養(yǎng)也較難實(shí)現(xiàn),對(duì)實(shí)驗(yàn)資源有很大的浪費(fèi)。 對(duì)于這一局限性,有一項(xiàng)研究通過(guò)避水應(yīng)激建立陽(yáng)虛型腸易激綜合征(IBS)動(dòng)物模型,利用大鼠對(duì)水的天生恐懼感模擬“恐傷腎”病因,又可誘導(dǎo)IBS 內(nèi)臟高敏感[5]。 自然衰老也是造模的方法之一,但是此法雖然和人類(lèi)陽(yáng)虛發(fā)展過(guò)程最相似,但是造模時(shí)間至少1 年以上,成本大,可操作性不高[6]。 苦寒瀉下法多用于建立脾陽(yáng)虛,或苦寒瀉下和氫化可的松結(jié)合建立脾腎陽(yáng)虛模型,大黃或番瀉葉為常用藥物。 滕培潁等[7]就是通過(guò)此方法每天按照0.25 mL/100 g肌注氫化可的松注射液,同時(shí)以1 mL/100 g灌胃大黃水煎液,連續(xù)17 d 建立了脾腎陽(yáng)虛動(dòng)物模型。 寒易傷陽(yáng),濕為陰邪,阻遏氣機(jī),損傷陽(yáng)氣,根據(jù)這一理論,章敏等[8]的研究將大鼠放在溫度區(qū)間(6±2)℃,濕度區(qū)間(90±4)%的寒濕環(huán)境中,每天放置8 h,持續(xù)30 d,大鼠出現(xiàn)脾陽(yáng)虛癥狀。

1.2 模擬西醫(yī)病理

病理模型是運(yùn)用現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)技術(shù)在動(dòng)物身上造成特定病理過(guò)程以模擬人的病理過(guò)程的一種模型。模擬西醫(yī)病理建立陽(yáng)虛模型的方法包括糖皮質(zhì)激素如氫化可的松；抗甲狀腺素藥物如他巴唑、丙硫氧嘧啶；甲狀腺切除；肩胛骨間棕色脂肪組織(brown adipose tissue, BAT) 切除術(shù)；其他藥物如腺嘌呤,羥基脲等以及衰老。

首先,下丘腦-垂體-靶腺軸功能紊亂是腎陽(yáng)虛的病理機(jī)制之一,現(xiàn)代研究多通過(guò)干擾該軸的功能而建立腎陽(yáng)虛動(dòng)物模型。 氫化可的松是糖皮質(zhì)激素,可以使下丘腦-垂體-腎上腺功能減退,抑制促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)的釋放,鄺安堃等[9]在20世紀(jì)60 年代通過(guò)“氫化可的松”首次建立了腎陽(yáng)虛動(dòng)物模型,動(dòng)物出現(xiàn)畏寒肢冷,腰膝酸軟,精神不振,性功能低下,被毛疏松、失去光澤等“耗竭”現(xiàn)象,是最常用的腎陽(yáng)虛動(dòng)物模型。 但有報(bào)道表明,糖皮質(zhì)激素不同種類(lèi)、劑量、制劑、給藥方式所引起的造模結(jié)果是不同的,秦文艷等[10]的研究采用灌胃、腹腔注射及皮下注射的方式給予小鼠不同劑量(12.5、25、50 mg/kg 體重) 氫化可的松注射液9 d,結(jié)果表明灌胃給藥25 mg/kg 劑量組成模率較其他組高,且各項(xiàng)指標(biāo)均可呈現(xiàn)出腎陽(yáng)虛的癥狀和體征, 是比較可靠的腎陽(yáng)虛造模方法。 也有研究認(rèn)為所謂的“耗竭現(xiàn)象”有可能是外源性糖皮質(zhì)激素在體內(nèi)蓄積造成機(jī)體代謝紊亂的毒性作用,所以氫化可的松等糖皮質(zhì)激素具體的造模方法值得商榷。范景等[11]利用使性腺軸功能紊亂的方法制造腎陽(yáng)虛模型,對(duì)雄性小鼠按0.1 mL/10 g 腹腔注射苯甲酸雌二醇(E2)大豆油稀釋液,1 d1 次,連續(xù)15 d。裴妙榮等[12]和歐陽(yáng)軼強(qiáng)等[13]分別使用抗甲狀腺藥丙硫氧嘧啶和他巴唑制造甲狀腺功能降低的大鼠腎陽(yáng)虛模型。

通過(guò)手術(shù)方式也是建立陽(yáng)虛模型的方法之一,如甲狀腺切除術(shù)、BAT 切除術(shù)等。 徐敏等[14]通過(guò)手術(shù)切除甲狀腺的方法復(fù)制“甲低”病理模型,發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)大鼠存在與臨床相同的病理改變及常見(jiàn)的證候表現(xiàn),并且文章中首次報(bào)導(dǎo)陽(yáng)虛主癥畏寒喜暖的定量檢測(cè)裝置,認(rèn)為此檢測(cè)方法比現(xiàn)在已有的耐凍實(shí)驗(yàn)和冰水游泳實(shí)驗(yàn)更能鑒別陽(yáng)虛證型。 BAT 通過(guò)產(chǎn)熱維持體溫,而動(dòng)物切除肩胛間BAT 后產(chǎn)熱減少,利用這一原理韋祎等[15]通過(guò)BAT 切除術(shù)建立陽(yáng)虛動(dòng)物模型,結(jié)果顯示動(dòng)物模型效能產(chǎn)熱溫度峰值下降和產(chǎn)熱體溫曲線(xiàn)下面積減小,體重增長(zhǎng)率降低,有能量代謝衰減的表現(xiàn)。

此外,還有通過(guò)破壞腎組織、影響腎組織能量代謝,抑制DNA 合成以及誘導(dǎo)衰老達(dá)到造模目的的。 有研究表明高濃度的腺嘌呤代謝產(chǎn)物沉積于腎小管,會(huì)因機(jī)械性阻塞腎小管和毒性作用,抑制腎組織中與物質(zhì)代謝有關(guān)的酶活性,從而影響腎組織能量的代謝,造成腎功能衰竭[16]。 林海雄等[17]選用雄性SD 大鼠,皮下注射未提純腺嘌呤,大鼠出現(xiàn)疲倦,飲食量減少,體重減輕等癥狀,以此建立大鼠陽(yáng)虛模型。 邵命海等[18]比較腺嘌呤與氫化可的松兩種造模方法,結(jié)果表明模型組睪酮(T)水平偏低,E2 水平偏高,前列腺腺體萎縮與精囊萎縮狀態(tài)都更加明顯,在體征與性激素指標(biāo)方面更符合腎陽(yáng)虛表現(xiàn)。 且有研究表明,腺嘌呤模型較氫化可的松模型陽(yáng)虛癥狀持續(xù)時(shí)間更長(zhǎng),且有腎損傷,更符合理想的陽(yáng)虛動(dòng)物模型,腺嘌呤濃度的控制是成功構(gòu)建該模型的關(guān)鍵[19]。 羥基脲是核苷酸還原酶抑制劑,可以抑制DNA 合成,劉福春等[20]運(yùn)用不同劑量的羥基脲喂雄性小鼠,通過(guò)觀察出現(xiàn)“陽(yáng)虛”癥狀及死亡率,得出每只7.5 mg 的劑量最為合適。 肖凌等[21]建立D-半乳糖誘導(dǎo)衰老動(dòng)物模,結(jié)果表明其熱休克蛋白HSP70 表達(dá)下降,超氧化物歧化酶(SOD)活性下降,且與陽(yáng)虛證的表現(xiàn)相符。

1.3 病證結(jié)合

病證結(jié)合動(dòng)物模型以中醫(yī)理論為指導(dǎo),以西醫(yī)復(fù)制疾病模型為基礎(chǔ),與某些致病因素相結(jié)合,建立具備西醫(yī)疾病和中醫(yī)證候的動(dòng)物模型。 西醫(yī)疾病多采用陽(yáng)虛證型為主的疾病,如腎病,慢性心衰,哮喘,骨質(zhì)疏松(OP),便秘,腹瀉型腸易激綜合征(IBS-D)等。

中醫(yī)認(rèn)為脾腎陽(yáng)虛是微小病變腎病之本,而阿霉素(ADR)腎病模型是此病典型的動(dòng)物模型,魯艷芳等[22]仿照Bertani 等[23]方法,大鼠尾靜脈一次性注射ADR 5.5 mg/kg,結(jié)果表明模型組的病理改變與臨床微小病變腎病相似,癥狀及微觀指標(biāo)也與陽(yáng)虛表現(xiàn)相符。

ADR 不僅用于建立腎病模型,有研究表明ADR由于對(duì)心肌組織的親和力高故其心臟毒性高于其他組織[24],童妍等[25]采用大鼠腹腔注射ADR 4 mg/kg 的方法建立心陽(yáng)虛型慢性心力衰竭模型,每周1 次,共6 周,此模型符合心陽(yáng)虛的癥候群,可能與ADR 誘導(dǎo)氧化應(yīng)激有關(guān)。 除了通過(guò)藥物建立陽(yáng)虛型慢性心衰模型,還有通過(guò)手術(shù)結(jié)扎動(dòng)脈的方式,如侯衍豹等[26]利用冠脈結(jié)扎結(jié)合一氧化氮合酶抑制劑建模,楊喆等[27]利用腹主動(dòng)脈結(jié)扎結(jié)合寒冷刺激建模。

子病及母,肺腎為母子關(guān)系,故腎虛日久可累及于肺。 陳博武等[28]在已有哮喘大鼠腎陽(yáng)虛病證結(jié)合模型基礎(chǔ)上進(jìn)行了改進(jìn)[29],以1.5 mL/100 g灌胃地塞米松混懸液聯(lián)合2%卵蛋白霧化吸入建立哮喘腎陽(yáng)虛模型,并通過(guò)大鼠四診信息評(píng)價(jià)建模是否成功。

陳劍磨等[30]等選用雌性KM 小鼠,應(yīng)用去卵巢法構(gòu)建OP 模型,按25 mg/kg 的劑量皮下注射氫化可的松誘導(dǎo)腎陽(yáng)虛模型,該研究耗時(shí)8 周成功構(gòu)建OP 腎陽(yáng)虛病證結(jié)合模型,但該法只模擬了絕經(jīng)后女性人群,因而研究范圍比較局限。

腎主一身陰陽(yáng),開(kāi)竅于二陰,主司二便,腎中元陽(yáng)對(duì)脾的運(yùn)化及大腸的傳導(dǎo)功能起著推動(dòng)、溫煦作用,胃腸疾病與陽(yáng)虛關(guān)系密切,臨床研究也表明陽(yáng)虛患者易患消化系統(tǒng)疾病[31]。 岳奇等[32]利用中醫(yī)“味過(guò)于酸,脾氣乃絕”理論,在以往建立陽(yáng)虛便秘模型(食用白醋加活性炭冰水)文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上進(jìn)行了改進(jìn),即4℃食用白醋加活性炭冰水再加止瀉藥物復(fù)方地芬諾酯,比未改進(jìn)前病理變化更明顯。 韓博宇等[33]在建立脾腎陽(yáng)虛型IBS-D 動(dòng)物模型時(shí),比較了三種IBS-D 造模方法(母子分離、直腸擴(kuò)張、避水應(yīng)激[34])聯(lián)合番瀉葉灌胃以及番瀉葉灌胃劑量和觀察周期的不同對(duì)造模結(jié)果的影響,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,高劑量(10 g/(kg?d))組番瀉葉灌胃6 周聯(lián)合直腸擴(kuò)張組復(fù)制的病證結(jié)合模型最好,體現(xiàn)在體重、進(jìn)食、握力、負(fù)重游泳時(shí)間、肛溫；血清和尿液激素水平；代謝水平和糞便菌群的指標(biāo)。

2 生理生化指標(biāo)檢測(cè)

目前關(guān)于陽(yáng)虛的研究主要從內(nèi)分泌、免疫、血液流變學(xué)、能量代謝、自由基、微量元素等方面著手,為陽(yáng)虛的深入研究提供一定的參考依據(jù)。

表1 常用腎陽(yáng)虛動(dòng)物模型建立方法Table 1 Method of establishment of kidney-yang deficiency animal model

2.1 陽(yáng)虛與內(nèi)分泌

上文中已經(jīng)提到過(guò),鄺安堃通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究說(shuō)明陽(yáng)虛與內(nèi)分泌功能密切相關(guān)。 沈自尹[35]在此基礎(chǔ)上進(jìn)行了臨床驗(yàn)證,結(jié)果表明腎陽(yáng)虛患者24 h 尿17羥皮質(zhì)類(lèi)固醇含量普遍低于正常值,48 例腎陽(yáng)虛患者中有20 例丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)功能異常,而30 例正常人中僅1 例。 沈自尹[35]認(rèn)為腎陽(yáng)虛患者存在垂體-腎上腺、甲狀腺、性腺功能紊亂。 這一結(jié)論得到了很多研究者的驗(yàn)證。 戴冰等[36]的研究結(jié)果顯示,“氫化可的松”腎陽(yáng)虛模型小鼠與對(duì)照組相比,血清ACTH、血清皮質(zhì)醇(Cor.)、促甲狀腺激素、三碘甲腺原氨酸(T3)、甲狀腺素(T4)水平降低,血清促卵泡素(FSH)、E2、T 水平升高,并認(rèn)為Cor.的水平高低作為反映腎上腺皮質(zhì)功能的重要指標(biāo),可用于評(píng)價(jià)腎虛模型建立的成功與否, 尤其是對(duì)于采用糖皮質(zhì)激素法建立的腎虛模型。 楊宏杰等[37]和凌昌全等[38]的研究均認(rèn)為,陽(yáng)虛患者腎上腺皮質(zhì)功能低下是由于糖皮質(zhì)激素受體數(shù)量或活性的下降。劉旭光等[39]通過(guò)比較正常和“氫化可的松”陽(yáng)虛大鼠血中ACTH 與Cor.含量的晝夜變動(dòng)情況,發(fā)現(xiàn)正常大鼠血中ACTH、Cor.均有明顯晝夜節(jié)律變化,而陽(yáng)虛大鼠此晝夜節(jié)律變化消失,且振幅、中值減小。

以上研究以從現(xiàn)象到原因、從靜態(tài)到動(dòng)態(tài)的角度說(shuō)明了陽(yáng)虛患者內(nèi)分泌功能低下。

2.2 陽(yáng)虛與免疫系統(tǒng)

脾陽(yáng)虛時(shí)免疫功能低下可體現(xiàn)在免疫細(xì)胞因子的變化,韋祎等[15]在比較通過(guò)BAT 切除術(shù)及術(shù)后給予高脂飼料建立的脾陽(yáng)虛動(dòng)物模型組與對(duì)照組免疫功能的研究中,發(fā)現(xiàn)模型組胸腺指數(shù),脾指數(shù),白細(xì)胞介素-2(IL-2)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)均顯著降低,表明模型組大鼠免疫功能低下。

2.3 陽(yáng)虛與血液流變學(xué)

陽(yáng)虛證可由氣虛發(fā)展而來(lái),故有“氣虛者陽(yáng)虛之漸,陽(yáng)虛者氣虛之甚”的說(shuō)法。 氣能生血,又能行血,氣虛不僅能引起血液虛少,虛者無(wú)不滯者,還能因?yàn)闅馓撏苿?dòng)乏力導(dǎo)致血瘀,“陽(yáng)虛則寒”,寒則氣血凝滯,血流緩慢,是造成血液流變異常的主要原因。 李學(xué)玉等[40]的研究表明,陽(yáng)虛患者全血粘度、血漿粘度、紅細(xì)胞壓積、纖維蛋白原明顯高于對(duì)照組。 也有研究表明,陰虛、陽(yáng)虛都存在血液流變學(xué)的異常。 劉素蓉等[41]的研究對(duì)比了陰虛、陽(yáng)虛、正常人血流變學(xué)方面的差異,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示陰虛、陽(yáng)虛兩證與正常人相比均有血液粘度增高,紅細(xì)胞電泳時(shí)間延長(zhǎng),血小板聚集率高的表現(xiàn),說(shuō)明兩證均表現(xiàn)出血液在血管內(nèi)失去了“如水之流”的生理狀態(tài),形成血瘀。

2.4 陽(yáng)虛與能量代謝

陽(yáng)虛與機(jī)體能量代謝關(guān)系密切,陽(yáng)虛的癥狀表現(xiàn)與基礎(chǔ)代謝率低、能量代謝水平下降、產(chǎn)熱不足的表現(xiàn)相似。 唐漢慶[42]的研究探討了BAT 切除術(shù)、(高脂飲食)和隔日寒冷環(huán)境刺激制備的脾陽(yáng)虛大鼠與正常大鼠能量代謝的差異,實(shí)驗(yàn)表明,脾陽(yáng)虛證大鼠能量代謝水平下降,血糖和甘油三酯減少,三磷酸腺苷減少,體溫下降。

Na+-K+-ATP 酶在人體正常代謝中具有非常重要的作用,是存在于細(xì)胞膜上的一種特殊蛋白質(zhì),通過(guò)分解ATP 維持細(xì)胞內(nèi)外液的滲透壓,酶活性升高,ATP 消耗也增加,體內(nèi)能量消耗和產(chǎn)熱也增強(qiáng),反之則越低[43]。 滕培潁等[7]對(duì)比了“氫化可的松”陽(yáng)虛動(dòng)物模型與正常動(dòng)物多個(gè)臟器組織能量代謝水平,結(jié)果表明模型組肝、心、腎、小腸組織的Na+-K+-ATP 酶活性均較正常組顯著降低,表明陽(yáng)虛動(dòng)物模型以上組織的能量代謝水平均降低。

2.5 陽(yáng)虛與自由基

SOD 是存在于生物體內(nèi)的一種抗氧化金屬酶,可延緩由于過(guò)量的自由基對(duì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能產(chǎn)生的損害,修復(fù)受損細(xì)胞。 何曉紅等[44]觀察“氫化可的松”大鼠模型組與對(duì)照組氧化相關(guān)指標(biāo)含量的變化,結(jié)果表明,模型組紅細(xì)胞SOD 及血漿中谷胱甘肽過(guò)氧化物酶明顯低于對(duì)照組,而組織中的單胺氧化酶與過(guò)氧化脂質(zhì)(LPO)高于對(duì)照組。 王鈺霞等[45]在觀察“氫化可的松”陽(yáng)虛小鼠自由基代謝情況的研究中發(fā)現(xiàn),陽(yáng)虛小鼠血中SOD 活力下降,丙二醛(MDA)含量升高。 以上研究表明機(jī)體在陽(yáng)虛時(shí)自由基產(chǎn)生與清除失衡,過(guò)剩的自由基引起細(xì)胞膜的脂類(lèi)過(guò)氧化,膜脂過(guò)氧化的產(chǎn)物如LPO、MDA等明顯升高,導(dǎo)致組織細(xì)胞損傷。

2.6 陽(yáng)虛與微量元素

鋅、鎂、銅等微量元素對(duì)于機(jī)體很多酶活性的發(fā)揮具有重要作用,鋅是核酸蛋白合成所必需的微量元素[46],陽(yáng)虛癥狀與微量元素的代謝紊亂具有相關(guān)性。

吳瑞艷等[47]研究表明,30～60 歲腎陽(yáng)虛伴夜尿頻多、尿急、尿失禁等排尿異常的患者體中的鋅、鎂、銅含量水平較正常人偏低,且補(bǔ)充鋅、鎂、銅后可改善患者排尿異常的癥狀。 馬威等[48]對(duì)比了使用右歸丸治療“羥基脲”腎陽(yáng)虛動(dòng)物模型前后家兔血中微量元素的代謝情況,發(fā)現(xiàn)家兔模型全血銅、鋅、鐵含量與造模前相比顯著降低,治療后全血銅、鋅、鐵元素含量比治療前顯著升高,表明右歸丸可以使“羥基脲”腎陽(yáng)虛動(dòng)物模型微量元素的含量恢復(fù)正常水平。 以上研究說(shuō)明,陽(yáng)虛患者存在鋅、銅、鐵、鎂等微量元素代謝紊亂。

3 分子生物學(xué)指標(biāo)

從整體角度探析生物體內(nèi)的動(dòng)態(tài)變化的組學(xué)技術(shù)有蛋白組學(xué)、代謝組學(xué)、基因組學(xué),與中醫(yī)理論體系的“整體觀”“動(dòng)態(tài)關(guān)”相似,更深入地探討陽(yáng)虛證候的本質(zhì)。

梁華等[6]的研究以“自然衰老”的雄性小鼠為腎陽(yáng)虛研究對(duì)象,比較與青年小鼠的相關(guān)差異蛋白的表達(dá),并對(duì)比金匱腎氣丸給藥前后差異蛋白的表達(dá),結(jié)果顯示青年組與腎陽(yáng)虛組、腎陽(yáng)虛組與給藥組分別鑒定出995、674 個(gè)差異蛋白,79 個(gè)差異蛋白在金匱腎氣丸給藥后回調(diào),研究表明金匱腎氣丸可調(diào)整陽(yáng)虛證相關(guān)的多個(gè)代謝通路中差異蛋白的變化,這些差異蛋白主要參與破骨細(xì)胞分化、糖脂代謝、細(xì)胞凋亡與自噬、氧化還原等生物功能,可初步推測(cè)腎陽(yáng)虛證物質(zhì)基礎(chǔ)與此相關(guān)。 詹正烜等[49]的研究對(duì)比“甲狀腺片混懸液”腎陰虛、“氫化可的松”腎陽(yáng)虛模型大鼠股骨皮質(zhì)骨差異蛋白的表達(dá),結(jié)果表明,兩證蛋白表達(dá)趨勢(shì)相反的是CollaⅠ,腎陽(yáng)虛組中主要與能量代謝有關(guān)的Ltk、Pkm2、Atp5a 等蛋白表達(dá)下調(diào),這可能是不同腎虛狀態(tài)骨量下降程度差異的原因之一。

羅向霞等[50]研究發(fā)現(xiàn),代謝組指紋圖譜的差異性在糖尿病視網(wǎng)膜病變(DR)陽(yáng)虛患者與正常組之間顯現(xiàn),有機(jī)酸類(lèi)和氨基酸類(lèi)為兩者潛在生物標(biāo)記物,推斷陽(yáng)虛型DR 病情進(jìn)展與機(jī)體能量代謝相關(guān)。大量證據(jù)表明腎陽(yáng)虛證與腸道菌群代謝紊亂有關(guān),Chen 等[51]的研究通過(guò)采用糞便代謝組學(xué)結(jié)合16SrRNA 基因測(cè)序,分析正常組與“氫化可的松”腎陽(yáng)虛組腸道菌群的差異,結(jié)果顯示,腎陽(yáng)虛證與三種腸道菌群和十一種相關(guān)代謝產(chǎn)物有關(guān),這些代謝產(chǎn)物會(huì)介導(dǎo)代謝紊亂如氨基酸代謝、能量代謝、甲胺代謝、膽汁酸代謝和尿素循環(huán)、短鏈脂肪酸代謝、神經(jīng)、內(nèi)分泌、免疫和消化系統(tǒng)、脂質(zhì)代謝和碳水化合物代謝。

葛繼榮等[52]研究絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥腎陽(yáng)虛證患者的基因表達(dá)譜,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,與細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 有 關(guān) 的 基 因TRPC6、PRKG1、SDPR、CNKSR、DOK6,與免疫功能有關(guān)的基因JAM3、TAL1、HPGD、Il5ra,與鈣離子活性有關(guān)的基因SLC24A3、ABLIM3、LTBP1、PCSK6, 與神經(jīng)內(nèi)分泌有關(guān)的基因SERPINE2、PTPRN,這些基因均呈下調(diào)趨勢(shì)。 李震等[3]對(duì)比了“勞倦過(guò)度、房室不節(jié)”型腎陽(yáng)虛小鼠模型與對(duì)照組的差異表達(dá)基因,結(jié)果顯示,差異表達(dá)基因主要與生長(zhǎng)激素、泌乳素、促性腺激素、炎癥/免疫、促細(xì)胞凋亡以及影響多巴胺生成的限速酶、影響凝血纖溶機(jī)制和精子發(fā)育代謝的相關(guān)基因有關(guān)。

4 問(wèn)題與展望

目前,學(xué)者們已經(jīng)從動(dòng)物模型、生理生化指標(biāo)檢測(cè)、分子生物學(xué)指標(biāo)檢測(cè)等多方面對(duì)陽(yáng)虛開(kāi)展了大量研究,取得了很多進(jìn)展。

關(guān)于陽(yáng)虛動(dòng)物模型的研究通過(guò)多方面、多手段、多技術(shù)不斷發(fā)展,比較常用的是糖皮質(zhì)激素造模法,但此法多偏重腎陽(yáng)虛,且有些文獻(xiàn)存在不同臟腑陽(yáng)虛癥狀相互混淆的現(xiàn)象,用同一種藥物或造模方式建立的陽(yáng)虛模型所屬臟腑卻不同,且外觀和行為表現(xiàn)并沒(méi)有客觀量化的檢測(cè)方法,判斷方法較為主觀。 目前對(duì)于陽(yáng)虛模型建立是否成功,尚沒(méi)有規(guī)范的統(tǒng)一判斷標(biāo)準(zhǔn),驗(yàn)證模型是否成功主要從以下三個(gè)方面入手：外觀及行為表現(xiàn)；實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)；藥物反證。 且由于證在疾病過(guò)程中是逐步演變的,甚至?xí)膯我坏淖C型向復(fù)合證型演變,因此, 陽(yáng)虛造模要密切觀察時(shí)間、劑量可能引起的證的變化,以及造模成功比較明確的劑量和時(shí)間,根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇接近實(shí)驗(yàn)要求的動(dòng)物模型進(jìn)行研究。

不管哪種造模方式都只是在某個(gè)方面模擬陽(yáng)虛臨床證候,并不能與臨床陽(yáng)虛癥狀全部吻合。 關(guān)于陽(yáng)虛本質(zhì)及物質(zhì)基礎(chǔ)的研究雖然包括很多指標(biāo),不同的方面,但特異性不高,且多為實(shí)驗(yàn)研究,與臨床的診斷與治療仍存在距離。 因此,未來(lái)的研究需要更多的關(guān)注臨床與基礎(chǔ)的結(jié)合,以臨床為切入點(diǎn),進(jìn)行大量關(guān)于陽(yáng)虛患者具有特異性的檢測(cè)指標(biāo),將陽(yáng)虛這一基礎(chǔ)證型通過(guò)臟腑辨證更細(xì)化和全面,完善和規(guī)范不同臟腑陽(yáng)虛證的診斷標(biāo)準(zhǔn),更有利于動(dòng)物模型制作方法的統(tǒng)一,也更有利于對(duì)陽(yáng)虛本質(zhì)的深入理解,為更具體的辨證論治及臨床治療提供相應(yīng)的依據(jù)和參考價(jià)值。