王 巖

（陜西省寶雞市食品藥品檢驗檢測中心，陜西寶雞 721000）

油辣椒，又稱油潑辣子，是一種地道的陜西本土美食，在陜西菜中極具代表性，是陜西八大怪之一，俗稱“油潑辣子一道菜”。作為一個土生土長的陜西人，無論是吃面食還是調(diào)涼菜，都離不開一勺紅亮誘人的油辣椒。近年來，一些不法食品加工經(jīng)營者，為了提味增香，增加顧客回頭率，在油辣椒中違法添加非食用物質(zhì)罌粟殼，被依法查處。2016年，寶雞市食品藥品監(jiān)管部門在鳳縣一面皮攤主侯某的自制油辣椒中檢出罌粟殼成分。2017年，西安市食品藥品監(jiān)管部門在一熱米皮店自制的油潑辣子中檢出“罌粟回味粉”。2021年江蘇省連云港市公安部門接群眾舉報，在一涼皮店的油辣椒中檢出罌粟堿、那可丁等違禁物質(zhì)。為了吸引顧客、牟取暴利，違法添加罌粟殼的案件屢見不鮮[1]，其中，火鍋、麻辣燙、油潑辣子成為了違法案件發(fā)生的重災(zāi)區(qū)[2-3]。

罌粟殼，又稱“御米殼”，為植物罌粟的成熟干燥的果殼，其中嗎啡、可待因、罌粟堿、蒂巴因和那可丁等生物堿類物質(zhì)雖然含量較少，但如果長期食用，會對人體精神系統(tǒng)造成損害，具有成癮性，可能引起慢性中毒，是國家明令禁止添加的非食用物質(zhì)。在2008年和2011年，我國衛(wèi)生部發(fā)布的《食品中可能違法添加的非食用物質(zhì)和易濫用的食品添加劑名單》第一批[4]和第五批[5]中明確禁止火鍋底料及小吃類產(chǎn)品添加罌粟殼。

目前，食品中罌粟殼等生物堿的檢驗方法有薄層色譜法[6]、高效液相色譜法[7]、高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法[8]等，其中高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法是最為快捷高效的檢驗方法。油辣椒中罌粟殼等生物堿的檢驗?zāi)壳吧袩o國家標準方法，本研究參考國家市場監(jiān)督管理總局推薦的補充檢驗方法（BJS 201802）《食品中嗎啡、可待因、罌粟堿、那可丁和蒂巴因的測定》和《食品安全地方標準 火鍋食品中罌粟堿、嗎啡、那可丁、可待因和蒂巴因的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》（DB 31/2010—2012），旨在建立一種適用于油辣椒中嗎啡、可待因、罌粟堿、那可丁、蒂巴因的高效分析方法，以提高地方特色美食油辣椒中罌粟殼類生物堿的檢出效率。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

液質(zhì)聯(lián)用儀(島津公司LCMS8030)；電子天平（賽多利斯科學儀器（北京）有限公司SQP Practum224-1CN）；電子天平（賽多利斯科學儀器（北京）有限公司CPA225D）；超聲波清洗機（昆山市超聲儀器有限公司KQ-200KDE）；離心機（湖南滬康離心機有限公司TG16-WS）。

鹽酸罌粟堿（純度100%，批號171214-201906）、磷酸可待因（純度96.9%，批號171203-201808）、嗎啡（純度93.6%，批號171201-201825）、那可?。兌?00%，批號171224-201605）、蒂巴因（純度100%，批號171216-201805）標準物質(zhì)購于中國食品藥品檢定研究院；乙腈、甲醇、甲酸、甲酸銨（色譜級）；PSA、C18、無水硫酸鎂、無水醋酸鈉、實驗用水為超純水。油辣椒樣品購買于寶雞市各大超市。

1.2 儀器分析條件

1.2.1 液相色譜條件

色譜柱：Waters BEH HILIC（2.1 mm×100 mm，1.7 μm），流動相為：A相為0.1%甲酸-乙腈；B相為0.1%甲酸-10 mmol/L甲酸銨；流速0.3 mL/min；進樣體積5 μL；柱溫40 ℃；梯度洗脫時間程序見表1。

表1 梯度洗脫時間程序

1.2.2 質(zhì)譜條件

離子化方式：正離子源噴霧（ESI+）；多反應(yīng)監(jiān)測模式（MRM）；離子源接口電壓4.5 kV；霧化氣（N2）流速為3.0 L/min；干燥氣（N2）流速為15.0 L/min；碰撞氣為氬氣；脫溶劑管溫度為200 ℃；加熱模塊溫度為400 ℃。MRM參數(shù)見表2。

表2 五種罌粟殼類生物堿的MRM參數(shù)

1.3 樣品的制備

稱取2 g樣品（精確至0.01 g）于50 mL離心管中，加入5 mL水，振搖使其分散均勻，加入15 mL乙腈，渦旋振蕩1 min，加入6 g無水硫酸鎂和1.5 g無水乙酸鈉的混合粉末，迅速振搖，渦旋振蕩1 min，以4 000 r/min離心5 min，取上清液待凈化。稱取100 mg PSA，200 mg無水硫酸鎂，200 mg C18粉末置于50 mL離心管中，移取3.0 mL上清液至此離心管中，渦旋混合1 min，以10 000 r/min離心2 min，上清液過0.22 μm濾膜，用于測定嗎啡、可待因，繼續(xù)過濾，取1.25 L濾液至25 mL容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，搖勻，用于測定罌粟堿、那可丁、蒂巴因。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的優(yōu)化

本實驗選用沃特世公司BEH HILIC色譜柱對罌粟殼中5種生物堿成分進行分離，BEH HILIC色譜柱是親水保留型色譜柱，可以有效地提高極性化合物的保留效率，增強質(zhì)譜的信號響應(yīng)，罌粟殼等生物堿在BEH HILIC色譜柱上吸附-解吸能力不同[9]，能得到很好的分離。因為5種生物堿的極性不同，所以本實驗采取梯度洗脫的方式，以乙腈和甲酸銨為流動相，分別加入0.1%的甲酸，保證了酸性的流動相體系。首先采用高比例的有機相乙腈將極性大的成分洗脫出來，后逐漸加大水相比例，使極性弱的成分洗脫出來，出峰時間短，峰型無拖尾，使罌粟殼中5種生物堿成分得到很好的分離。實驗結(jié)果表明，運行梯度洗脫程序6 min，可以有效的洗脫出5種待檢的罌粟殼成分，具體見圖1。

圖1 5種罌粟殼類生物堿的MRM色譜圖

2.2 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

本實驗分別稱取鹽酸罌粟堿、嗎啡、磷酸可待因、那可丁、蒂巴因5種標準物質(zhì)，用甲酸-甲醇溶液（0.5%）配制成標準儲備液，再用乙腈稀釋至合適的濃度，經(jīng)兩通直接進入質(zhì)譜檢測器，采用MRM多反應(yīng)監(jiān)測模式，ESI+正離子掃描，進行母離子掃描和子離子優(yōu)化，優(yōu)化后的質(zhì)譜參數(shù)見表2，以響應(yīng)值大的作為定量離子，響應(yīng)值小的為定性離子。

2.3 樣品前處理方法的選擇

因為油辣椒樣品中含有大量的色素和脂肪酸，在樣品前處理過程中要同時考慮樣品的提取、雜質(zhì)的去除和提高回收率等方面，因而采取QuEChERS法進行樣品的提取和凈化。首先加入一定量的水分散樣品，采用乙腈將油辣椒中的罌粟殼生物堿提取出來，加入無水硫酸鎂和無水醋酸鈉混合粉末可以幫助罌粟殼類生物堿從水相中提取到有機相中，同時除去待測樣品中的水分，接著加入PSA和C18粉末能夠有效去除油脂中的脂肪酸和色素等[10]。采取QuEChERS法得到的樣品溶液不僅無明顯的雜質(zhì)干擾，而且回收率和靈敏度較高，同時節(jié)約了分析時間。

2.4 線性范圍和檢出限

在上述色譜和質(zhì)譜條件下，嗎啡和可待因在2.5～100 ng/mL，罌粟堿、那可丁、蒂巴因在0.05～2.0 ng/mL，峰面積和濃度均呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)值均大于0.995。按照嗎啡、可待因檢出限濃度12 μg/kg，罌粟堿、那可丁、蒂巴因檢出限3 μg/kg加標至陰性油辣椒樣品中，采用2.3的方法提取，樣品溶液上機檢測，得出的5種生物堿的信噪比均大于3，認為實驗室條件符合檢出限要求，嗎啡、可待因檢出限為12 μg/kg，罌粟堿、那可丁、蒂巴因檢出限為3 μg/kg，靈敏度均高于《食品安全地方標準 火鍋食品中罌粟堿、嗎啡、那可丁、可待因和蒂巴因的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》（DB 31/2010—2012）中各物質(zhì)的檢出限，見表3。

表3 5種罌粟殼類生物堿的線性試驗結(jié)果

2.5 回收率及精密度試驗

選取油辣椒陰性樣品，稱取12等份，分為兩組，每份質(zhì)量為2.0 g，分別加入不同濃度的標準品混合溶液，制成高低兩種濃度的樣品，按照上述條件檢測，每個水平重復檢測6次，結(jié)果表明，方法的精密度和準確度較高（表4）。

表4 5種罌粟殼類生物堿的回收率和精密度（n=6）

2.6 實際樣品檢測

為進一步驗證本方法的方法適應(yīng)性，選取寶雞市市場銷售的油辣椒樣品進行檢測，檢測結(jié)果均為未檢出，與《食品安全地方標準 火鍋食品中罌粟堿、嗎啡、那可丁、可待因和蒂巴因的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》（DB 31/2010—2012）中方法檢出的結(jié)果一致，后續(xù)將繼續(xù)抽取更多的油辣椒樣本進行檢測，以優(yōu)化本檢驗方法。

3 結(jié)論

油辣椒中的嗎啡、可待因、罌粟堿、那可丁、蒂巴因5種生物堿尚無國家標準檢驗方法，本研究參考國家市場監(jiān)督管理總局推薦的補充檢驗方法《食品中嗎啡、可待因、罌粟堿、那可丁和蒂巴因的測定》（BJS 201802）和《食品安全地方標準 火鍋食品中罌粟堿、嗎啡、那可丁、可待因和蒂巴因的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》（DB 31/2010—2012），建立了5種生物堿的液質(zhì)聯(lián)用檢測方法，經(jīng)驗證，方法準確性、重復性好，是一種可靠的檢驗方法。