印成霞，趙文

（1.東營(yíng)市食品藥品檢驗(yàn)中心，山東東營(yíng) 257091； 2.廣饒縣人民醫(yī)院，山東東營(yíng) 257300）

鐵是人體必不可缺的微量元素，具有造血功能，同時(shí)參與血紅蛋白、細(xì)胞色素及各種酶的合成，運(yùn)輸氧氣和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。人體如果缺鐵會(huì)引起貧血、消化不良、乏力、注意力不集中等癥狀，影響人體健康發(fā)育，甚至造成肌肉酸痛、萎縮等癥狀［1-3］，因此維持人體鐵元素的正常含量對(duì)人體健康具有重要意義。小兒生血糖漿是由熟地黃、山藥（炒）、大棗及硫酸亞鐵組成的一種中成藥，具有健脾養(yǎng)胃、補(bǔ)血生津等作用，主要用于小兒缺鐵性貧血及營(yíng)養(yǎng)不良性貧血等癥狀［4］。硫酸亞鐵作為小兒生血糖漿中主要的補(bǔ)鐵劑，過(guò)量服用會(huì)損害人體呼吸系統(tǒng)，甚至危及生命。然而現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)WS3-B-2654-97 《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方 制劑第十四冊(cè)》［5］僅對(duì)硫酸亞鐵的化學(xué)鑒別進(jìn)行了規(guī)定，而未涉及其含量控制。小兒生血糖漿屬于兒童用藥，為了保證藥品安全性和兒童身體健康，必須嚴(yán)格控制小兒生血糖漿中硫酸亞鐵的含量。

目前測(cè)定小兒生血糖漿中硫酸亞鐵含量的方法主要有紫外分光光度法和比色法［6-8］。小兒生血糖漿顏色較深，采用比色法靈敏度較低，紫外分光光度法易受顏色干擾，且硫酸亞鐵易氧化，長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣中表面會(huì)生成黃棕色的堿式硫酸鐵［9-10］，影響測(cè)定結(jié)果?；鹧嬖游展庾V法靈敏度高，操作簡(jiǎn)單，分析速度快，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，且鐵元素易于原子化，只需要較窄的狹縫寬度，就可以提高信噪比，減少干擾和背景值，已廣泛應(yīng)用于鐵元素的測(cè)定。筆者參考相關(guān)文獻(xiàn)［11-15］，選用火焰原子吸收法測(cè)定小兒生血糖漿中鐵的質(zhì)量濃度，根據(jù)鐵的質(zhì)量濃度換算得到硫酸亞鐵的質(zhì)量濃度，為控制小兒生血糖漿中硫酸亞鐵含量，保證藥品有效性提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

原子吸收分光光度計(jì)：Thermo iCE3000 型，美國(guó)賽默飛世爾科技公司。

鐵空心陰極燈：非編碼燈，最大工作電流為15 mA，美國(guó)賽默飛世爾科技公司。

電子天平：ML204T 型，感量為0.1 mg，瑞士梅特勒-托利多公司。

超聲儀：科導(dǎo)SK8200Hp 型，上海五久自動(dòng)化設(shè)備有限公司。

移液槍：100～1 000 μL，德國(guó)艾本德公司。

超純水機(jī)：Millpore-Q 型，美國(guó)密理博公司。

鐵、鈉、鉀單元素溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：質(zhì)量濃度均為1 000 μg／mL，編號(hào)分別為GSB 04-1726-2004、GSB 04-1738-2004、GSB 04-1733-2004，介質(zhì)均為H2O，國(guó)家有色金屬及電子材料分析測(cè)試中心。

銅 溶 液 標(biāo) 準(zhǔn) 物 質(zhì)：1 000 μg／mL，編 號(hào) 為GBW(E) 081579，介質(zhì)為1%硝酸溶液，北京海岸鴻蒙標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)技術(shù)有限責(zé)任公司。

25 種金屬元素混合溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：鋇、釩、鈣、鎘、鉻、鈷、鉀、鋁、鎂、錳、鉬、鈉、鎳、硼、鉛、砷、鍶、鉈、鈦、銻、鐵、銅、硒、錫、鋅的質(zhì)量濃度均為100 μg／mL，介質(zhì)為硝酸-鹽酸-氫氟酸，編號(hào)為GNM-M251678-2013，國(guó)家有色金屬及電子材料分析測(cè)試中心。

硫酸亞鐵對(duì)照品，批號(hào)為111613-201802，含量為99.0%，中國(guó)食品藥品檢定研究院。

高純乙炔：純度不小于99.99%，東營(yíng)正華氣體公司。

小兒生血糖漿樣品：3 個(gè)批號(hào)分別標(biāo)記為1＃、2＃和3＃，市售。

實(shí)驗(yàn)用水為超純水。

1.2 儀器工作條件

燃?xì)猓嚎諝?乙炔；測(cè)定波長(zhǎng)：248.3 nm；測(cè)定次數(shù)：3 次；燃?xì)饬髁浚?.9 L／min；燃燒器高度：7.2 mm；背景校正：氘燈；通帶寬度：0.2 nm；鐵空心陰極燈工作電流：12 mA。

1.3 溶液配制

鐵標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：200 μg／mL，精密量取2 mL鐵溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，置于10 mL 容量瓶中，加入超純水稀釋并定容至標(biāo)線，搖勻。

系列鐵標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：精密吸取鐵標(biāo)準(zhǔn)工作溶液0.2、0.5、1.0、2.0、3.0 mL，分別置于5 只25 mL容量瓶中，用超純水稀釋并定容至標(biāo)線，搖勻，配制成鐵的質(zhì)量濃度分別為1.6、4.0、8.0、16.0、24.0 μg／mL 的系列鐵標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.4 樣品處理

精密量取2 mL 小兒生血糖漿樣品，置于三角錐形瓶中，精密加入超純水50 mL，超聲10 min，過(guò)濾。精密量取1 mL 上述濾液，置于10 mL 容量瓶中，加入超純水稀釋并定容至標(biāo)線，搖勻，過(guò)濾，濾液即為樣品溶液。同法制備樣品空白溶液。

2 結(jié)果與討論

2.1 儀器工作條件優(yōu)化

燈電流大小、乙炔氣體流量和燃燒器高度均影響測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性。燈電流太小，光源輻射強(qiáng)度低；燈電流太大，會(huì)縮短燈的使用壽命。以質(zhì)量濃度為24.0 μg／mL 的鐵標(biāo)準(zhǔn)工作溶液為待測(cè)樣品，通過(guò)調(diào)整燈電流、燃燒器高度和乙炔流量，保證吸光度值最大。結(jié)果表明，當(dāng)采用最大燈電流15 mA時(shí)，吸光度為0.254 1；當(dāng)采用最大燈電流的75%，即11.25 mA 時(shí)，吸光度為0.253 6，二者相差不大，因此采用最大燈電流的75%作為測(cè)定工作電流。乙炔流量分別為0.7、0.9、1.2 L／min 時(shí)，吸光度分別為0.223 6、0.253 9、0.254 3；燃燒器高度分別為6.8、7.2、7.6 mm 時(shí)，吸光度分別為0.251 5、0.253 3、0.253 9。二者均會(huì)直接影響待測(cè)元素的原子化效率，進(jìn)而影響方法的靈敏度，優(yōu)化后的儀器工作條件見(jiàn)1.2。

2.2 樣品處理方法選擇

分別采用微波消解-硝酸處理法和超純水直接超聲溶解法對(duì)樣品進(jìn)行處理，結(jié)果發(fā)現(xiàn)二者測(cè)定結(jié)果分別為2.19、2.17 mg／mL，基本一致，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，原因可能是由于小兒生血糖漿中硫酸亞鐵含量較高，且其易溶于水，雖然微波消解后的鐵含量比直接超聲溶解的鐵含量稍高（因?yàn)槲⒉ㄏ鉁y(cè)定的是全部鐵含量，處方中含有其它藥材），但是藥材中的鐵元素屬于微量的，因此可以忽略不計(jì)，認(rèn)為原子吸收所測(cè)定的鐵元素就是硫酸亞鐵中鐵的含量，而且超純水直接超聲溶解比微波消解處理簡(jiǎn)單，安全環(huán)保，因此采用超純水超聲溶解進(jìn)行提取，根據(jù)硫酸亞鐵和鐵的含量換算關(guān)系進(jìn)行推算，從而間接測(cè)定處方中硫酸亞鐵的含量。所用容量瓶在使用前均需要用20%硝酸溶液浸泡，以防干擾測(cè)定結(jié)果。

2.3 干擾實(shí)驗(yàn)

取1.4 中的待測(cè)樣品溶液，分別加入2 mL 鉀、鈉溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，1 mL 25 種金屬元素混合溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和1 mL 質(zhì)量濃度為100 μg／mL 的銅溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，在1.2 儀器工作條件下分別進(jìn)行測(cè)定，當(dāng)各元素的相對(duì)誤差在±10%范圍內(nèi)時(shí)，樣品測(cè)定值為2.180 6 mg／mL，加入上述元素后溶液測(cè)定值為2.138 8 mg／mL，平均相對(duì)偏差為0.97%。表明上述元素不干擾鐵的測(cè)定，該方法抗干擾能力強(qiáng)，可以用于小兒生血糖漿中鐵的測(cè)定。

2.4 線性方程與檢出限

在1.2 儀器工作條件下，分別對(duì)1.3 中的系列鐵標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)行測(cè)定，以鐵的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)工作曲線方程為Y=0.007 47X+0.001 4，相關(guān)系數(shù)為0.999 9，線性范圍為1.6～24.0 μg／mL。

在1.2 儀器工作條件下，對(duì)樣品空白溶液重復(fù)測(cè)定11 次，計(jì)算測(cè)定結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)偏差，以3 倍標(biāo)準(zhǔn)偏差與標(biāo)準(zhǔn)工作曲線斜率的比值（3s／k）為方法檢出限，以10 倍標(biāo)準(zhǔn)偏差與標(biāo)準(zhǔn)工作曲線斜率的比值（10s／k）為方法定量限，計(jì)算得方法檢出限為0.196 μg／mL，定量限為0.653 μg／mL。

2.5 精密度試驗(yàn)

取1＃小兒生血糖漿樣品，按照1.4 樣品處理方法平行制備6 份樣品溶液，在1.2 儀器工作條件下分別進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 精密度試驗(yàn)結(jié)果

由表1 可知，測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.63%，表明該方法具有良好的精密度。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取2.5 中的一份樣品溶液，按照1.2 儀器工作條件，分別在制備后第0，1，2，4，8，12，16，24 h 進(jìn)行測(cè)定，各時(shí)間點(diǎn)的吸光度分別為0.056 25、0.055 68、0.053 69、0.056 16、0.056 04、0.053 87、0.052 69、0.056 28，測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.36%，表明該樣品溶液在24 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 加標(biāo)回收試驗(yàn)

精密量取9 份1＃小兒生血糖漿樣品各1 mL，分別置于具塞錐形瓶中，每3 份為一組，然后分別加入適量的硫酸亞鐵對(duì)照品，按照1.4 樣品處理方法制備樣品溶液，在1.2 儀器工作條件下分別進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表2。由表2 可知，樣品加標(biāo)回收率為93.54%～97.65%。

表2 加標(biāo)回收試驗(yàn)結(jié)果

2.8 樣品測(cè)定

取不同批號(hào)的小兒生血糖漿樣品，按照1.4 樣品處理方法制備樣品溶液，在1.2 儀器工作條件下分別進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。由表3 可知，3 批樣品中硫酸亞鐵的轉(zhuǎn)移率分別為90.16%，93.50%和96.42%，平均轉(zhuǎn)移率為93.36%，符合中成藥中一般藥材轉(zhuǎn)移率的要求。

表3 樣品測(cè)定結(jié)果

3 結(jié)語(yǔ)

建立了火焰原子吸收光譜法測(cè)定小兒生血糖漿中硫酸亞鐵濃度的分析方法，采用火焰原子吸收光譜法測(cè)定小兒生血糖漿中鐵的質(zhì)量濃度，根據(jù)鐵的質(zhì)量濃度換算成硫酸亞鐵的質(zhì)量濃度。該方法雖然無(wú)法區(qū)分鐵離子的價(jià)態(tài)，但是小兒生血糖漿中硫酸亞鐵含量最高，其它微量鐵可以忽略不計(jì)，因此該方法靈敏度高，分析速度快，準(zhǔn)確度高，適用于小兒生血糖漿中硫酸亞鐵濃度的測(cè)定。按所建方法對(duì)3批樣品進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果均符合要求。