陳 琨，黃 灣，廖永山，楊創(chuàng)業(yè),3，王慶恒,3

（1.廣東海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院// 2.廣東海洋大學(xué)珍珠研究所// 3.廣東省海水養(yǎng)殖生物育種工程實(shí)驗(yàn)室,廣東 湛江 524088）

腸道微生物是動(dòng)物體內(nèi)最重要微生物群落[1-2]，在宿主生長(zhǎng)發(fā)育、消化吸收和免疫等生理活動(dòng)中不可或缺[3-5]。近年來(lái)，以16S rRNA 基因序列分析為基礎(chǔ)的變性梯度凝膠電泳技術(shù)和高通量測(cè)序技術(shù)廣泛應(yīng)用于腸道菌群研究[6-8]。腸道菌群分泌的代謝產(chǎn)物中含多種酶，能參與多糖、氨基酸和外源性化學(xué)物質(zhì)的代謝，促進(jìn)宿主對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收[9]。腸道菌群能刺激腸道上皮細(xì)胞增殖，增強(qiáng)宿主的先天免疫應(yīng)答[10]。此外，腸道菌群失調(diào)會(huì)導(dǎo)致宿主發(fā)育減慢和免疫功能紊亂[11]。研究表明，水產(chǎn)動(dòng)物腸道菌群結(jié)構(gòu)的動(dòng)態(tài)平衡受自身生理狀態(tài)、飼料和水體環(huán)境等諸多因素影響[12-15]。養(yǎng)殖水體中含有大量微生物，消耗水體中的有機(jī)物，促進(jìn)物質(zhì)循環(huán)。王賢豐等[16]研究發(fā)現(xiàn)，水產(chǎn)動(dòng)物腸道菌群與其養(yǎng)殖環(huán)境菌群密切相關(guān)。當(dāng)環(huán)境惡化時(shí)，環(huán)境菌群生態(tài)平衡失調(diào)，病原菌就會(huì)大量繁殖，從而暴發(fā)細(xì)菌性疾病[17-18]。目前，關(guān)于水產(chǎn)動(dòng)物腸道及其養(yǎng)殖環(huán)境菌群結(jié)構(gòu)的研究主要集中于大菱鲆（Scophthalmus maximus）[19]、擬穴青蟹（Scylla paramamosain）[16]、刺參（Stichopus japonicus）[20]等。

馬氏珠母貝（Pinctada fucata martensii），隸屬于軟體動(dòng)物門、雙殼綱、珍珠貝目、珍珠貝科，在中國(guó)主要分布于廣東、廣西和海南三省沿海地區(qū)[21]，是主要海水育珠貝，具有很高經(jīng)濟(jì)價(jià)值。但隨著養(yǎng)殖密度和養(yǎng)殖規(guī)模擴(kuò)大，馬氏珠母貝的病害發(fā)生日益嚴(yán)重，同時(shí)自然災(zāi)害、環(huán)境污染、養(yǎng)殖容量等問(wèn)題也給馬氏珠母貝養(yǎng)殖造成不利影響。因此，分析馬氏珠母貝腸道及其養(yǎng)殖水體菌群結(jié)構(gòu)對(duì)馬氏珠母貝健康養(yǎng)殖具有重要意義。本實(shí)驗(yàn)室已利用高通量測(cè)序技術(shù)分析了不同蛋白源飼料對(duì)馬氏珠母貝腸道菌群結(jié)構(gòu)的影響[22]，而關(guān)于馬氏珠母貝腸道菌可培養(yǎng)細(xì)菌未見(jiàn)報(bào)道。

本研究分析海區(qū)養(yǎng)殖馬氏珠母貝腸道菌群與養(yǎng)殖水體菌群種類及豐度，以期為認(rèn)識(shí)馬氏珠母貝腸道菌群結(jié)構(gòu)、益生菌篩選和病害防治，構(gòu)建馬氏珠母貝生態(tài)健康養(yǎng)殖技術(shù)提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

馬氏珠母貝為2 齡貝，殼長(zhǎng)（62.3±6.1）mm，取自廣東雷州覃斗鎮(zhèn)后洪村養(yǎng)殖區(qū)，清洗表面附著物，同時(shí)采集養(yǎng)殖海區(qū)水樣放置于無(wú)菌采水瓶。所采集的樣品于冰盒中運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室。

1.2 方法

1.2.1 樣品處理 用體積分?jǐn)?shù)75%乙醇擦拭馬氏珠母貝體表，在超凈工作臺(tái)剖取腸道，無(wú)菌海水沖洗3 次后置于滅菌離心管中，加入1 mL 無(wú)菌海水作為勻漿液，用頻率為24 Hz 組織勻漿機(jī)對(duì)腸道樣品勻漿2 min，重復(fù)勻漿1 次，將勻漿液稀釋100倍后，取100 μL 涂布于2216 E 固體培養(yǎng)基上，28 ℃恒溫恒濕培養(yǎng)7 d 并統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)，根據(jù)活菌計(jì)數(shù)法計(jì)算樣品可培養(yǎng)細(xì)菌的數(shù)量。同時(shí)在每個(gè)梯度的平板上各隨機(jī)挑取50 個(gè)菌落，在2216E 固體培養(yǎng)基上劃線純化，將純化后菌株保存于2216E 斜面?zhèn)溆谩?/p>

養(yǎng)殖海區(qū)水樣在無(wú)菌環(huán)境中稀釋10 倍，取100 μL涂布于2216E固體培養(yǎng)基上，后續(xù)步驟同上。

1.2.2 細(xì)菌DNA的提取、PCR擴(kuò)增及序列測(cè)定 水浴法提取細(xì)菌DNA：用無(wú)菌牙簽蘸取少量劃線純化的單個(gè)菌落，混于裝有20 μL 滅菌ddH2O 的離心管中，置于沸水中水浴2 min 后，迅速置于冰上，使細(xì)胞裂解，釋放出DNA，-20 ℃保存?zhèn)溆?。?duì)于水浴法擴(kuò)增不出的菌株采用細(xì)菌基因組試劑盒（OMEGA）提取，詳細(xì)步驟參照說(shuō)明書進(jìn)行。以所提取的細(xì)菌DNA 作為模板，細(xì)菌通用引物[27F(5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′)和1492R (5′-GGTTACCTTGTTACGACTT-3′)]為擴(kuò)增引物，擴(kuò)增細(xì)菌16S rRNA 基因片段。PCR 反應(yīng)體系：基因組DNA 模板 (10～100 ng/μL) 0.5 μL，引物27F (20 pmol/L) 0.5 μL，引物1492R (20 pmol/L) 0.5 μL，10×PCR buffer 5.0 μL，dNTPs (2.5 mmol/L) 1 μL，rTaq DNA 聚合酶 (Takara 10 U/μL) 0.2 μL，補(bǔ)充ddH2O至50 μL。反應(yīng)條件：94 ℃ 5 min；94 ℃ 30 s；55 ℃30 s；72 ℃ 90 s，33～ 35 個(gè)循環(huán)；72 ℃ 10 min；4 ℃下保存。利用瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)PCR 產(chǎn)物是否符合目標(biāo)條帶，PCR 產(chǎn)物的測(cè)序由生工生物工程（上海）股份有限公司完成。

1.3 序列注釋

利用在線公共數(shù)據(jù)庫(kù) EzBiCloud（http://www.ezbiocloud.net/eztaxon）進(jìn)行各菌株序列的同源性比對(duì)，從比對(duì)結(jié)果中選取相似性最高的序列進(jìn)行注釋。

2 結(jié)果與分析

2.1 可培養(yǎng)細(xì)菌計(jì)數(shù)

馬氏珠母貝腸道勻漿液可培養(yǎng)細(xì)菌數(shù)量為1.72×105CFU·mL-1，其所在養(yǎng)殖水體中可培養(yǎng)細(xì)菌計(jì)數(shù)量為2.15×104CFU·mL-1，可見(jiàn)馬氏珠母貝腸道可培養(yǎng)細(xì)菌數(shù)量多于養(yǎng)殖海區(qū)水體可培養(yǎng)細(xì)菌。

2.2 各樣品細(xì)菌群落組成

從腸道和養(yǎng)殖水體獲得各150 個(gè)純化菌株，經(jīng)16S rRNA 基因擴(kuò)增和序列比對(duì)后表明，本次檢測(cè)中獲得所有菌株與數(shù)據(jù)庫(kù)中相關(guān)菌株的16S rRNA基因序列相似性為99%，歸屬于2 個(gè)門、3 個(gè)綱、7個(gè)目、10 個(gè)科、23 個(gè)屬、56 個(gè)種，腸道和水體樣品在不同分類水平上菌群組成存在較大差異（表1），腸道樣品在分類水平上所包含的種類少于養(yǎng)殖水體樣品。

表1 馬氏珠母貝腸道和養(yǎng)殖水體菌群基本構(gòu)成Table 1 Composition of bacterial communities in different samples

2.3 門和綱水平的細(xì)菌組成結(jié)構(gòu)分析

如表2 所示，馬氏珠母貝腸道樣品150 株細(xì)菌歸屬于2 門2 綱，即變形菌門Proteobacteria 的γ-變形菌綱 Gammaproteobacteria 和厚壁菌門Firmicute 的芽孢桿菌綱Bacilli。其中，變形菌門和γ-變形菌綱分別為優(yōu)勢(shì)門和優(yōu)勢(shì)綱，均占菌株總數(shù)的97.3%。

表2 馬氏珠母貝腸道和水體中菌群的組成比例（綱水平）Table 2 Proportion of microflora in the tract of Pinctada fucata martensii and the water (at class level)

養(yǎng)殖水體樣品150 株細(xì)菌同樣歸屬于變形菌門和厚壁菌門，兩者分別占菌株總數(shù)的91.3%和8.7%。與腸道菌群不同，水體樣品中變形菌門細(xì)菌由α-變形菌綱Alphaproteobacteria 和γ-變形菌綱組成，且前者為優(yōu)勢(shì)群體，占菌株總數(shù)的69.3%。γ-變形菌綱和厚壁菌門的芽孢桿菌綱分別占22.0%和8.7%。

2.4 目和科水平的細(xì)菌組成結(jié)構(gòu)分析

如圖1 所示，在目水平上，本研究獲得的馬氏珠母貝腸道可培養(yǎng)細(xì)菌分屬 4 目，即弧菌目Vibrionales、海洋螺菌目Oceanospirillales、交替單胞菌目Alteromonadales 和芽孢桿菌目Bacillales。其中，弧菌目為優(yōu)勢(shì)群體，占菌株總數(shù)的76.0%，其次為交替單胞菌目，為20.7%。

圖1 馬氏珠母貝腸道及其養(yǎng)殖水體培養(yǎng)細(xì)菌群落組成（目水平）Fig.1 Culturable bacterial community compositions in Pinctada fucata martensii and water (at order level)

在目的水平上，養(yǎng)殖水體中可培養(yǎng)細(xì)菌的生物多樣性明顯優(yōu)于腸道菌群，分屬于7 個(gè)目，分別為紅細(xì)菌目Rhodobacterales、弧菌目、芽孢桿菌目、海洋螺菌目、根瘤菌目Rhizobiales、交替單胞菌目和假單胞菌目Pseudomonadales。優(yōu)勢(shì)群體與腸道菌群也有明顯差異，數(shù)量最多的是紅細(xì)菌目，占菌株總數(shù)的68.0%，其次才是弧菌目，為18.0%。

如圖2，在科水平上，馬氏珠母貝腸道可培養(yǎng)細(xì)菌分屬5 科，即弧菌科Vibrionaceae、假交替單胞菌科 Pseudoalteromonadaceae、希瓦氏菌科Shewanellaceae、鹽單胞菌科Halomonadaceae 和芽孢桿菌科Bacillaceae。其中，弧菌科為優(yōu)勢(shì)菌科，占菌株總數(shù)的76.0%，其次為假交替單胞菌科，為18.7%。

圖2 馬氏珠母貝腸道及其養(yǎng)殖水體可培養(yǎng)細(xì)菌群落組成（科水平）Fig.2 Culturable bacterial community compositions in Pinctada fucata martensii and water (at family level)

養(yǎng)殖水體中可培養(yǎng)細(xì)菌的科數(shù)量多于腸道樣品，共有 9 個(gè)科，主要菌科為紅桿菌科Rhodobacteraceae（68.0%）、弧菌科Vibrionaceae（18.0%）、芽孢桿菌科Bacillaceae（8.7%），優(yōu)勢(shì)菌科與腸道樣品菌群也存在明顯差異。

2.5 屬水平的細(xì)菌組成結(jié)構(gòu)分析

本研究從馬氏珠母貝腸道和養(yǎng)殖水體分離的可培養(yǎng)細(xì)菌分屬23 屬。其中，4 個(gè)屬為二者共有；2 個(gè)屬為馬氏珠母貝腸道特有菌；17 個(gè)屬僅從養(yǎng)殖水體中分離獲得（表3）。

表3 馬氏珠母貝腸道及其養(yǎng)殖水體共有、特有細(xì)菌的群落組成（屬水平）Table 3 Culturable bacterial community in Pinctada fucata martensii and water (in genes)

在數(shù)量組成上，二者有明顯差異。其中，馬氏珠母貝腸道菌群的優(yōu)勢(shì)屬分別為弧菌屬Vibrio（74.7%）、假交替單胞菌屬Pseudoalteromonas（18.7%）、芽孢桿菌屬Bacillus（2.7%）和希瓦氏菌屬Shewanella（2.0%）；養(yǎng)殖水體的菌群的優(yōu)勢(shì)屬分別為α-變形菌綱的FJ943236_g屬（40.7%）、弧菌屬（16.7%）、魯杰氏菌屬Ruegeria（6.7%）和芽孢桿菌屬（5.3%）。

2.6 種水平的細(xì)菌組成結(jié)構(gòu)分析

本實(shí)驗(yàn)從馬氏珠母貝腸道及其養(yǎng)殖水體中共分離出可培養(yǎng)細(xì)菌56 種。其中有7 個(gè)種為2 個(gè)樣品共有；18 個(gè)種為馬氏珠母貝腸道特異性菌株；有31 個(gè)種僅從養(yǎng)殖水體種分離出來(lái)（表4）。

表4 馬氏珠母貝及其養(yǎng)殖水體可培養(yǎng)細(xì)菌的群落組成（種水平）Table 4 Culturable bacterial community in Pinctada fucata martensii and water (in species)

馬氏珠母貝腸道種γ-變形菌綱的弧菌占較大比例 (74.7%)，其中主要弧菌為新喀里多尼亞弧菌Vibrio neocaledonicus、強(qiáng)壯弧菌Vibrio fortis和坎氏弧菌Vibrio campbellii。而養(yǎng)殖水體種占優(yōu)勢(shì)的菌種為α-變形菌綱的FJ943236_s(40.7%)。

3 討論

馬氏珠母貝腸道勻漿液可培養(yǎng)細(xì)菌數(shù)量為1.72×105CFU·mL-1，大于其所在養(yǎng)殖水體2.15×104CFU·mL-1，這與其他貝類研究結(jié)果類似，例如紫扇貝幼體中可培養(yǎng)細(xì)菌數(shù)量比其養(yǎng)殖水體細(xì)菌大4 個(gè)數(shù)量級(jí)[23]。初步推測(cè)貝類可富集其周圍環(huán)境微生物，這可能與宿主為腸道菌群提供所需的生境及營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有關(guān)[24]；支持了之前學(xué)者研究結(jié)果：水產(chǎn)動(dòng)物腸道是許多細(xì)菌，包括致病菌的“儲(chǔ)藏基地”[25]。

本研究分離獲得馬氏珠母貝腸道和養(yǎng)殖區(qū)海水中的可培養(yǎng)細(xì)菌分別為25 種和38 種，均隸屬于變形菌門和厚壁菌門，其中變形菌門占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)，相對(duì)豐度為分別為97.3%和91.3%。Liao 等[22]利用高通量測(cè)序研究發(fā)現(xiàn)，變形菌門和厚壁菌門是馬氏珠母貝腸道中的優(yōu)勢(shì)菌門，其相對(duì)豐度分別為52.7%和23.2%。孫雪瑩[26]研究發(fā)現(xiàn)，扇貝幼體不同發(fā)育時(shí)期及其育苗池水體中優(yōu)勢(shì)菌為變形菌門，其次為厚壁菌門。大扇貝（Pecten maximus）[27]、蝦夷扇貝（Patinopecten yessoensis）[28]和牡蠣（Crassostrea gigas）[17]養(yǎng)殖水體優(yōu)勢(shì)門也為變形菌門。通過(guò)高通量焦磷酸測(cè)序研究3 種牡蠣樣品細(xì)菌組成發(fā)現(xiàn)，主要優(yōu)勢(shì)菌均為變形菌門[29]。由此可見(jiàn)，海洋貝類細(xì)菌組成在門水平上存在極大相似性，變形菌門是貝類的常見(jiàn)細(xì)菌門類，其在不同貝類腸道中發(fā)揮的作用有待進(jìn)一步研究。

本研究顯示，馬氏珠母貝腸道可培養(yǎng)菌的優(yōu)勢(shì)綱為γ-變形菌綱，芽孢桿菌綱其次。這與李明等[30]從蝦夷扇貝分離的150 株細(xì)菌結(jié)果類似。Schulze等[31]運(yùn)用DGGE 方法研究雙殼貝類細(xì)菌群落組成發(fā)現(xiàn)，γ-變形菌綱是牡蠣成體、花斑鮑（Haliotis kamtschatkana）幼體、菲律賓蛤仔（Venerupis philippinarum）成體、太平洋潛泥蛤（Panopea abrupta）成體、蝦夷扇貝成體的優(yōu)勢(shì)菌綱。本研究中，馬氏珠母貝養(yǎng)殖海區(qū)可培養(yǎng)菌的優(yōu)勢(shì)綱為α-變形菌綱、γ-變形菌綱和芽孢桿菌綱，該結(jié)果與蝦夷扇貝、紫扇貝（Argopecten purpuratus）養(yǎng)殖水體相關(guān)細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)一致[23,26]，γ-變形菌綱也是大扇貝幼體培育水體的主要細(xì)菌[32]。α-變形菌綱為大扇貝、太平洋牡蠣養(yǎng)殖海水中的第一優(yōu)勢(shì)綱[17,27]。

屬水平上，本研究共獲得馬氏珠母貝腸道可培養(yǎng)細(xì)菌6 個(gè)屬，主要優(yōu)勢(shì)屬為弧菌屬和假交替單胞菌屬，分別占菌株總數(shù)74.7%和18.7%。Liao 等[22]通過(guò)高通量測(cè)序發(fā)現(xiàn)馬氏珠母貝腸道細(xì)菌多樣性豐富，其中未知細(xì)菌相對(duì)豐度為15.6%，主要可鑒定屬為支原體屬M(fèi)ycoplasma（14.0%）、乳球菌屬Lactococcus（10.9%）、假單胞菌屬Pseudomonas（9.4%）和弧菌屬（6.1%）。研究表明，弧菌屬和假交替單胞菌屬也是蝦夷扇貝和紫扇貝腸道細(xì)菌的優(yōu)勢(shì)屬[23,26]。Najiah 等[33]研究發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)牡蠣可培養(yǎng)細(xì)菌的優(yōu)勢(shì)屬為假單胞菌屬和弧菌屬，而在熱帶牡蠣（C.iredalei）中，希瓦氏菌屬和弧菌屬是優(yōu)勢(shì)菌。香港巨牡蠣（C.hongkongensis）的相關(guān)研究同樣發(fā)現(xiàn)了假交替單胞菌屬、弧菌屬、鹽單胞菌屬、希瓦氏菌屬和芽孢桿菌屬為其成體可培養(yǎng)細(xì)菌的重要屬類[34]。這些研究進(jìn)一步表明，雙殼類的腸道可培養(yǎng)菌具有相似性。在養(yǎng)殖水體方面，本研究獲得的可培養(yǎng)菌第一優(yōu)勢(shì)屬為α-變形菌綱的FJ943236_g屬，弧菌屬為第二優(yōu)勢(shì)屬?；【鷮俸图俳惶鎲伟鷮僭鴱陌ㄎr夷扇貝、大扇貝在內(nèi)的魚和貝類養(yǎng)殖水體中分離出來(lái)[31]。另外，地中海牡蠣養(yǎng)殖水體存在假交替單胞菌屬和希瓦氏菌屬[35]。弧菌屬、假交替單胞菌屬和希瓦氏菌屬是歐洲牡蠣成體及養(yǎng)殖水體可培養(yǎng)細(xì)菌的優(yōu)勢(shì)菌[36]。

腸道和養(yǎng)殖水體中共有菌有芽孢桿菌屬、假交替單胞菌屬、發(fā)光桿菌屬和弧菌屬。芽孢桿菌屬隸屬厚壁菌門、芽孢桿菌綱，是養(yǎng)殖貝類和養(yǎng)殖水體中常見(jiàn)微生物類群。芽孢桿菌能改善水產(chǎn)動(dòng)物腸道菌群結(jié)構(gòu)，增加有益菌數(shù)量，抑制病原菌繁殖，從而增強(qiáng)腸道消化酶活性和免疫力，進(jìn)而提高宿主生長(zhǎng)[37]，是目前常用微生態(tài)制劑[38]。假交替單胞菌屬、發(fā)光桿菌屬和弧菌屬都隸屬變形菌門、γ-變形菌綱。Aranda 等[39]研究發(fā)現(xiàn)，假交替單胞菌DIT09、DIT44和DIT46 菌株對(duì)副溶血弧菌有較強(qiáng)的抑制效果，可作為新型抑菌劑。同樣Kesarcodi-Watson 等[40]研究發(fā)現(xiàn)D41 菌株對(duì)燦爛弧菌有抑制效果，可以提高太平洋牡蠣的存活率。而Torkildsen 等[41]研究發(fā)現(xiàn)大扇貝幼體感染假交替單胞菌LT13 菌株后，死亡率高達(dá)67%。這些細(xì)菌對(duì)馬氏珠母貝的作用還有待進(jìn)一步研究，有望從中篩選出馬氏珠母貝特異性益生菌。

弧菌屬是2 個(gè)樣品共有的優(yōu)勢(shì)菌，該屬細(xì)菌分布廣、種類多，在水產(chǎn)動(dòng)物腸道及海水中常見(jiàn)，許多成員被認(rèn)為是條件致病菌，能夠引起魚類、蝦類和貝類的致病和死亡[42]。本實(shí)驗(yàn)中，馬氏珠母貝腸道及其養(yǎng)殖水體中共有弧菌屬的成員有坎氏弧菌Vibrio campbellii、哈氏弧菌V.harveyi和新喀里多尼亞弧菌V.neocaledonicus。其中哈氏弧菌是水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物的重要條件致病菌，常常能夠?qū)е滤a(chǎn)動(dòng)物在養(yǎng)殖過(guò)程中大量死亡[42]。研究發(fā)現(xiàn)，弧菌是扇貝幼體的主要致病菌[41]，Liu 等[35]從患病蝦夷扇貝中分離出燦爛弧菌，感染實(shí)驗(yàn)證明此菌能使蝦夷扇貝幼體大量死亡。

希瓦氏菌屬和鹽單胞菌屬是腸道樣品的特異性細(xì)菌，希瓦氏菌屬在很多水生動(dòng)物體內(nèi)均有發(fā)現(xiàn)，該菌屬對(duì)不同魚蝦的致病菌，如副溶血弧菌和哈維弧菌具有拮抗活性[43-44]。馬氏珠母貝腸道特有菌的來(lái)源及希瓦氏菌屬對(duì)腸道致病菌是否具有拮抗活性等還有待進(jìn)一步研究。

本研究共獲得馬氏珠母貝腸道可培養(yǎng)細(xì)菌25種，隸屬于2 個(gè)門、2 個(gè)綱、4 個(gè)目、5 個(gè)科和6 個(gè)屬。課題組前期利用高通量測(cè)序研究發(fā)現(xiàn)馬氏珠母貝腸道內(nèi)共有932 種細(xì)菌，隸屬于26 個(gè)門、53 個(gè)綱、83 目、143 個(gè)科和219 個(gè)屬[22]。研究方法的顯著差異是造成研究結(jié)果不完全一致的主要原因?；诟咄繙y(cè)序的宏基因組分析能獲得樣品中全部細(xì)菌基因組信息，進(jìn)而還能對(duì)細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)及其代謝功能進(jìn)行分析；基于分離培養(yǎng)技術(shù)開(kāi)展菌群分析僅能獲得可培養(yǎng)細(xì)菌的信息，但可以從中篩選、純化專性益生菌，為開(kāi)發(fā)生態(tài)健康養(yǎng)殖技術(shù)積累基礎(chǔ)資料。

4 結(jié)論

馬氏珠母貝腸道及其養(yǎng)殖海區(qū)水體可培養(yǎng)細(xì)菌均隸屬于變形菌門和厚壁菌門，但門以下階元尤其是屬、種水平差異明顯。馬氏珠母貝腸道中的芽孢桿菌屬、弧菌屬和假交替單胞菌屬的菌株具有作為益生菌開(kāi)發(fā)應(yīng)用的潛力。