梁 科，黃紫茵，葉秋雄，梁俊發(fā)，李 斌*

（1.廣東達(dá)元綠洲食品安全科技股份有限公司，廣東廣州 510530；2.廣州市食品檢驗(yàn)所，廣東廣州 510410）

“茶”作為中國(guó)特色傳統(tǒng)飲品，其食用安全問(wèn)題不僅關(guān)系到國(guó)家形象，影響我國(guó)茶葉產(chǎn)品進(jìn)出口市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力[1]。影響食品安全的主要問(wèn)題是農(nóng)藥殘留。部分農(nóng)藥因?yàn)槭侵苄缘?，難以被雨水沖刷除去，若加上打藥時(shí)間與采摘時(shí)間過(guò)短，將會(huì)嚴(yán)重危害到消費(fèi)者的身體狀態(tài)。

甲氰菊酯是一種擬除蟲(chóng)菊酯類殺蟲(chóng)殺螨劑，化學(xué)式為C22H23NO3，中等毒性，具有觸殺、胃毒和一定的驅(qū)避作用，該藥殺蟲(chóng)譜廣，擊倒效果快，持效期長(zhǎng)，對(duì)葉螨類害蟲(chóng)具有良好的防治效果，特別適合在害蟲(chóng)、害螨并發(fā)時(shí)使用?！妒称钒踩珖?guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》（GB 2763—2021）對(duì)茶葉中甲氰菊酯的最大殘留限量值為5 mg/kg。

目前，中國(guó)茶葉農(nóng)藥殘留檢測(cè)主要依據(jù)農(nóng)藥的種類和特性，進(jìn)行有機(jī)溶劑萃取、固相萃取和凝膠色譜等方法的提取凈化，并采用液相色譜或氣相色譜進(jìn)行分離檢測(cè)[2]。但鑒于茶葉成分繁雜，用常規(guī)方法處理的提取物往往對(duì)農(nóng)藥殘留的檢測(cè)干擾較大，耗時(shí)耗材，甚至導(dǎo)致檢測(cè)器的污染。為了前處理的高效提取，通常經(jīng)過(guò)3次或多次提取，對(duì)于含水量高的樣品還需要加無(wú)水硫酸鈉，對(duì)于含糖量高的樣品則需要加入適量的水以降低糖濃度[3]。

隨著我國(guó)國(guó)家食品安全標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，茶葉中最大農(nóng)藥殘留限量參數(shù)不斷擴(kuò)增，農(nóng)藥殘留限量值不斷修訂，趨于更加合理與完善[4]。即將執(zhí)行的《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》（GB 2763—2021）對(duì)茶葉農(nóng)藥殘留的要求作出顯著的調(diào)整，要求更加嚴(yán)格。為解決茶葉農(nóng)殘檢測(cè)現(xiàn)存難題，本產(chǎn)品采用膠體金技術(shù)，以膠體金納米顆粒標(biāo)記甲氰菊酯單克隆抗體，建立快速檢測(cè)甲氰菊酯的競(jìng)爭(zhēng)型免疫層析試紙法。樣品中待測(cè)物在側(cè)向流動(dòng)的過(guò)程中，與膠體金標(biāo)記的特異性單克隆抗體結(jié)合，抑制了抗體和檢測(cè)線（T線）上包被抗原的結(jié)合，從而導(dǎo)致T線顏色的變化。T線顯色的強(qiáng)弱與待測(cè)物的含量呈負(fù)相關(guān)。通過(guò)比較檢測(cè)線T線與質(zhì)控線（C線）顯色深淺來(lái)對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行判讀。

1 材料與方法

1.1 樣品來(lái)源

采集茶葉市場(chǎng)20份茶葉樣品，包含綠茶、毛尖、龍井、單樅、鐵觀音、普洱茶、紅茶及烏龍茶。

陰性樣品：采用農(nóng)業(yè)部標(biāo)準(zhǔn)方法[5]進(jìn)行檢測(cè)，甲氰菊酯農(nóng)藥殘留未檢出的樣品為陰性樣品。

1.2 材料與試劑

甲氰菊酯農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品：甲氰菊酯（批號(hào)：20210215），農(nóng)藥為上海農(nóng)藥鑒定所生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)品粉末，由廣東達(dá)元綠洲食品安全科技股份有限公司實(shí)驗(yàn)人員精準(zhǔn)配制為1 000 mg/L標(biāo)準(zhǔn)液，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)方法

參照《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 植物源性食品中208種農(nóng)藥及其代謝物殘留量的測(cè)定 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法》（GB 23200.113—2018）中對(duì)茶葉菊酯類農(nóng)藥的方法進(jìn)行測(cè)定。

1.3.2 快速檢測(cè)方法

茶葉甲氰菊酯速測(cè)法采用廣東達(dá)元綠洲食品安全科技股份有限公司研制的速測(cè)卡，參照說(shuō)明書(shū)操作，有效期內(nèi)使用。

1.3.3 檢出限試驗(yàn)

在經(jīng)驗(yàn)證結(jié)果甲氰菊酯為陰性的樣品中，添加不同濃度的甲氰菊酯標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別進(jìn)行測(cè)定，每個(gè)濃度水平檢測(cè)5批次樣品，記錄陰陽(yáng)性數(shù)量，計(jì)算其靈敏度，當(dāng)靈敏度達(dá)到為100%時(shí)，對(duì)應(yīng)的濃度即為該方法的檢出限。

1.3.4 樣品加標(biāo)試驗(yàn)

在經(jīng)驗(yàn)證為甲氰菊酯陰性的綠茶、龍井、鐵觀音、單樅、紅茶、普洱樣品中，添加檢出限水平的甲氰菊酯標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測(cè)試，其中，每種基質(zhì)樣品加標(biāo)樣品10批，陰性樣品10批，記錄陰陽(yáng)性結(jié)果數(shù)量，并計(jì)算其靈敏度、特異性、假陽(yáng)性率和假陽(yáng)性率。

1.3.5 重復(fù)性試驗(yàn)

隨機(jī)抽取5個(gè)批次的茶葉甲氰菊酯膠體金速測(cè)卡檢測(cè)陰性樣品和陽(yáng)性樣品。

2 結(jié)果與分析

2.1 檢出限試驗(yàn)結(jié)果

由表1可知，毛尖和鐵觀音在0.5 mg/kg、1.0 mg/kg兩個(gè)濃度點(diǎn)的甲氰菊酯檢出率較低，在濃度為2 mg/kg時(shí)，甲氰菊酯檢出率達(dá)到100%，紅茶、熟普在1.0 mg/kg濃度點(diǎn)，甲氰菊酯的檢出率達(dá)到100%，因此甲氰菊酯速測(cè)卡對(duì)4種常見(jiàn)茶葉樣品的最低檢出限為2 mg/kg。

表1 檢出限試驗(yàn)結(jié)果

2.2 樣品加標(biāo)試驗(yàn)

采用茶葉甲氰菊酯快速檢測(cè)卡對(duì)60份茶葉加標(biāo)陽(yáng)性樣品、60份陰性茶葉樣品進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果如表2所示，其中龍井陰性樣中有一份檢出陽(yáng)性，可能為提取時(shí)提取出的茶多酚含量較高所造成的假陽(yáng)性。因此，計(jì)算得茶葉甲氰菊酯膠體金快速檢測(cè)方法的靈敏度為100%，特異性為98.3%，假陽(yáng)性率為1.7%，假陰性率為0%。

表2 靈敏度、特異性、假陽(yáng)性及假陰性率試驗(yàn)結(jié)果

2.3 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

收集5個(gè)不同生產(chǎn)批號(hào)的茶葉甲氰菊酯膠體金卡，分別檢測(cè)6個(gè)通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法驗(yàn)證的樣品。由表3可知，3個(gè)陰性樣品的檢測(cè)結(jié)果都為陰性，3個(gè)陽(yáng)性樣品的檢測(cè)結(jié)果都為陽(yáng)性。且同一樣品，不同生產(chǎn)批次的卡條顯色情況一致，說(shuō)明該速測(cè)卡具有較好重現(xiàn)性。

表3 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)論

茶湯成分復(fù)雜，干擾物質(zhì)多，傳統(tǒng)方法需要多次提取、除雜，步驟煩瑣，雖然精準(zhǔn)、可定量，但儀器昂貴、操作復(fù)雜、且一般需要專業(yè)人員進(jìn)行操作。因此，本研究研制出茶葉甲氰菊酯膠體金快速檢測(cè)卡，該產(chǎn)品單個(gè)樣品15 min內(nèi)完成，簡(jiǎn)便快速、靈敏、適用性廣、成本低、對(duì)人體無(wú)毒害；檢出限達(dá)到2 mg/kg，低于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)限量要求。雖然該產(chǎn)品無(wú)法對(duì)農(nóng)藥殘留進(jìn)行定量檢測(cè)，但是隨著我國(guó)對(duì)茶葉產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)管的力度越來(lái)越嚴(yán)格，對(duì)于市場(chǎng)監(jiān)管、茶企、消費(fèi)者來(lái)說(shuō)，該產(chǎn)品是對(duì)茶葉進(jìn)行快篩的一款理想產(chǎn)品，適合于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)快速檢測(cè)。