李 港 張 季 王新利 王亞男 石宗楊

1 河北大學(xué)藥學(xué)院，保定，071000，中國

2 河北北方學(xué)院藥學(xué)系，張家口，075000，中國

冬凌草（Herba Rabdosiae），也稱冰凌草，藥性偏寒，味道偏苦，有效藥物成分種類非常多，達(dá)數(shù)十種，具有解表通里，清熱解毒及預(yù)防細(xì)胞癌變的功能。冬凌草可與多種藥用植物經(jīng)科學(xué)的配方制成冬凌茶，由于此保健茶具有很好的保護(hù)嗓子的功效和一定的阻止消化道細(xì)菌繁殖的作用，所以它可以起到清咽潤肺、保護(hù)消化道的作用。

冬凌草中含有大量的黃酮，而黃酮顯示明顯的抗腫瘤、抗癌細(xì)胞、抗類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、抗肺動(dòng)脈高壓以及防治糖尿病的作用。前期通過文獻(xiàn)的閱讀發(fā)現(xiàn)冬凌草制劑比較少，以冬凌草的黃酮提取液制備冬凌草黃酮分散片，為測(cè)定冬凌草黃酮分散片中黃酮含量建立紫外分光光度法對(duì)冬凌草黃酮分散片的質(zhì)量進(jìn)行控制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器

移液槍（1～10 μL、10～100 μL、100～1 000 μL）；電子天平，北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司；紫外分光光度儀UV-5500PC，上海元析儀器有限公司。

1.1.2 試劑

冬凌草黃酮分散片，自制；蘆丁對(duì)照品，批號(hào)：100080-200718，購自中國藥品生物制品檢定所；純水；乙醇（ethanol），購自成都科龍化工試劑廠；三氯化鋁（chloride），購自成都科龍化工試劑廠。

1.2 方法

1.2.1 配置儲(chǔ)備液

精密稱取20.00 mg蘆丁對(duì)照品，用75%乙醇，攪拌溶解，移至100 mL容量瓶中，超聲15 min，靜置10 min，然后定容至刻度，即可獲得0.2 mg·mL-1的蘆丁儲(chǔ)備液。

1.2.2 配置AlCl3溶液

精密稱取AlCl3粉末2.5 g，溶解后倒入250 mL容量瓶中，定容至刻度，得到1%AlCl3溶液。

1.2.3 建立標(biāo)準(zhǔn)曲線

分別精密吸取0.20 mg·mL-1的蘆丁儲(chǔ)備液0.05、0.10、0.30、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00 mL置 于8個(gè)10 mL容量瓶中，依次精密加入0.4 mL 1%的AlCl3溶液?；靹蜢o置6 min，每個(gè)容量瓶中都加入75%乙醇至刻度，充分震蕩，反復(fù)上下顛倒混勻，靜置20 min，將每個(gè)容量瓶取樣依次于410 nm處測(cè)吸光度，用計(jì)算機(jī)軟件做回歸直線，計(jì)算回歸方程及R2［1-2］。

1.2.4 精密度實(shí)驗(yàn)

取同一樣品溶液用紫外分光光度計(jì)在410 nm處測(cè)吸光度，測(cè)5次，得到吸光度后，把吸光度帶入回歸方程，得到樣品濃度然后計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（relative standard deviation，RSD）［3-5］。

1.2.5 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

取同一批次的冬凌草黃酮分散片，制備5份相同的樣品，用410 nm波長的光測(cè)定這5份樣品的吸光度，取均值，得到吸光度后，把吸光度帶入回歸方程，得到樣品濃度然后計(jì)算RSD。

1.2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取待測(cè)樣品溶液依次于0、1、2、4、8、24 h用410 nm波長的光測(cè)其吸光度，得到吸光度后，把吸光度帶入回歸方程，得到樣品濃度然后計(jì)算RSD。

1.2.7 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

取蘆丁對(duì)照品，作為對(duì)照液，精密稱取樣品片劑粉末三份（含量分別為0.20、0.30、0.40 mg），分別加入盛有0.20 mg的蘆丁對(duì)照品溶液和0.4 mL 1%AlCl3溶液的10 mL容量瓶中，用75%乙醇定容，混勻，靜置20 min，吸取溶液用410 nm的光測(cè)其測(cè)吸光度，通過回歸方程計(jì)算樣品中黃酮濃度，計(jì)算平均回收率與RSD。

1.2.8 樣品測(cè)定

取三批樣品各10片，分別精密稱重，計(jì)算平均片重，用研缽研細(xì)，精密稱取相當(dāng)于平均片重的藥物細(xì)粉，加少量75%乙醇溶解后置于100 mL容量瓶中，加入1%的AlCl30.4 mL，混勻靜置6 min，加75%乙醇至刻度定容，充分震蕩，反復(fù)上下顛倒混勻，靜置20 min，在410 nm處測(cè)吸光度，通過回歸方程得到冬凌草黃酮分散片中蘆丁的量，從而計(jì)算冬凌草黃酮分散片中蘆丁的標(biāo)示量百分含量。

1.2.9 溶出度實(shí)驗(yàn)

小杯法適用于小規(guī)格固體制劑，故采用此法測(cè)定此冬凌草黃酮分散片。在各溶出杯內(nèi)加入150 mL蒸餾水作為溶出介質(zhì)，待溶出杯內(nèi)蒸餾水溫度穩(wěn)定在37℃后，各個(gè)溶出杯內(nèi)分別放入供試品，迅速啟動(dòng)儀器，然后在第5、10、20、30、45 min，吸取溶出液5 mL，同時(shí)迅速補(bǔ)充5 mL 37℃的蒸餾水，此過程不能超過30 s。取澄清濾液，待所有取完，在410 nm處測(cè)其吸光度，通過回歸方程計(jì)算樣品中黃酮濃度及藥物累計(jì)溶出百分比［6-7］。

2 結(jié)果

2.1 線性關(guān)系

吸光度作為Y軸，蘆丁對(duì)照品濃度作為X軸，得到回歸方程，回歸方程為Y=28.388X+0.017 6，計(jì)算其R2，R2=0.999 4。得到的這些實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)說明此蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品濃度與吸光度在0.001～0.080 mg·mL-1濃度范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系（Fig.1）。

Fig.1 Standard Curve of Rutin

2.2 精密度實(shí)驗(yàn)

以精密度的實(shí)驗(yàn)方法得其RSD，RSD=0.45%（Tab.1）。

Tab.1 Table of precision experimental data

2.3 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

以重復(fù)性的實(shí)驗(yàn)方法得其RSD，RSD=1.90%（Tab.2）。

2.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

以穩(wěn)定性的實(shí)驗(yàn)方法得其RSD，RSD=2.30%（Tab.3）。

2.5 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

取蘆丁對(duì)照品，作為對(duì)照液，精密稱取樣品片劑粉末三份（含量分別為0.20、0.30、0.40 mg），分別加入10 mL容量瓶中，分別加入0.20 mg的蘆丁對(duì)照品溶液，分別加入1%AlCl3溶液0.4 mL，混勻靜置6 min，加入75%乙醇定容至刻度，混勻，靜置20 min，于410 nm處測(cè)吸光度，得到吸光度后，把吸光度帶入回歸方程，得到樣品濃度，平均回收率為101.78%，100.27%，99.60%；RSD分別為1.83%，1.41%，2.84%；實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)說明加樣回收率良好（Tab.4）。

Tab.2 Table of repeatable experimental data

Tab.3 Table of stability test data

2.6 樣品測(cè)定

利用紫外分光光度法測(cè)定冬凌草黃酮分散片中的黃酮含量，每片含量為2 mg，計(jì)算得到三批樣品中黃酮的標(biāo)示量百分含量分別為101.35%、99.10%、99.33%，平均含量為99.93%，三批間平均含量的RSD值為1.24%，表明三批間含量差異較小，本實(shí)驗(yàn)所建立的冬凌草黃酮分散片中黃酮的含量測(cè)定方法穩(wěn)定、可靠、重復(fù)性強(qiáng)（Tab.5）。

2.7 溶出度實(shí)驗(yàn)

冬凌草黃酮分散片的溶出速度很快，在5 min時(shí)溶出藥量的百分比達(dá)到76.7%，最終累計(jì)溶出86.20%。冬凌草黃酮分散片屬于速釋制劑（Fig.2）。

3 討論

冬凌草具有很多的藥理作用，但是由于冬凌草的味道不好，限制了它的臨床應(yīng)用，因?yàn)槎璨莸闹饕煞质屈S酮，所以我們制備了冬凌草黃酮分散片，根據(jù)黃酮的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，可以得出黃酮在紫外下的最大吸收波長為410 nm，而輔料在410 nm處幾乎無吸收，所以選擇410 nm作為黃酮的測(cè)定紫外吸收波長，通過回歸方程計(jì)算樣品中黃酮濃度，從而對(duì)冬凌草黃酮分散片進(jìn)行含量測(cè)定。

Tab.4 Recovery data sheet of added samples

Tab.5 Table of sample determination test data

Fig.2 Dissolution of dispersible tablets of Herba Rabdosiae

黃酮的顯色方法有亞硝酸鈉法、三氯化鋁法等，實(shí)驗(yàn)過程中亞硝酸鈉法與三氯化鋁法分別應(yīng)用，但是亞硝酸鈉法顯色效果不好，標(biāo)準(zhǔn)曲線難以繪制，測(cè)量藥品含量時(shí)，吸光度不穩(wěn)定，最終決定用三氯化鋁顯色法，三氯化鋁顯色法顯色效果好，穩(wěn)定性和精密度符合要求，標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系良好。

運(yùn)用朗伯-比爾定律測(cè)定蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)曲線，繼而測(cè)定冬凌草黃酮分散片中黃酮的總含量，此方法簡便易行、靈敏度與準(zhǔn)確度都較高，但專屬性稍差，適合基層實(shí)驗(yàn)室普及使用。

分散片是一種速釋制劑，速釋制劑與普通的固體制劑相比其他的崩解速度、溶出速度、起效速度都要快；而且生物利用度比普通片劑更高，吸收比普通片劑更充分；腸道殘留相對(duì)來說也更少，不良反應(yīng)出現(xiàn)的也更少，近些年也越來越受到患者與醫(yī)務(wù)人員的青睞。