敖君求，張清安，邵 凱，王 玨，竇春陽(yáng)

（陜西師范大學(xué)食品工程與營(yíng)養(yǎng)科學(xué)學(xué)院，陜西西安710119）

苦杏仁苷（維生素B17）是一種具有重要生理活性和藥用價(jià)值的常見(jiàn)的α-羥基腈衍生類(lèi)物質(zhì)?？嘈尤受罩饕哂幸韵挛锢硇再|(zhì)：熔點(diǎn)為200℃，無(wú)水條件下熔點(diǎn)約為220℃，1 g可以溶解于12 mL水、900 mL酒精或者11 mL沸騰酒精中，易溶于沸水，幾乎不溶于乙醚[1]。目前，苦杏仁苷已經(jīng)成為一種具有較高研究?jī)r(jià)值的活性物質(zhì)，因其具有祛痰和治療癌癥的作用而被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥行業(yè)[2]。此外，苦杏仁苷還少量存在于部分食品中或以食品添加劑的形式添加到食品當(dāng)中。

從食品行業(yè)視角對(duì)苦杏仁苷結(jié)構(gòu)、生理作用、提取和檢測(cè)等幾個(gè)方面對(duì)相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行綜述，對(duì)苦杏仁苷作為食品資源開(kāi)發(fā)進(jìn)行探討，分析當(dāng)前苦杏仁苷行業(yè)所存在的問(wèn)題，并提出可行的解決方案，為深入開(kāi)發(fā)利用提供參考。

1 苦杏仁苷的結(jié)構(gòu)及分解

1.1 苦杏仁苷的結(jié)構(gòu)

苦杏仁苷又名苦杏仁甙、苯乙醇腈-β-葡糖苷酸，也就是維生素B17和苯乙醇腈。其結(jié)構(gòu)由2分子葡萄糖和1分子的杏仁腈聯(lián)結(jié)而成，C20H27NO11是其分子式，其相對(duì)分子質(zhì)量為457[1]，苦杏仁苷和苦杏仁甙等同使用。天然存在的苦杏仁苷是有活性的右旋物，而異構(gòu)化以后形成沒(méi)有活性的左旋物[3]。

苦杏仁苷見(jiàn)圖1，苦杏仁甙見(jiàn)圖2。

圖1 苦杏仁苷

圖2 苦杏仁甙

1.2 苦杏仁苷的降解

完好苦杏仁中的苦杏仁苷較為穩(wěn)定，一旦種皮或仁受到破損并接觸到水或溶液，苦杏仁中的苦杏仁苷就會(huì)快速分解，這也是苦杏仁脫苦的基本原理，其分解主要有酶解和水解2種途徑。為了加速苦杏仁的脫苦，張馨允[4]研究了超聲輔助苦杏仁苷的酶解脫苦機(jī)制，結(jié)果表明超聲波加速苦杏仁苷降解主要是通過(guò)激活β-葡萄糖甘酶的活性實(shí)現(xiàn)的?？嘈尤受盏拿附猱a(chǎn)物-杏仁氰遇熱易分解成苯甲醛和氫氰酸（HCN），其中HCN有劇毒，因此大量口服苦杏仁苷容易中毒。李強(qiáng)等人[5]利用正交試驗(yàn)優(yōu)化了鹽酸水解苦杏仁苷的最佳工藝，結(jié)果表明鹽酸濃度0.2 mol/L，料液比1∶5，溫度40℃，時(shí)間2 h時(shí)，水解率可達(dá)94.62%?？嘈尤受战到鈾C(jī)制的研究有助于實(shí)現(xiàn)對(duì)苦杏仁脫苦的科學(xué)調(diào)控，從而有效地減少因過(guò)度脫苦導(dǎo)致的資源浪費(fèi)和脫苦不足導(dǎo)致的食物中毒事故的發(fā)生。

2 生理功能

苦杏仁苷具有止咳、鎮(zhèn)痛和抗腫瘤等許多生理作用，其中部分作用還存在爭(zhēng)議。

2.1 鎮(zhèn)咳消喘作用

苦杏仁苷對(duì)于祛痰、止咳具有公認(rèn)的療效。夏其樂(lè)等人[6]利用楊梅疏果核仁苦杏仁苷提取物進(jìn)行試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)45，90，180 mg/kg試驗(yàn)組氨水引咳小鼠的咳嗽潛伏期均有不同程度增長(zhǎng)且2 min內(nèi)的咳嗽頻數(shù)減少，其中90 mg/kg劑量組咳嗽潛伏期較對(duì)照組明顯增長(zhǎng)（p<0.05），表明苦杏仁苷具有較好的止咳效果。衛(wèi)昊等人[7]研究發(fā)現(xiàn)，10 mg/kg和20 mg/kg的苦杏仁苷對(duì)變應(yīng)性哮喘小鼠變應(yīng)性氣道炎癥均有顯著的抑制效果。有資料顯示，苦杏仁苷在胃中分解為氫氰酸進(jìn)而抑制呼吸中樞，從而實(shí)現(xiàn)其治療效果，但氫氰酸有劇毒且作用機(jī)理尚未可知。

2.2 消炎作用

研究表明，苦杏仁苷具有優(yōu)良的消炎功效。盧明芳等人[8]選取120位患有糜爛性胃炎的老年患者，隨機(jī)分成相同人數(shù)的對(duì)照組和試驗(yàn)組，其中對(duì)照組使用奧美拉唑和膠體果膠鉍進(jìn)行一般治療，試驗(yàn)組在對(duì)照組的基礎(chǔ)上，每日1次口服苦杏仁苷0.5 g。通過(guò)對(duì)比2組患者的治療效果，觀察糜爛的恢復(fù)效果，血清中SOD，MDA及NO濃度變化，發(fā)現(xiàn)苦杏仁苷能夠提高老年糜爛性胃炎患者的治療效果，加快糜爛的痊愈。對(duì)于Ⅱ型膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎（CIA），羅德梅等人[9]認(rèn)為，抑制CIA大鼠外周血中炎性細(xì)胞因子IL-1β，s ICAM-1的表達(dá)，同時(shí)降低滑膜ASIC3蛋白的表達(dá)水平，可能是苦杏仁苷消炎和保護(hù)軟骨作用的機(jī)制之一。

2.3 抗腫瘤作用

癌癥是一類(lèi)對(duì)人類(lèi)健康有著巨大威脅的疾病，其抗癌作用及機(jī)理是當(dāng)前的一個(gè)研究熱點(diǎn)。癌癥的危害主要在于2點(diǎn)：一是在環(huán)境條件允許下，癌細(xì)胞可以無(wú)限增殖；二是癌細(xì)胞極易遷移擴(kuò)散。因此，對(duì)于控制癌癥病情需要從控制增殖和轉(zhuǎn)移擴(kuò)散等方面著手。苦杏仁對(duì)于癌細(xì)胞的增殖和擴(kuò)散均有抑制作用[10]，在治療癌癥時(shí)不易產(chǎn)生耐藥性、毒性反應(yīng)小[11]，是抗癌藥物的一種優(yōu)質(zhì)選擇。

自20世紀(jì)70年代以來(lái)，苦杏仁苷成為了一種最受歡迎的常規(guī)抗癌治療藥物[12]。關(guān)于苦杏仁苷抗癌作用的臨床研究，之后也一直在進(jìn)行，目前已證實(shí)其對(duì)膀胱癌、肺癌、肝癌、前列腺癌等均顯示出了良好的治療效果[12]。由于作用機(jī)理和最佳劑量的研究缺乏臨床意義，因此近年來(lái)出現(xiàn)了許多相關(guān)的研究。

大部分關(guān)于苦杏仁苷抗腫瘤作用的研究都停留在體外離體細(xì)胞或動(dòng)物試驗(yàn)，對(duì)其機(jī)理的研究也是在細(xì)胞水平下開(kāi)展的[13]。例如，Jasmina Makarevi等人[14]的研究中將新鮮杏仁杏仁苷溶解于細(xì)胞培養(yǎng)液中，在培養(yǎng)瓶中應(yīng)用于腫瘤細(xì)胞24 h或2周，區(qū)分急性和慢性治療，然后展開(kāi)了對(duì)應(yīng)研究。Bahman Moradipoodeh等人[15]將SK-BR-3細(xì)胞接種于6孔板37℃，5% CO2孵育24 h后，用不同濃度的苦杏仁苷處理 細(xì)胞。

這些研究具有一定的參考價(jià)值，但對(duì)于更復(fù)雜的人體，需要更多詳盡的研究。同時(shí)，關(guān)于苦杏仁苷抗癌機(jī)制的解釋百家爭(zhēng)鳴[16-17]，沒(méi)有系統(tǒng)性、確定性結(jié)論，說(shuō)明苦杏仁苷抗癌的機(jī)理只有模糊的概念。目前大部分的學(xué)者認(rèn)為[18]，苦杏仁苷可通過(guò)調(diào)控腫瘤細(xì)胞周期相關(guān)蛋白或基因，影響細(xì)胞周期，抑制細(xì)胞增殖；通過(guò)調(diào)控凋亡相關(guān)蛋白誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡。此外，關(guān)于苦杏仁苷抗癌作用的研究雖在體外進(jìn)行，但也應(yīng)該考慮毒性作用，注意控制劑量。

2.4 苦杏仁苷對(duì)于慢性阻塞性肺?。–OPD）的作用

慢性阻塞性肺?。–OPD）是一種慢性炎性肺病，主要表現(xiàn)為對(duì)氣流持續(xù)漸進(jìn)的限制。Wang Ziyan等人[19]利用香煙煙霧處理人支氣管上皮細(xì)胞系（BEAS-2B）和試驗(yàn)小鼠，研究用不同濃度的苦杏仁苷處理后BEAS-2B和小鼠的EMT水平。通過(guò)評(píng)估免疫組織的化學(xué)染色結(jié)果。利用ELISA，Western印跡法和實(shí)時(shí)PCR評(píng)價(jià)肺中TGF-β1，smad2/3和p-smad2/3的表達(dá)。與對(duì)照組相比，杏仁苷處理組E-cadherin表達(dá)明顯增強(qiáng)，波形蛋白，TGF-β1和磷酸化smad2/3（p-smad2/3）表達(dá)受到明顯抑制。結(jié)果表明，苦杏仁苷能夠?qū)OPD小鼠上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）過(guò)程起到保護(hù)作用，其抑制EMT的功效可能與其阻抑TGF-β1/smad通路活性相關(guān)[20]。關(guān)于苦杏仁苷治療COPD的研究?jī)H限于對(duì)于COPD過(guò)程中EMT過(guò)程的作用，其治療效果有待考證且缺乏對(duì)其機(jī)理的解釋。

苦杏仁苷還具有調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)、治療肝細(xì)胞纖維化、腎細(xì)胞纖維化和殺蟲(chóng)等功效[21]，苦杏仁苷還具備潛在的抑制胰脂肪酶[22]、潤(rùn)腸通便的作用。目前，苦杏仁苷功效的研究缺乏對(duì)苦杏仁苷的體內(nèi)轉(zhuǎn)化和毒副作用的考慮，限制了其應(yīng)用價(jià)值。此外，由于部分生理功能存在爭(zhēng)議且缺乏臨床試驗(yàn)，導(dǎo)致苦杏仁苷沒(méi)有得到充分利用，制約了我國(guó)苦杏仁產(chǎn)業(yè)的發(fā)展?？嘈尤受兆鳛楸＝∈称烽_(kāi)發(fā)利用還鮮有報(bào)道，其經(jīng)口服用后的保健效果也值得深入研究。

3 提取方法

苦杏仁苷雖具有良好的生理功能，但如何有效地從原料中獲取苦杏仁苷也是目前行業(yè)面臨的一個(gè)重要問(wèn)題。常見(jiàn)的方法有水提取法、乙醇提取法、超聲輔助提取、閃式提取、超臨界CO2流體萃取法等[23]。

從苦杏仁中提取苦杏仁苷，傳統(tǒng)利用熱水浸泡法[24]，此法需用大量沸水浸泡且耗時(shí)較長(zhǎng)，后續(xù)苦杏仁苷的回收富集也存在一定的問(wèn)題。使用一定濃度的酒精進(jìn)行多次浸泡能夠有效提取苦杏仁苷[25]，但操作繁復(fù)不利于實(shí)際應(yīng)用。對(duì)此法進(jìn)行改良后利用不同功率的超聲波輔助可以實(shí)現(xiàn)從不同原料中高效提取苦杏仁苷[26-28]。但是，超聲過(guò)程中苦杏仁苷可能會(huì)發(fā)生降解導(dǎo)致提取效果存在問(wèn)題，超聲波必須以水為介質(zhì)傳導(dǎo)的特性也不利于其大規(guī)模運(yùn)用，此外超聲設(shè)備價(jià)格高昂不利于控制生產(chǎn)成本。利用閃式提取法可以有效提取苦杏仁[29]、桃仁[30]當(dāng)中的苦杏仁苷，但在工業(yè)加工中，提取時(shí)間1 min參數(shù)如何實(shí)現(xiàn)值得商榷。此外，Kawahito Y等人[30]還研究了一種利用超臨界CO2法從枇杷種子中提取苦杏仁苷的方法，但是該方法成本較高、操作復(fù)雜不適合工業(yè)應(yīng)用?？傊?，超聲提取具備一定的優(yōu)勢(shì)，超聲過(guò)程中苦杏仁苷的降解和新設(shè)備的開(kāi)發(fā)是亟待解決的問(wèn)題，利用有機(jī)溶劑提取后也應(yīng)當(dāng)注意后續(xù)苦杏仁苷的富集和溶劑的回收。

4 苦杏仁苷的測(cè)定方法

查閱了大量有關(guān)苦杏仁苷測(cè)定的相關(guān)文獻(xiàn)，發(fā)現(xiàn)方法上均為液相色譜和液相色譜與質(zhì)譜、紫外分光光度計(jì)等偶聯(lián)。液相色譜最主要的作用是分離，通常苦杏仁苷的檢測(cè)中樣品均為復(fù)雜的混合物，而與液相色譜偶聯(lián)的各種儀器則起到定性和定量作用。選用液相色譜時(shí)，高效液相色譜具有明顯優(yōu)勢(shì)。

自2005年起，高效液相色譜法已經(jīng)成為了最為通用便捷且公認(rèn)的測(cè)定苦杏仁苷的方法[31]。鄒小娟等人[32]利用單因素試驗(yàn)，建立合適的高效液相色譜法測(cè)定方法并進(jìn)行方法學(xué)考查，然后與藥典2005年版的硝酸銀滴定法進(jìn)行比較試驗(yàn)。結(jié)果表明，HPLC法可代替滴定法，且相對(duì)于滴定法其具有靈敏度高、重復(fù)性好的優(yōu)勢(shì)。時(shí)至今日，高效液相色譜法在苦杏仁苷測(cè)定方法中的地位已經(jīng)不可動(dòng)搖，是試驗(yàn)研究的公認(rèn)選項(xiàng)。

高效液相色譜法，由于自動(dòng)化水平極高，通過(guò)相關(guān)程序即可完成對(duì)實(shí)驗(yàn)條件和檢測(cè)過(guò)程的設(shè)置，在測(cè)定時(shí)只需要保證儀器正常運(yùn)行。因此，忽略了儀器偶聯(lián)設(shè)備具體的不同及種類(lèi)，針對(duì)差異較大的樣品預(yù)處理方式和分離條件進(jìn)行展開(kāi)。其中，分離條件的選擇主要為色譜柱和流動(dòng)相的選擇，由于每個(gè)樣品都具有特殊性，不同的樣品往往可以通過(guò)查閱相關(guān)資料得到最佳的條件，而受試驗(yàn)條件的限制，一般可根據(jù)試驗(yàn)條件適當(dāng)改動(dòng)，對(duì)應(yīng)選擇。

往往相同類(lèi)型的樣品預(yù)處理方式相同，具有歸納的實(shí)際意義，且樣品的正確處理有利于檢測(cè)準(zhǔn)確性的提高。常見(jiàn)的樣品有食品、食品添加劑、藥品、血液及尿液等，將按照不同樣品預(yù)處理方式的區(qū)別來(lái)介紹苦杏仁苷測(cè)定的差異。

4.1 食品中苦杏仁苷的測(cè)定

食品樣品通常是用液相色譜與紫外檢測(cè)器連接，可以準(zhǔn)確地測(cè)定其中的苦杏仁苷含量，無(wú)需聯(lián)接更精密的檢測(cè)設(shè)備進(jìn)行測(cè)定。

對(duì)于固體樣品，包括種子、葉片等食品原料和相應(yīng)的含苦杏仁苷原料的加工產(chǎn)品，如桃仁、杏仁、枇杷葉、桃仁餅等，在測(cè)定之前均需要采用合適的處理方式富集苦杏仁苷，方便測(cè)定。對(duì)于不同類(lèi)型的樣品其處理方式有所差異，用HPLC法測(cè)定苦杏仁、桃仁、郁李仁等核仁類(lèi)樣品和蜜枇杷葉等莖葉類(lèi)樣品中苦杏仁苷的含量時(shí)[33-35]，樣品采用粉碎后超聲提取、甲醇連續(xù)回流提取或甲醇提取后離心的方式。其中，由于桃仁含油量較高，因此須先去除油脂后再超聲處理。

對(duì)于由相應(yīng)食品原料制成的液體樣品，如露露杏仁露，由于采用了脫苦杏仁，因此其產(chǎn)品不涉及苦杏仁苷含量的測(cè)定，而是利用苦杏仁苷的功效而開(kāi)發(fā)的保健飲品。

在食品中苦杏仁苷測(cè)定樣品的預(yù)處理過(guò)程，雖然甲醇提取可以避免苦杏仁苷水解，但是回流提取的方式可能會(huì)使樣品中的苦杏仁苷受熱分解，從而影響苦杏仁苷測(cè)定的準(zhǔn)確性。同時(shí)，果仁類(lèi)食品苦杏仁苷提取的過(guò)程中，酶未滅活，苦杏仁苷是否會(huì)發(fā)生酶解，致使測(cè)定結(jié)果偏低?？嘈尤受赵谟谔幚磉^(guò)程中是否會(huì)發(fā)生水解而影響測(cè)定結(jié)果的問(wèn)題，在食品中苦杏仁苷的測(cè)定研究過(guò)程中并未體現(xiàn)。

4.2 食品添加劑中苦杏仁苷的測(cè)定

因苦杏仁苷具有一定的防腐和保健作用，有時(shí)會(huì)作為一種食品添加劑加入食品中。這類(lèi)樣品的設(shè)備需求與食品類(lèi)似，與一般測(cè)定食品中苦杏仁苷含量的預(yù)處理相同，以甲醇為萃取劑進(jìn)行預(yù)處理，但不同食品添加劑中苦杏仁苷存在的形式多樣，不易分離。根據(jù)BoháováI等人[36]的研究，檢測(cè)器可使用二極管陣列檢測(cè)器，在分離時(shí)以具有C18官能團(tuán)的高穩(wěn)定硅基柱為固定相，可以相對(duì)準(zhǔn)確地測(cè)定各種天然食品添加劑中苦杏仁苷含量。

由于食品添加劑與食品中苦杏仁苷含量測(cè)定預(yù)處理基本一致，因此預(yù)處理時(shí)，苦杏仁苷是否會(huì)分解影響測(cè)定結(jié)果的問(wèn)題。

4.3 藥物中苦杏仁苷的測(cè)定

同食品類(lèi)似，藥品也包括一些干制原料或成品片狀粉末，主要分為固體和液體2類(lèi)；對(duì)應(yīng)的樣品制備方式類(lèi)似，測(cè)定方法也大致相同。測(cè)定固體顆粒藥品中苦杏仁苷時(shí)[37]，樣品處理采用混合均勻、研細(xì)、加甲醇或乙醇后超聲提取，再用甲醇或乙醇稀釋至刻度，搖勻過(guò)濾測(cè)定；測(cè)定液體藥品或粉末中苦杏仁苷含量時(shí)[38]，直接精密量取樣品并加入甲醇，經(jīng)超聲溶解后搖勻并用濾膜過(guò)濾；當(dāng)成分復(fù)雜、干擾較多或苦杏仁苷含量小時(shí)可先加入乙酸乙酯萃取[39]，取下層溶液置于蒸發(fā)皿中揮干，排除干擾后，再用乙醇或甲醇提取。

此處，提到了使用超聲提取、揮干等操作，富集苦杏仁苷后進(jìn)行測(cè)定，但苦杏仁苷在超聲及揮干過(guò)程存在降解問(wèn)題，影響測(cè)定結(jié)果。

4.4 血液、尿液中苦杏仁苷的測(cè)定

通常采用液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用的方式測(cè)定血液、尿液中的苦杏仁苷。測(cè)量血漿和尿液中苦杏仁苷時(shí)[40-41]，區(qū)別于其他樣品，常用乙腈或乙腈和甲醇混合作為提取劑，為充分萃取可采用離心等方式。

尿液作為代謝廢物排出體外，血液是體液的一部分，在運(yùn)輸和代謝過(guò)程中有重要的作用，兩者之間成分和組成存在較大的差異，但在預(yù)處理過(guò)程中并未體現(xiàn)，不同環(huán)境下苦杏仁苷的穩(wěn)定性不同，苦杏仁苷在體內(nèi)代謝過(guò)程中的代謝產(chǎn)物在血液和尿液中的存在形式及其對(duì)于人體的毒性也應(yīng)當(dāng)被考慮在內(nèi)。

5 結(jié)語(yǔ)

苦杏仁苷作為一種廣泛分布的天然活性成分，近年來(lái)無(wú)論在藥理作用還是食品加工研究方面，都得到了很多關(guān)注。與此同時(shí)，苦杏仁苷的提取、測(cè)定方法也得到了快速的發(fā)展。通過(guò)梳理文獻(xiàn)不難看出，對(duì)于苦杏仁苷的研究還存在以下幾方面的問(wèn)題：①苦杏仁苷的生物功能方面，目前較為明確的是其祛痰止咳作用，而對(duì)于其抗癌等功效目前還存在爭(zhēng)議，其抗癌機(jī)理大多不明確，而且大部分研究仍處于實(shí)驗(yàn)室階段，離商業(yè)化應(yīng)用還有距離；苦杏仁苷是否還有其他新的功能也不得而知。②苦杏仁苷的提取問(wèn)題，目前多集中在追求提取效率的提升，而對(duì)于專(zhuān)用提取裝備鮮有報(bào)道；同時(shí)，苦杏仁苷在提

取過(guò)程中是否存在分解及如何科學(xué)調(diào)控降低其分解也是不容忽視的問(wèn)題。③苦杏仁苷的測(cè)定方面，由于苦杏仁苷容易在酶或水的作用下降解，而在測(cè)定分析時(shí)樣品的前處理是否會(huì)影響其降解，最終影響所測(cè)苦杏仁苷的含量，這些問(wèn)題目前也尚未引起關(guān)注。④將苦杏仁苷作為食品資源開(kāi)發(fā)，目前在市場(chǎng)上仍然較少，需要進(jìn)一步探索。但是，在開(kāi)發(fā)利用的同時(shí)，應(yīng)當(dāng)注意過(guò)量苦杏仁苷的毒性，做到科學(xué)合理地發(fā)揮其功效。上述問(wèn)題都是今后在苦杏仁苷及其相關(guān)產(chǎn)品研究中需要關(guān)注的重要領(lǐng)域。