王 巖

（陜西省寶雞市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，陜西寶雞 721000）

油辣椒，又稱油潑辣子，是一種地道的陜西本土美食，在陜西菜中極具代表性，是陜西八大怪之一，俗稱“油潑辣子一道菜”。作為一個(gè)土生土長(zhǎng)的陜西人，無(wú)論是吃面食還是調(diào)涼菜，都離不開(kāi)一勺紅亮誘人的油辣椒。近年來(lái)，一些不法食品加工經(jīng)營(yíng)者，為了提味增香，增加顧客回頭率，在油辣椒中違法添加非食用物質(zhì)罌粟殼，被依法查處。2016年，寶雞市食品藥品監(jiān)管部門(mén)在鳳縣一面皮攤主侯某的自制油辣椒中檢出罌粟殼成分。2017年，西安市食品藥品監(jiān)管部門(mén)在一熱米皮店自制的油潑辣子中檢出“罌粟回味粉”。2021年江蘇省連云港市公安部門(mén)接群眾舉報(bào)，在一涼皮店的油辣椒中檢出罌粟堿、那可丁等違禁物質(zhì)。為了吸引顧客、牟取暴利，違法添加罌粟殼的案件屢見(jiàn)不鮮[1]，其中，火鍋、麻辣燙、油潑辣子成為了違法案件發(fā)生的重災(zāi)區(qū)[2-3]。

罌粟殼，又稱“御米殼”，為植物罌粟的成熟干燥的果殼，其中嗎啡、可待因、罌粟堿、蒂巴因和那可丁等生物堿類(lèi)物質(zhì)雖然含量較少，但如果長(zhǎng)期食用，會(huì)對(duì)人體精神系統(tǒng)造成損害，具有成癮性，可能引起慢性中毒，是國(guó)家明令禁止添加的非食用物質(zhì)。在2008年和2011年，我國(guó)衛(wèi)生部發(fā)布的《食品中可能違法添加的非食用物質(zhì)和易濫用的食品添加劑名單》第一批[4]和第五批[5]中明確禁止火鍋底料及小吃類(lèi)產(chǎn)品添加罌粟殼。

目前，食品中罌粟殼等生物堿的檢驗(yàn)方法有薄層色譜法[6]、高效液相色譜法[7]、高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法[8]等，其中高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法是最為快捷高效的檢驗(yàn)方法。油辣椒中罌粟殼等生物堿的檢驗(yàn)?zāi)壳吧袩o(wú)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法，本研究參考國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局推薦的補(bǔ)充檢驗(yàn)方法（BJS 201802）《食品中嗎啡、可待因、罌粟堿、那可丁和蒂巴因的測(cè)定》和《食品安全地方標(biāo)準(zhǔn) 火鍋食品中罌粟堿、嗎啡、那可丁、可待因和蒂巴因的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》（DB 31/2010—2012），旨在建立一種適用于油辣椒中嗎啡、可待因、罌粟堿、那可丁、蒂巴因的高效分析方法，以提高地方特色美食油辣椒中罌粟殼類(lèi)生物堿的檢出效率。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

液質(zhì)聯(lián)用儀(島津公司LCMS8030)；電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司SQP Practum224-1CN）；電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司CPA225D）；超聲波清洗機(jī)（昆山市超聲儀器有限公司KQ-200KDE）；離心機(jī)（湖南滬康離心機(jī)有限公司TG16-WS）。

鹽酸罌粟堿（純度100%，批號(hào)171214-201906）、磷酸可待因（純度96.9%，批號(hào)171203-201808）、嗎啡（純度93.6%，批號(hào)171201-201825）、那可?。兌?00%，批號(hào)171224-201605）、蒂巴因（純度100%，批號(hào)171216-201805）標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院；乙腈、甲醇、甲酸、甲酸銨（色譜級(jí)）；PSA、C18、無(wú)水硫酸鎂、無(wú)水醋酸鈉、實(shí)驗(yàn)用水為超純水。油辣椒樣品購(gòu)買(mǎi)于寶雞市各大超市。

1.2 儀器分析條件

1.2.1 液相色譜條件

色譜柱：Waters BEH HILIC（2.1 mm×100 mm，1.7 μm），流動(dòng)相為：A相為0.1%甲酸-乙腈；B相為0.1%甲酸-10 mmol/L甲酸銨；流速0.3 mL/min；進(jìn)樣體積5 μL；柱溫40 ℃；梯度洗脫時(shí)間程序見(jiàn)表1。

表1 梯度洗脫時(shí)間程序

1.2.2 質(zhì)譜條件

離子化方式：正離子源噴霧（ESI+）；多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式（MRM）；離子源接口電壓4.5 kV；霧化氣（N2）流速為3.0 L/min；干燥氣（N2）流速為15.0 L/min；碰撞氣為氬氣；脫溶劑管溫度為200 ℃；加熱模塊溫度為400 ℃。MRM參數(shù)見(jiàn)表2。

表2 五種罌粟殼類(lèi)生物堿的MRM參數(shù)

1.3 樣品的制備

稱取2 g樣品（精確至0.01 g）于50 mL離心管中，加入5 mL水，振搖使其分散均勻，加入15 mL乙腈，渦旋振蕩1 min，加入6 g無(wú)水硫酸鎂和1.5 g無(wú)水乙酸鈉的混合粉末，迅速振搖，渦旋振蕩1 min，以4 000 r/min離心5 min，取上清液待凈化。稱取100 mg PSA，200 mg無(wú)水硫酸鎂，200 mg C18粉末置于50 mL離心管中，移取3.0 mL上清液至此離心管中，渦旋混合1 min，以10 000 r/min離心2 min，上清液過(guò)0.22 μm濾膜，用于測(cè)定嗎啡、可待因，繼續(xù)過(guò)濾，取1.25 L濾液至25 mL容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，搖勻，用于測(cè)定罌粟堿、那可丁、蒂巴因。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的優(yōu)化

本實(shí)驗(yàn)選用沃特世公司BEH HILIC色譜柱對(duì)罌粟殼中5種生物堿成分進(jìn)行分離，BEH HILIC色譜柱是親水保留型色譜柱，可以有效地提高極性化合物的保留效率，增強(qiáng)質(zhì)譜的信號(hào)響應(yīng)，罌粟殼等生物堿在BEH HILIC色譜柱上吸附-解吸能力不同[9]，能得到很好的分離。因?yàn)?種生物堿的極性不同，所以本實(shí)驗(yàn)采取梯度洗脫的方式，以乙腈和甲酸銨為流動(dòng)相，分別加入0.1%的甲酸，保證了酸性的流動(dòng)相體系。首先采用高比例的有機(jī)相乙腈將極性大的成分洗脫出來(lái)，后逐漸加大水相比例，使極性弱的成分洗脫出來(lái)，出峰時(shí)間短，峰型無(wú)拖尾，使罌粟殼中5種生物堿成分得到很好的分離。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，運(yùn)行梯度洗脫程序6 min，可以有效的洗脫出5種待檢的罌粟殼成分，具體見(jiàn)圖1。

圖1 5種罌粟殼類(lèi)生物堿的MRM色譜圖

2.2 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

本實(shí)驗(yàn)分別稱取鹽酸罌粟堿、嗎啡、磷酸可待因、那可丁、蒂巴因5種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用甲酸-甲醇溶液（0.5%）配制成標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，再用乙腈稀釋至合適的濃度，經(jīng)兩通直接進(jìn)入質(zhì)譜檢測(cè)器，采用MRM多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式，ESI+正離子掃描，進(jìn)行母離子掃描和子離子優(yōu)化，優(yōu)化后的質(zhì)譜參數(shù)見(jiàn)表2，以響應(yīng)值大的作為定量離子，響應(yīng)值小的為定性離子。

2.3 樣品前處理方法的選擇

因?yàn)橛屠苯窐悠分泻写罅康纳睾椭舅?，在樣品前處理過(guò)程中要同時(shí)考慮樣品的提取、雜質(zhì)的去除和提高回收率等方面，因而采取QuEChERS法進(jìn)行樣品的提取和凈化。首先加入一定量的水分散樣品，采用乙腈將油辣椒中的罌粟殼生物堿提取出來(lái)，加入無(wú)水硫酸鎂和無(wú)水醋酸鈉混合粉末可以幫助罌粟殼類(lèi)生物堿從水相中提取到有機(jī)相中，同時(shí)除去待測(cè)樣品中的水分，接著加入PSA和C18粉末能夠有效去除油脂中的脂肪酸和色素等[10]。采取QuEChERS法得到的樣品溶液不僅無(wú)明顯的雜質(zhì)干擾，而且回收率和靈敏度較高，同時(shí)節(jié)約了分析時(shí)間。

2.4 線性范圍和檢出限

在上述色譜和質(zhì)譜條件下，嗎啡和可待因在2.5～100 ng/mL，罌粟堿、那可丁、蒂巴因在0.05～2.0 ng/mL，峰面積和濃度均呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)值均大于0.995。按照嗎啡、可待因檢出限濃度12 μg/kg，罌粟堿、那可丁、蒂巴因檢出限3 μg/kg加標(biāo)至陰性油辣椒樣品中，采用2.3的方法提取，樣品溶液上機(jī)檢測(cè)，得出的5種生物堿的信噪比均大于3，認(rèn)為實(shí)驗(yàn)室條件符合檢出限要求，嗎啡、可待因檢出限為12 μg/kg，罌粟堿、那可丁、蒂巴因檢出限為3 μg/kg，靈敏度均高于《食品安全地方標(biāo)準(zhǔn) 火鍋食品中罌粟堿、嗎啡、那可丁、可待因和蒂巴因的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》（DB 31/2010—2012）中各物質(zhì)的檢出限，見(jiàn)表3。

表3 5種罌粟殼類(lèi)生物堿的線性試驗(yàn)結(jié)果

2.5 回收率及精密度試驗(yàn)

選取油辣椒陰性樣品，稱取12等份，分為兩組，每份質(zhì)量為2.0 g，分別加入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品混合溶液，制成高低兩種濃度的樣品，按照上述條件檢測(cè)，每個(gè)水平重復(fù)檢測(cè)6次，結(jié)果表明，方法的精密度和準(zhǔn)確度較高（表4）。

表4 5種罌粟殼類(lèi)生物堿的回收率和精密度（n=6）

2.6 實(shí)際樣品檢測(cè)

為進(jìn)一步驗(yàn)證本方法的方法適應(yīng)性，選取寶雞市市場(chǎng)銷(xiāo)售的油辣椒樣品進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果均為未檢出，與《食品安全地方標(biāo)準(zhǔn) 火鍋食品中罌粟堿、嗎啡、那可丁、可待因和蒂巴因的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》（DB 31/2010—2012）中方法檢出的結(jié)果一致，后續(xù)將繼續(xù)抽取更多的油辣椒樣本進(jìn)行檢測(cè)，以優(yōu)化本檢驗(yàn)方法。

3 結(jié)論

油辣椒中的嗎啡、可待因、罌粟堿、那可丁、蒂巴因5種生物堿尚無(wú)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法，本研究參考國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局推薦的補(bǔ)充檢驗(yàn)方法《食品中嗎啡、可待因、罌粟堿、那可丁和蒂巴因的測(cè)定》（BJS 201802）和《食品安全地方標(biāo)準(zhǔn) 火鍋食品中罌粟堿、嗎啡、那可丁、可待因和蒂巴因的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》（DB 31/2010—2012），建立了5種生物堿的液質(zhì)聯(lián)用檢測(cè)方法，經(jīng)驗(yàn)證，方法準(zhǔn)確性、重復(fù)性好，是一種可靠的檢驗(yàn)方法。