王海燕,楊小羅,熊志高

(株洲市中心血站,湖南 株洲412007)

隨著臨床輸血技術(shù)的迅速發(fā)展,單采血小板、濃縮血小板的制備技術(shù)取得了長足的進(jìn)步.我國的單采血小板由于使用單采血細(xì)胞分離機(jī)及血袋,和國際先進(jìn)水平基本保持了同步[1].單采血小板因其濃縮高、純度大、臨床輸注效果好、白細(xì)胞污染少、不良反應(yīng)少等優(yōu)點(diǎn)被廣泛應(yīng)用于臨床.傳統(tǒng)手工方法制備的血小板人工操作的誤差較大,血小板回收率不高,質(zhì)量不穩(wěn)定,在臨床應(yīng)用上也因具有多人輸注風(fēng)險(xiǎn)而不被接受.結(jié)果,一方面臨床上機(jī)采血小板供不應(yīng)求,另一方面無償獻(xiàn)血全血中寶貴的血小板資源被大量浪費(fèi).因此,改進(jìn)濃縮血小板的制備方法對于緩解目前血小板供需矛盾具有重要意義.

1 材料與方法

1.1 血液

隨機(jī)抽取120 袋6 h 內(nèi)采集22 ±2 ℃保存運(yùn)輸?shù)?00 mL 全血,隨機(jī)分成對照組和靜置組A、B、C 共4 組,每組各30 袋.

1.2 設(shè)備與血袋

大容量離心機(jī)(德國Thermo CRYOFUGE 16)、全自動(dòng)血液成分分離機(jī)(德國Compomat G5)、血小板恒溫保存箱(去除振蕩,中科都菱MDC-10PE)、全自動(dòng)血液分析儀(日本XS-800i)、PT-Q-400 全血六聯(lián)血袋(山東威高).

1.3 制備方法與分組

(1)白膜法(對照組)

①全血離心:400 mL 于6 h 內(nèi)采集22 ±2 ℃保存和運(yùn)輸?shù)牧?lián)袋全血,以1993 g、16 min、22 ℃、加速7、減速4 離心.②分離白膜:離心后將血液懸掛于血液成分分離機(jī)上,選擇相應(yīng)分離程序,分離出白膜三聯(lián)袋.③白膜離心:將白膜單袋用自制模板平整裝杯并用其它聯(lián)袋和塑料軟片適當(dāng)填充以避免袋體產(chǎn)生褶皺,以163 g、10 min、22 ℃、加速7、減速4 離心.④分離血小板:離心后將白膜袋懸掛于血液成分分離機(jī)上,選擇相應(yīng)分離程序,分離出濃縮血小板,核對重量后取下血袋.

(2)新改良白膜法(靜置組)

三種靜置方法均使用與白膜法相同的離心方法:將全血以1993 g、16 min、22℃、加速7、減速4 離心分離出白膜;將白膜以163 g、10 min、22 ℃、加速7、減速4 離心分離岀血小板,具體操作方法與白膜法相同.①靜置組A:先將全血置22 ± 2℃血小板恒溫保存箱靜置2 h,然后按白膜法離心分離制備血小板.②靜置組B:先將全血按白膜法離心分離出白膜三聯(lián)袋,然后將白膜三聯(lián)袋置22 ±2 ℃血小板恒溫保存箱靜置2 h,再以同樣方法離心白膜袋分離岀血小板.③靜置組C:將全血置22 ±2 ℃血小板恒溫保存箱靜置2 h,按白膜法離心分離出白膜三聯(lián)袋,再將白膜三聯(lián)袋置22 ±2 ℃血小板恒溫保存箱靜置2 h 以上,然后用同樣方法離心分離出濃縮血小板.

1.4 指標(biāo)檢測

將血小板充分混勻后留取2 mL 標(biāo)本,用XS-800i 全自動(dòng)血液分析儀做血常規(guī)計(jì)數(shù),檢測血小板計(jì)數(shù);稱量血小板重量,折算血小板容量.

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)均用SPSS17.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,采用單因素方差分析,以p＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.

2 結(jié)果

四組分離方法制備的手工濃縮血小板中的血小板容量、濃度、含量等見表1～4.對照組和靜置組A、B、C的濃縮血小板均數(shù)見表5.應(yīng)用新改良白膜法制備的濃縮血小板,各項(xiàng)質(zhì)控指標(biāo)均能達(dá)到全血及成分血質(zhì)量要求(國標(biāo)GB18469-2012).靜置組三組的血小板計(jì)數(shù)均較對照組的計(jì)數(shù)高.其中將全血和白膜均靜置的C 組血小板計(jì)數(shù)最高.靜置組C 組與其他組的均數(shù)差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05).

表1 白膜法對照組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

表2 新改良白膜法靜置組A 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

表3 新改良白膜法靜置組B 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

表4 新改良白膜法靜置組C 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

表5 不同方法制備濃縮血小板的質(zhì)量控制結(jié)果(± s,n＝30)

表5 不同方法制備濃縮血小板的質(zhì)量控制結(jié)果(± s,n＝30)

制備方法 血小板計(jì)數(shù)(×1010／袋)白膜法對照組 3.99 ± 0.97新改良白膜法靜置組A 4.13 ± 0.83新改良白膜法靜置組B 4.26 ± 0.80新改良白膜法靜置組C 4.98 ± 1.20

3 討論

手工分離血小板的質(zhì)量,除了與制備方法有關(guān)外,還受多種因素影響[2],如全血獻(xiàn)血者個(gè)體因素、血液運(yùn)輸及儲存的條件和溫度、血液離心及分離的設(shè)備和方法等.株洲市中心血站自1996年開展?jié)饪s血小板制備以來,在實(shí)際工作中不斷摸索總結(jié),于2002年采用400mL 全血富漿法分離制備濃縮血小板[3].2018年起,將改良白膜法[4]改進(jìn)成新改良白膜法,簡化了離心分離步驟,增加了全血及白膜恒溫靜置環(huán)節(jié),使用全自動(dòng)血液成分分離機(jī)制備濃縮血小板,進(jìn)一步提升了手工制備濃縮血小板的質(zhì)量,并將多袋濃縮血小板匯集后再進(jìn)行去白細(xì)胞過濾,制備成混合濃縮血小板.

本文中四種方法制備的血小板,均在采血當(dāng)日分離出白膜.靜置組A 是參照文[5]的研究,先將全血22 ±2 ℃恒溫靜置2 h,充分發(fā)揮全血中白細(xì)胞吞噬細(xì)菌的作用,分離出富含血小板的白膜,提高血小板計(jì)數(shù)及質(zhì)量.靜置組B 依據(jù)文[6]的研究,將白膜室溫靜置2 h,使白膜里的血小板和白細(xì)胞形成微聚體解聚,分離制備的濃縮血小板回收率更高.朱仕清[7]等探討用新白膜法制備濃縮血小板,研究出將白膜放置12 h及26 h 制備的濃縮血小板,其含量也超過國家標(biāo)準(zhǔn).靜置組C 嘗試綜合利用全血靜置和白膜靜置研究結(jié)果,參照新白膜法和改良白膜法,實(shí)驗(yàn)過程中將全血置22 ±2 ℃恒溫保存箱靜置1～2h,分離出白膜后將白膜以同樣條件恒溫靜置2 h 以上,但不超過采集后24 h.同時(shí),優(yōu)化新白膜法離心參數(shù),簡化改良白膜法離心分離步驟,以提高血小板計(jì)數(shù)及回收率.從檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn),將全血和白膜均靜置的新改良白膜法制備的血小板計(jì)數(shù)最高.本結(jié)果與國內(nèi)將全血靜置及白膜靜置制備血小板的相關(guān)研究結(jié)果相符.

在實(shí)際工作中,本站還采用多方舉措提高濃縮血小板的質(zhì)量,如采血點(diǎn)和成分制備科配置22 ± 2℃恒溫血液保存箱,確保制備血液溫度恒定在要求范圍內(nèi);配備專用運(yùn)輸汽車,減少血液振蕩;采用全自動(dòng)血液成分分離機(jī)制備濃縮血小板,減少人工操作誤差;離心裝杯時(shí)自制定型模板,避免袋體產(chǎn)生褶皺.此外,為減少對血小板的損傷,逐步調(diào)整全血和白膜的離心力,最終確認(rèn)全血以1993 g 離心16 min、白膜以163 g離心10 min 所制備的濃縮血小板計(jì)數(shù)最高.但血小板功能及在保存過程中質(zhì)量的穩(wěn)定還有待進(jìn)一步研究與評價(jià).

新改良白膜法充分利用現(xiàn)有條件,不需要特殊設(shè)備,采用兩次恒溫靜置,操作簡便易學(xué),適用于血站常規(guī)制備濃縮血小板.筆者認(rèn)為,新改良白膜法能大幅提高濃縮血小板的質(zhì)量,值得臨床推廣應(yīng)用.