廖金玲，黃文興，張丹璇，黎厶嘉，張海英，劉靜

柳州市中醫(yī)醫(yī)院，廣西柳州 545001

非酒精性脂肪性肝?。╪on－alcoholic fatty liver disease，NAFLD）是以彌漫性肝細胞大泡性脂肪病變?yōu)橹饕卣鳎页饩凭推渌鞔_肝損害因素所致的臨床病理綜合征，其疾病譜包括非酒精性單純性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎及其相關肝硬變和肝細胞癌［1］。據(jù)相關調(diào)查顯示，NAFLD的全球發(fā)病率約為24%，其中南美＞中東＞亞洲＞美國＞歐洲，且其發(fā)病率與肥胖2型糖尿病的發(fā)病率呈正相關［2］。該病嚴重影響人們的生活質(zhì)量，目前該病的治療方法仍然以單純低熱量飲食、運動療法、減肥手術以及藥物治療，但實際上應用于臨床NAFLD治療的藥物較少［3］。中醫(yī)藥對NAFLD的治療有優(yōu)勢，穴位埋線治療NAFLD療效被肯定，但目前作用機制尚未明確，并未能促進推廣應用。因此，本實驗觀察溫脾化濕法穴位埋線治療NAFLD大鼠，旨在闡明穴位埋線治療NAFLD的作用機制，實驗報道如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物雄性SD大鼠30只，SPF級，合格證號：SCXK桂（2014－0002），體質(zhì)量180～200 g，由廣西醫(yī)科大學動物實驗中心提供。

1.2 試劑及儀器ALT試劑盒（中生北控生物科技股份有限公司，批號20180208）；AST試劑盒（中生北控生物科技股份有限公司，批號20180306）；TG試劑盒（中生北控生物科技股份有限公司，批號20180506）；TC試劑盒（中生北控生物科技股份有限公司，批號20180709）；RBP4酶聯(lián)免疫試劑盒（南京建成生物有限公司，批號20170218）。普通飼料和高脂飼料（含87.7%普通飼料＋2%膽固醇＋0.3%膽酸鈉＋10%豬油）均購自廣西醫(yī)科大學動物實驗中心。7170S型全自動生化分析儀（日本日立公司）。

1.3 動物分組與造模大鼠適應性喂養(yǎng)1周后，隨機分為對照組、模型組、埋線組3組，每組10只。模型組、埋線組給予高脂飼料喂養(yǎng)8周復制NAFLD大鼠模型，對照組給予普通飼料喂養(yǎng)，均自由飲水。

1.4 穴位埋線治療方法根據(jù)溫脾化濕治則，埋線組取肺俞、肝俞、脾俞、天樞、關元、中脘，按華興邦等［4］研制的大鼠穴位圖譜定位，埋線時間選擇在上午9時至11時之間，將大鼠置于特制固定器中，取以上穴位，3-0號線穿進7號注射針頭內(nèi)，將針頭刺入穴位，直刺約5 mm，提插得氣后，用特制平頭針芯抵住羊腸線，緩慢退出注射針頭，將羊腸線留在穴內(nèi)。每7日1次，治療8周，每周三上午稱體質(zhì)量，根據(jù)體質(zhì)量上升或下降調(diào)整所埋羊腸線的長短。模型組大鼠亦置入固定器中15 min，但不進行治療。

1.5 觀察指標一般情況：測體質(zhì)量及肝濕質(zhì)量，計算肝臟質(zhì)量指數(shù)（每100 g體質(zhì)量的肝臟濕質(zhì)量）。三組大鼠均在治療結束后隔夜禁食12 h，稱體質(zhì)量，以體積分數(shù)10%水合氯醛按1 mg·kg－1腹腔麻醉大鼠，迅速開腹，暴露肝臟，肉眼觀察肝臟情況，取腹主動脈血，0.5 h內(nèi)離心取血清待檢。肝功能、血脂測定：使用日本7170S型全自動生化分析儀測定肝功能指標［谷丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（alanine aminotransfease，ALT）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（aspartate aminotransferase，AST）］及血脂情況［三酰甘油（triglyceride，TG）、總膽固醇（triglyceride，TC）］。ELISA法檢測大鼠血清視黃醇結合蛋白4（retinol binding protein，RBP4）水平。

1.6 統(tǒng)計學方法應用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件。計量資料以均數(shù)±標準差表示，組間比較采用單因素方差分析及LSD檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 各組大鼠體質(zhì)量、肝臟濕質(zhì)量和肝臟質(zhì)量指數(shù)比較與對照組比較，模型組大鼠體質(zhì)量、肝臟濕質(zhì)量和肝臟質(zhì)量指數(shù)均顯著升高（P＜0.01）；與模型組比較，埋線組大鼠體質(zhì)量、肝臟濕質(zhì)量顯著下降（P＜0.01），肝臟質(zhì)量指數(shù)明顯下降（P＜0.05）。見表1。

2.2 各組大鼠血清學指標比較與對照組比較，模型組大鼠血清ALT、AST、TG、TC顯著升高（P＜0.01）；與模型組比較，埋線組大鼠ALT、AST、TG、TC顯著下降（P＜0.01）。見表2。

表1 各組大鼠體質(zhì)量、肝臟濕質(zhì)量和肝臟質(zhì)量指數(shù)比較

表1 各組大鼠體質(zhì)量、肝臟濕質(zhì)量和肝臟質(zhì)量指數(shù)比較

注：與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01

組別 n 體質(zhì)量（m／g） 肝臟濕質(zhì)量（m／g） 肝臟質(zhì)量指數(shù)／%對照組 10 469.00±6.96** 14.01±1.13** 2.79±0.09**模型組 10 515.70±8.50 18.94±1.27 3.62±0.21埋線組 10 491.97±11.94** 17.00±0.92** 3.39±0.40*

表2 各組大鼠血清學指標比較

表2 各組大鼠血清學指標比較

注：與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01

組別 n ALT／U·L－1 AST／U·L－1 TG（c／mmol·L－1） TC（c／mmol·L－1）對照組 10 72.65±4.08** 177.40±15.38** 0.41±0.43** 1.71±0.10**模型組 10 129.10±5.92 274.40±16.85 0.80±0.08 3.92±0.30埋線組 10 85.30±8.64** 224.90±14.15** 0.56±0.22** 2.86±0.45**

2.3 各組大鼠血清RBP4水平比較與對照組比較，模型組大鼠血清RBP4水平顯著升高；與模型組比較，埋線組RBP4水平顯著降低（P＜0.01）。見表3。

表3 各組大鼠血清RBP4水平比較

表3 各組大鼠血清RBP4水平比較

注：與模型組比較，**P＜0.01

組別 n RBP4對照組 10 35.52±0.34**模型組 10 74.35±1.03埋線組 10 50.72±0.48**

3 討論

筆者從陰陽關系出發(fā)，認為NAFLD發(fā)病的主要病機是“陽化氣不足，陰成形太過”導致陰陽失調(diào)、陽虛陰盛。臟腑之陽化氣不足，則體內(nèi)有形之痰、濕、瘀沉積，形成病理下的“陰成形”的狀態(tài)，反過來又進一步困遏陽氣，諸邪阻滯不通，堆積于肝，郁久化熱、化毒，以致肝體受損，肝之疏泄、藏血功能失職，導致肝內(nèi)血液循環(huán)紊亂，肝臟疏泄功能發(fā)生障礙，出現(xiàn)肝臟系統(tǒng)疾病。陰成形太過，則體內(nèi)陰寒偏盛，脾陽不振，運化失職，氣化不利，痰濕邪氣停聚，郁滯于肝內(nèi)，郁久亦可化熱、化瘀、化毒，導致肝體受損，以致出現(xiàn)肝臟內(nèi)脂肪變性，假小葉形成，肝內(nèi)結構紊亂等情況。由以上理論，我們團隊探索出“溫脾化濕”法穴位埋線治療NAFLD。穴位埋線是針對NAFLD的一種行之有效的中醫(yī)治療方法，取“久病則深納久留之”的長效刺激之意，具有疏通經(jīng)絡、調(diào)和陰陽、扶正祛邪的作用。龔秀杭等［5］應用穴位埋線治療后大鼠非酒精性脂肪肝，大鼠肝組織脂肪變和炎癥程度明顯減輕，肝組織TG、CHOL水平明顯下降，血清ALT、AST及TNF－α水平明顯降低。胡林等［6］通過治療非酒精性脂肪肝后發(fā)現(xiàn)穴位埋線能升高脂聯(lián)素含量而降低TNF－α水平，改善肝組織脂肪變性程度，降低血清TC、TG、ALT、AST水平。我們團隊前期實驗發(fā)現(xiàn)穴位埋線可抑制NAFLD大鼠SREBP－1的表達，對大鼠高脂飲食誘導的NAFLD有防治作用［7］?；凇皽仄⒒瘽瘛狈?，選取肺俞、肝俞、脾俞、天樞、關元、中脘等穴位進行埋線治療?？v觀全方，前后配穴，從陽引陰、從陰引陽，溫陽健脾，化濕理氣，通降腑氣，通暢全身氣機，調(diào)和氣血陰陽，氣血暢則濕邪無以化生，諸穴合用共奏溫陽健脾、化濕理氣之效。在埋線時間的選擇上均以巳時（上午9至11時）為主，根據(jù)子午流注經(jīng)氣流動的規(guī)律，此時乃脾經(jīng)當令，同時又是陽氣旺盛的時期，通過借助大自然之力，以獲得同氣相求之目的，以此培補人體脾土之陽氣，以達溫陽化氣之功，消除肝臟之痰、濕、熱之瘀積。

Yang等［8］發(fā)現(xiàn)RBP4是視黃醇類結合蛋白之一，主要由肝細胞合成，其次為脂肪組織合成，并發(fā)現(xiàn)血清中RBP4升高與肥胖和胰島素抵抗有關，且RBP4水平越高，血糖水平越高。有研究表明，NAFLD患者RBP4水平顯著高于正常人［9］，也有研究發(fā)現(xiàn)，血清RBP4水平與NAFLD及肝臟轉(zhuǎn)氨酶呈正相關［10］；徐慧等［11］研究發(fā)現(xiàn)，RBP4在肝臟脂肪變性中呈高表達趨勢。由此，人們對于降低血清RBP4水平是否有利于NAFLD的轉(zhuǎn)歸做了大量的研究。有研究發(fā)現(xiàn)，對NAFLD者進行16周有氧運動干預后，RBP4水平降低，緩解胰島素抵抗，可以改善脂代謝紊亂［12］；譚婷等［13］也發(fā)現(xiàn)，茵陳五苓散可通過調(diào)節(jié)大鼠RBP4的表達水平，改善脂代謝，減緩脂肪變性程度，從而抑制脂質(zhì)過氧化反應和減少細胞變性，進而保護肝組織。本實驗結果證明，溫脾化濕法穴位埋線可以有效降低NAFLD大鼠血清異常升高的ALT、AST、TG、TC 及RBP4水平，對NAFLD有治療作用，但埋線組與對照組仍有明顯差異，這是否與療程不足或其他因素有關，有待進一步研究。