鄒康平，王 冬，鄭 平

（常州市金壇區(qū)檢驗(yàn)檢測(cè)中心，江蘇常州 213251）

羅丹明B也被稱為堿性玫瑰精，屬于一種顏色為鮮桃紅色的人工染料，其本身具備持續(xù)鮮艷的一種熒光特性和較為理想的脂溶性，因?yàn)槠浔旧淼亩拘暂^高，同時(shí)殘留也較高，因此人體長(zhǎng)期接觸會(huì)存在致癌、致畸及致突變的影響，因此部分國(guó)家命令禁止將其添加到食品中，但仍然有一些商家為了個(gè)人利益不規(guī)范使用。當(dāng)前，針對(duì)食品中羅丹明B使用的檢測(cè)方式一般都是運(yùn)用高效液相色譜-熒光法及高效液相色譜-質(zhì)譜法兩種方式，這兩種方式都能夠滿足檢測(cè)提出的要求[1]。但是兩種方式存在的差異主要是停留在對(duì)樣品進(jìn)行提取和凈化上，當(dāng)前實(shí)驗(yàn)室普遍使用的檢測(cè)方式是SN/T 2430—2010進(jìn)出口食品中羅丹明B的一種檢測(cè)方式。

1 材料與方法

1.1 儀器和試劑

AB SCIEX QTRAP 4500型三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜儀；Waters e2695型高效液相色譜儀；AB204-S型電子分析天平；H1850R型臺(tái)式高速離心機(jī)；Fotector Plus型高通量全自動(dòng)固相萃取儀；AutoEVA-60型全自動(dòng)平行濃縮儀[2]。

甲醇和乙腈，丙酮和正己烷，色譜級(jí)；羅丹明B標(biāo)準(zhǔn)品，純度95%；Oasis MCX固相萃取柱和Oasis HLB固相萃取柱都需要控制在60 mg/3 mL，3 μm。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 提取

（1）丙酮提取。選擇2.0 g食用油樣品將其放置在容量為50 mL的離心管中，進(jìn)行渦旋溶解后添加10 mL丙酮，通過(guò)MCX小柱完成凈化，在實(shí)際使用前需要分別使用3 mL甲醇和3 mL的水活化，再使用3 mL丙酮和3 mL甲醇進(jìn)行淋洗，然后將淋洗液去除，在使用3 mL的5%氨水甲醇完成洗脫，隨后完成洗脫液的收集，并將其放置在40 ℃的條件下用氮?dú)獯蹈?，隨后添加1 mL流動(dòng)相完成復(fù)溶，在通過(guò)0.22 μm濾膜后，放置等待檢測(cè)[3]。

（2）乙腈水提取。選擇樣品共計(jì)2.0 g將其放置在容量為50 mL的離心管中，添加10 mL 濃度為70%的乙腈水進(jìn)行3 min的渦旋，同時(shí)需要使用超聲完成20 min的提取。使用轉(zhuǎn)速在4 000 r/min完成5 min的離心，隨后選擇其中的上清液，將其使用0.22 μm的濾膜進(jìn)行過(guò)濾后，放置等待檢測(cè)。

（3）乙腈水-正己烷提取。選擇樣品共計(jì)2.0 g將其放置在容量為50 mL的離心管中添加容量為10 mL 70%的乙腈水溶液進(jìn)行3 min渦旋，隨后添加容量為5 mL的正己烷繼續(xù)進(jìn)行渦旋振蕩，超聲提取20 min[4]。將其放置在4 000 r/min完成5 min的離心后將上層正己烷層去除，下層液體在使用0.22 μm濾膜之后，放置等待檢測(cè)。

1.2.2 色譜條件

色譜柱：Waters C18和RRHD（1.8 μm，2.1 mm×100 mm）；流動(dòng)相：選擇濃度為0.1%的甲醇水溶液與乙腈；流速：0.3 mL/min；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：2 μL。

1.2.3 質(zhì)譜條件

電噴霧ESI離子源；正離子的掃描模式；采取多反應(yīng)檢測(cè)的模式（MRM）。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取溶劑的選擇

羅丹明B本身容易溶于水、甲醇以及乙腈能夠微溶在丙酮，對(duì)于辣椒油和花椒油等部分食用油的樣品分別使用丙酮、70%的乙腈水及70%的乙腈水-正己烷溶液進(jìn)行提取，能夠獲得比較理想的提取效果。3種提取液其填加定量標(biāo)準(zhǔn)物的回收率需要保持在89.2%～98.6%，丙酮提取液和70%乙腈水其提取液的提取效果大致相同，70%乙腈水-正己烷提取液的平均回收率需要控制在90%，相比其他2種提取液低一些，這主要是因?yàn)樯倭苛_丹明B已經(jīng)在正己烷溶劑里殘留。添加正己烷后盡管可以將取液里的油脂快速去除，可是也減少了羅丹明B本身的提取率，綜合考慮其并不需要正己烷去完成凈化處置。對(duì)于食用油樣品需要使用濃度為70%的乙腈水溶液提取就能夠完成分析檢測(cè)，運(yùn)用丙酮提取還需要過(guò)柱凈化，整體分析需要使用濃度為70%的乙腈水將其作為提取溶液[5]。

2.2 固相萃取柱凈化

按照羅丹明B結(jié)構(gòu)里包含的氨基和羧基以及苯環(huán)，需要分別選擇陽(yáng)離子交換固相萃取柱及反相固相萃取柱針對(duì)凈化效果進(jìn)行考察。并且需要按照實(shí)驗(yàn)方式去針對(duì)樣品展開凈化，以O(shè)asis MCX柱凈化其得到的回收率可以達(dá)到95.2%±2.0%，將Oasis HLB柱進(jìn)行凈化的回收率能夠達(dá)到89.4%±3.2%，二者都可以對(duì)羅丹明B提出的分析檢測(cè)要求給以滿足。二者進(jìn)行對(duì)比，Oasis MCX柱當(dāng)前的回收率相對(duì)較高并且操作上也更加簡(jiǎn)單，提取液并不要求將有機(jī)溶劑進(jìn)行去除就能夠進(jìn)行柱凈化，所以最終確認(rèn)Oasis MCX柱為凈化萃取柱。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線和檢出限

羅丹明B其濃度需要保持在1.0～100.0 ng/mL的范圍中保持呈線性的分布，其線性回歸的方程為Y=9 035.1X+855.8，相關(guān)系數(shù)需要保持在0.999 8。使用空白基質(zhì)完成羅丹明B標(biāo)準(zhǔn)品添加的方式，選擇3倍信噪比針對(duì)羅丹明B的檢出限進(jìn)行計(jì)算，結(jié)果為0.5 μg/kg。

2.4 方法精密度和回收率

挑選辣椒油和黃豆醬以及花生樣品，在其中加入含量不同的羅丹明B標(biāo)準(zhǔn)品，并且按照此實(shí)驗(yàn)方法完成所需要的處理，平行測(cè)定6份不同樣品。由表1可知，最后得出樣品其平均添加物質(zhì)的回收率在90.3% ～ 96.8%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）全部低于5%。結(jié)果可以看出，此方法具備理想的準(zhǔn)確性以及可靠性。

表1 精密度和回收率

3 結(jié)論

本文簡(jiǎn)述了羅丹明B的毒性，并且使用高效液相串聯(lián)質(zhì)譜的檢測(cè)方式，對(duì)比多種溶劑在提取獲得的效果，并且使用MCX固相萃取柱對(duì)其進(jìn)行凈化后，減少了樣品產(chǎn)生的基質(zhì)效應(yīng)，并且能夠有效地去除其中存在的雜質(zhì)，空白樣品加標(biāo)回收及重復(fù)實(shí)用性比較理想。由此可以看出此方法具備快速、精準(zhǔn)及靈敏度高的優(yōu)勢(shì)，因此適合針對(duì)食品中的羅丹明B進(jìn)行定性及定量的分析，也能夠?yàn)槠渌嗨乒I(yè)染料提供一種比較理想的檢測(cè)方式。