陳其燕，石 云，張言周，洪 鍵

（1.鹽城師范學(xué)院海洋與生物工程學(xué)院，江蘇 鹽城 224007；2.江蘇醫(yī)藥職業(yè)學(xué)院藥學(xué)院，江蘇 鹽城 224002）

世界各國(guó)肥胖的發(fā)病率越來越高，并且呈越來越年輕化的趨勢(shì)，由此引發(fā)的糖尿病、高血脂癥、心臟病等代謝紊亂性疾病，嚴(yán)重威脅人類的健康［1］。目前，傳統(tǒng)治療肥胖的手段包括運(yùn)動(dòng)減肥、藥物和外科手術(shù)療法，雖然藥物和手術(shù)療法效果明顯，但是產(chǎn)生的副作用較大，長(zhǎng)期運(yùn)動(dòng)能達(dá)到一定的減肥效果，但易反彈［2］。因此，尋找天然存在的高效低毒的減肥活性物質(zhì)成為了醫(yī)學(xué)上的研究熱點(diǎn)。

濱海白首烏為蘿藦科植物耳葉牛皮消（Cynanchum auriculatumRoyle ex Wight，CRW）的塊根［3］，在鹽城市濱?？h廣泛種植和食用，已獲得國(guó)家地理標(biāo)志產(chǎn)品稱號(hào)，屬于藥食同源的兼用植物。現(xiàn)代研究表明，白首烏中含有C21 甾苷、多糖、黃酮等活性成分，并含有豐富的蛋白質(zhì)、氨基酸及鋅、錳、鐵、鈣、鉀等必需微量元素［4-6］。因此，濱海白首烏具有抗腫瘤［7-9］、抗氧化［10］、增強(qiáng)免疫及保護(hù)肝臟等藥理功效［11，12］。

白首烏多糖具有降低血清膽固醇的作用，并且其降脂效果與給藥劑量呈正相關(guān)［13］。白首烏總苷具有促動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增生、抗高脂的作用，對(duì)預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成有一定的意義［14］。但白首烏對(duì)食源性肥胖是否具有作用功效尚不清楚，因此，本研究采用高脂誘導(dǎo)的肥胖小鼠為動(dòng)物模型，對(duì)濱海白首烏降脂減肥的功效進(jìn)行了初步探索。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

濱海白首烏精粉由江蘇鹽城金昉首烏科技有限公司饋贈(zèng)；4%多聚甲醛、20%戊二醛、戊巴比妥鈉和肝素鈉，南京生興生物技術(shù)公司；葡萄糖（G7021），美國(guó)Sigma 公司；血糖儀及血糖試紙，美國(guó)Roche 公司；葡萄糖（995-18311）、甘油三酯（995-33093）、膽固醇（999-33493）測(cè)定試劑盒，日本和光純藥公司。SPF 級(jí) 4 周齡雄性 C57BL∕6J 小鼠，體重 10～12 g，購(gòu)于揚(yáng)州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，合格證號(hào)SCXK（蘇）2017-0007。

7020 型全自動(dòng)生化分析儀，日本HITACHI 公司；5417R 型冷凍高速離心機(jī)，德國(guó)Eppendorf 公司；EL204 型電子天平，瑞士METTLER TOLEDO 公司。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物試驗(yàn) 將30 只C57BL∕6J 小鼠飼養(yǎng)于江蘇省醫(yī)藥職業(yè)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，適應(yīng)性培養(yǎng)1 周后，隨機(jī)分為3 組，對(duì)照組（Con，n=10）飼喂正常脂肪含量的飼料（脂肪供能10%），高脂組（High-fat diet，HF，n=10）飼喂高脂飼料（脂肪供能45%），試驗(yàn)組（High-fat diet+10% CRW，HBS，n=10）飼喂含 10%白首烏精粉的高脂飼料。已有研究表明，添加200 mg∕kg 體質(zhì)量的白首烏多糖能夠顯著降低血液中脂質(zhì)含量［13］，因此本研究中添加10%的白首烏精粉，12 h 光照，12 h 黑暗，恒溫恒濕，自由采食和飲水，記錄每周體重增長(zhǎng)情況。

1.2.2 葡糖糖耐量試驗(yàn) 小鼠在禁食10 h 后，葡萄糖腹腔注射，分別檢測(cè)注射葡萄糖前（0 min）及注射后15、30、60、90、120 min 各時(shí)間點(diǎn)血糖含量。

1.2.3 樣品采集 小鼠空腹24 h 后，通過下腔靜脈注射戊巴比妥鈉麻醉，腹腔采血，分別采集腓腸肌、附睪脂肪和肝臟組織，液氮速凍，之后轉(zhuǎn)入-70 ℃冰箱儲(chǔ)存。采集的血液3 000 r∕min 離心5 min 分離血清，血清置于-70 ℃冰箱中凍存?zhèn)溆谩Ｈ坎蓸釉?5 min 內(nèi)完成。

1.2.4 生長(zhǎng)指標(biāo)檢測(cè) 試驗(yàn)樣品采集時(shí)，稱量小鼠體重、肝臟重、腓腸肌重和附睪脂重，并計(jì)算各個(gè)器官重與體重的比值。

1.2.5 形態(tài)學(xué)指標(biāo)檢測(cè) 小鼠的肝臟、骨骼肌以及脂肪切片，4%多聚甲醛溶液固定，用油紅O 脂肪染色法染色肝臟細(xì)胞，HE 染色法染色骨骼肌以及脂肪細(xì)胞，檢測(cè)小鼠的形態(tài)學(xué)指標(biāo)。

1.2.6 血液生化指標(biāo)檢測(cè) 用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清中葡萄糖、甘油三酯。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

所有數(shù)據(jù)都用Means±SEM 表示，統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS 20.0 軟件，單一方差分析（One-way ANOVA with a Bonferroni post hoc test），P＜0.05 為差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 體重及葡萄糖耐受變化

飼喂9 周后，HF 組小鼠體型和重量顯著高于Con 和 HBS 組（P＜0.05），但在高脂中加入白首烏后其體型和體重顯著緩解（P＜0.05）（圖1A、圖1B）。

與對(duì)照組相比，高脂組小鼠無論是空腹血糖（0 min）還是在腹腔注射葡萄糖體重后15、30、60、90 和120 min 血糖含量均顯著升高（P＜0.05），說明高脂日糧飼喂9 周后小鼠發(fā)生了葡萄糖不耐受（圖1C、圖1D）。與HF 組小鼠相比，HBS 組無論是空腹血糖（0 min），還是在腹腔注射葡萄糖 15、30、60、90 和 120 min 后血糖含量均有顯著降低，并且HBS 組曲線下面積（Area under curve，AUC）相對(duì) HF 組也顯著降低，表明濱海白首烏能夠緩解高脂誘導(dǎo)的小鼠肥胖和葡萄糖不耐受。

2.2 肝臟、骨骼肌與脂肪組織的形態(tài)學(xué)變化

油紅O 脂肪染色結(jié)果（圖2）表明，與HF 組相比，HBS 組的肝臟中脂質(zhì)含量明顯減少；HE 染色結(jié)果表明，HBS 組脂肪細(xì)胞的大小相對(duì)于HF 組顯著減小，但骨骼肌細(xì)胞大小無明顯變化。表明濱海首烏顯著降低了肥胖小鼠體內(nèi)的脂質(zhì)含量，促進(jìn)了小鼠脂質(zhì)代謝。

2.3 生長(zhǎng)指標(biāo)的變化

生長(zhǎng)指標(biāo)結(jié)果（表1）表明，HBS 組小鼠與HF 組相比，體重、棕色脂肪重、附睪脂肪重及附睪脂肪指數(shù)、棕色脂肪指數(shù)均顯著降低（P＜0.05），表明濱海白首烏能夠緩解高脂誘導(dǎo)的小鼠肥胖。

2.4 血液生化指標(biāo)的變化

血液生化指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果（表2）表明，與HF 組相比，HBS 組小鼠的血糖含量、甘油三酯含量顯著降低（P＜0.05）。表明濱海白首烏能夠顯著降低肥胖小鼠的血脂含量。

圖1 C57BL/6J 小鼠高脂日糧飼喂9 周后體重變化及GTT 檢測(cè)結(jié)果

圖2 白首烏對(duì)肥胖小鼠肝臟、骨骼肌和脂肪組織表型的影響

表1 體重、棕色脂肪和附睪脂肪重

表2 血清中的生化指標(biāo)

3 小結(jié)與討論

濱海白首烏作為藥食同源性的植物，因含有多種活性成分而具有抗腫瘤，降血脂等藥理功效。本研究采用3 周齡雄性小鼠，用含10%白首烏的高脂飼料飼喂9 周，檢測(cè)白首烏對(duì)食源性小鼠肥胖的作用功效。結(jié)果表明，在高脂飼料中添加濱海白首烏能夠顯著緩解高脂導(dǎo)致的葡萄糖不耐受，并顯著降低了肥胖小鼠的體重、棕色脂肪重量、附睪脂肪重量及棕色脂肪指數(shù)、附睪脂肪指數(shù)，同時(shí)觀察到飼喂白首烏后小鼠肝臟中的脂質(zhì)含量明顯降低，脂肪細(xì)胞的大小顯著減小，并且白首烏顯著緩解了肥胖小鼠血清中的葡萄糖和甘油三酯含量，表明白首烏具有顯著地緩解高脂誘導(dǎo)的小鼠肥胖的功效。已有研究表明白首烏多糖具有降血脂的作用［13-15］，因此，推測(cè)本研究中濱海白首烏降血糖血脂的功效是由其中所含的多糖所產(chǎn)生的主要作用效果，并且可能是通過調(diào)控小鼠體內(nèi)的脂質(zhì)代謝以達(dá)到分解脂肪緩解小鼠肥胖的效果。

綜上所述，濱海白首烏能夠緩解高脂誘導(dǎo)的小鼠肥胖和葡萄糖不耐受，但其在體內(nèi)發(fā)揮生物學(xué)功能的具體分子機(jī)制還不清楚，需要在細(xì)胞和分子水平進(jìn)一步地深入研究，為白首烏在臨床和生產(chǎn)上的應(yīng)用提供參考。