孫 濤

（泰安市食品藥品檢驗(yàn)檢測研究院 食品工程，山東泰安 271099）

由黃曲霉毒素（AF）導(dǎo)致的食品生產(chǎn)安全問題已經(jīng)成為人們十分關(guān)注和重視的問題之一。本文以ELISA檢測技術(shù)對5類食物中黃曲霉毒素B1進(jìn)行測定，探究該種檢測技術(shù)針對食品中黃曲霉毒素Bsub1/sub檢測價值。

1 材料與方法

1.1 材料與設(shè)備

此次試驗(yàn)中涉及到的試劑以及儀器如表1所示。

表1 設(shè)備以及儀器介紹

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 采集樣本

此次研究中相關(guān)食品樣品均由當(dāng)?shù)爻兄须S機(jī)購買，共計10樣，其中醬油3樣，醋2樣，大米2樣，面粉2樣，食用油1樣。

1.2.2 樣本提取

在對樣本進(jìn)行提取過程中，嚴(yán)格按照國家標(biāo)準(zhǔn)《食品中黃曲霉毒素的測定方法》（GB/T 5009.22—1996）[1]中的相關(guān)要求進(jìn)行處理。

（1）醬油提取。取出5.0 g樣本放置在小燒杯中，加入蒸餾水（5 mL）后放置250 mL漏斗中，向其中加入三氯甲烷（20 mL）并且滴入1 g氯化鈉溶液，搖勻，靜置。使用無水硫酸鈉進(jìn)行過濾（50 mL），加入三氯甲烷后進(jìn)行漏斗過濾，將蒸發(fā)皿放置通風(fēng)良好環(huán)境，進(jìn)行65 ℃水浴后冷卻，向其中加入甲醇（25 mL）保證凝結(jié)物溶解獲得待檢測樣本。

（2）醋提取。獲得醋（10 mL）放置容量瓶（50 mL）內(nèi)部，加入蒸餾水（10～12 mL）振蕩搖勻，且加入氫氧化鈉（10 mol/L）保證pH數(shù)據(jù)為7.0，加入甲醇（25 mL）使用蒸餾水（50 mL）定容，放置15 min待檢測。

（3）面粉提取。取面粉（5.0 g）于三角瓶（100 mL）中，加入甲醇水（25 mL，1∶1），振蕩0.5 h，過濾，獲得檢驗(yàn)樣本。

（4）大米提取。取大米（5.0 g）于三角瓶（100 mL）中加入甲醇水（25 mL，1∶1），振蕩0.5 h，過濾，或者檢測樣品。

（5）食用油提取。取食用油（5.0 g）于小燒杯（25 mL），加入石油醚（20 mL）放置在分液漏斗（250 mL）中，加入甲醇水（25 mL，1∶1）振蕩5 min，提取甲醇水進(jìn)行稀釋。依據(jù)試驗(yàn)需要將該溶液進(jìn)行10 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液配制，用甲醇、PBS溶液將該標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋至0.05 μg/kg、0.10 μg/kg、0.50 μg/kg、1.50 μg/kg 和 10.00 μg/kg。

1.2.3 試驗(yàn)過程

使用常溫下黃曲霉毒素B1酶聯(lián)免疫試劑盒，對酶標(biāo)抗原使用酶標(biāo)稀釋液進(jìn)行稀釋，完成酶標(biāo)抗原后，準(zhǔn)備洗滌液。利用洗滌液進(jìn)行洗板，洗板次數(shù)為2次，選擇兩孔加入AFB1陰性對照液，以及陽性對照液體各50 μL，在其他孔加入50 μL待檢測樣本液。分別在所有的孔中加入基質(zhì)液以及顯色劑，各50 μL，顯色時間15 min，溫度保持37 ℃，同時分別在所有孔中加入終止液50 μL，保證酶標(biāo)儀450 nm波長，測定各個孔的吸光度值。

2 結(jié)果與分析

2.1 最低濃度測定

該方法的靈敏度是指測得最低濃度的A值與0.0 μg/kg測得的A值之差＞0.1讀數(shù)。由表2可知，AFB1最低檢測濃度為 0.1 μg/kg。

表2 AFB1的最低檢測濃度

2.2 線性范圍

分別將AFB1標(biāo)準(zhǔn)溶液濃為0 μg/kg、0.1 μg/kg、0.5 μg/kg、1.5 μg/kg、10.0 μg/kg、20.0 μg/kg 依 次 加 到 酶 標(biāo) 板 的孔中，測定吸光度值。計算結(jié)果顯示當(dāng)AFB1標(biāo)準(zhǔn)溶液濃范圍在0.1～10 μg/kg存在線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r=0.990 5。

2.3 回收率

通過回收率計算，發(fā)現(xiàn)樣本多次加標(biāo)測定的平均回收率在78%～170%，回收率計算結(jié)果見表3。

表3 回收率計算

3 結(jié)論與討論

現(xiàn)階段針對食品中AFB1檢測方法有很多種，例如薄層色譜法，高效液相色譜法，酶聯(lián)免疫吸附方法等[2]。盡管前兩種使用食品檢驗(yàn)較多，但是檢驗(yàn)方法內(nèi)容較為復(fù)雜且檢驗(yàn)時間較多，很難大范圍使用，而且一旦出現(xiàn)檢驗(yàn)樣本制備提純過程中出現(xiàn)問題，極易導(dǎo)致樣本污染[3]。ELISA是一種具有較好特異性的食品測定方法，該種檢測方法靈敏度高，重復(fù)性強(qiáng)[4]。而且其測定過程較為簡單，可以同時檢測一種或者多種食品，而且食品檢測種類較為全面[5]。本文使用ELISA檢測方法測定5種食品，檢測結(jié)果顯示最低檢測濃度為0.1 μg/kg。同時觀察樣本回收率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)各種樣品加標(biāo)平均回收率為78%～170%，回收率較高，同時該種檢測方法具有較好的重復(fù)率，可以大范圍在食品檢驗(yàn)中推廣使用。

綜上所述，黃曲霉毒素Bsub1/sub檢測是保證食品安全的重要方法，ELISA檢測方法可以實(shí)現(xiàn)同時檢測多種食品，可滿足食品檢驗(yàn)需求。