楊紅燕 李兆奎 李玲燕

1 臺州市中醫(yī)院 浙江 臺州 318000

2 臺州市食品藥品檢驗研究院 浙江 臺州 318000

金銀花為一種常用的中藥，臨床使用十分廣泛，目前約500多種中藥制劑使用了金銀花，其中超過70%的感冒中成藥和抗感染中成藥中都含有金銀花[1]。研究發(fā)現(xiàn)，金銀花具有抗菌、抗炎、抗病毒、抗癌、保護肝臟、抗氧化和鎮(zhèn)痛等各種作用[2]。炒金銀花為金銀花的炒黃炮制品。《中國藥典》2015版一部中只有金銀花生品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，研究發(fā)現(xiàn)金銀花不同炮制方式其綠原酸、木犀草苷等有效化學(xué)成分的含量及溶出率會不相同，同時也會影響到金銀花的功能主治和臨床應(yīng)用[3]，可見不能以金銀花的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)來評價炒金銀花的質(zhì)量情況。本文收集了10批次的炒金銀花，測定其綠原酸和木犀草苷含量，建立金銀花炒黃炮制品的質(zhì)量控制方法和標(biāo)準(zhǔn)，以便為炒金銀花藥材的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器：Waters e2695液相色譜儀（美國沃特世公司，2998 PDA檢測器和Empower2色譜工作站），BP221S型電子天平（德國賽多利斯），恒溫水浴鍋（江蘇金壇市江南儀器廠）。

1.2 試劑與材料：綠原酸對照品、木犀草苷對照品(購自中國藥品生物制品檢定所，含量測定用)；乙腈為色譜純，磷酸、甲醇、乙醇、乙酸丁酯、甲酸、冰醋酸均為分析純，水為去離子水。10批炒金銀花樣品由臺州御濟中藥飲片有限公司提供，經(jīng)臺州市藥品檢驗研究院中藥檢驗所鑒定均符合《浙江省中藥炮制規(guī)范》2015版規(guī)定。

2 方法與結(jié)果

2.1 TLC鑒別：取炒金銀花粉末（過四號篩）0.2g，加入50%的甲醇5ml，室溫下放置12小時后濾過，將所得續(xù)濾液在水浴上蒸發(fā)掉甲醇，殘渣再另加甲醇2ml，所得溶液作為供試品溶液。在綠原酸對照品中加入50%的甲醇適量，制成每1ml含1mg的溶液，將其作為對照品溶液。按照《中國藥典》2015版薄層色譜法（附錄Ⅵ B）試驗，精密吸取上述對照品溶液與供試品溶液各10μl，然后分別點于同一硅膠H薄層板上，使用的展開劑為乙酸丁酯-甲酸-水（7∶2.5∶2.5）的上層溶液，展開后將其取出晾干，然后置紫外光燈（365nm）下檢視。比較供試品與對照品的色譜圖，發(fā)現(xiàn)在同一位置顯相同顏色的熒光斑點，詳見圖1。

圖1 炒金銀花薄層色譜圖

2.2 HPLC測定綠原酸的含量：具體如下。

2.2.1 供試品溶液的制備：取炒金銀花粉末（過四號篩）0.5g，精密稱定后放入具塞錐形瓶中，加入50%的甲醇50ml，精密稱重后進行超聲處理，超聲功率、頻率、時間分別為250W、40kHz、30min。放冷后再稱重，減少的重量用50%的甲醇補足，搖勻后濾過，精密吸取續(xù)濾液5ml，轉(zhuǎn)移到25ml的棕色量瓶中，往其再加入50%的甲醇到刻度線，搖勻后即得供試品溶液。

2.2.2 對照品溶液的制備：精密稱定綠原酸對照品適量，置棕色量瓶中，加入50%的甲醇進行超聲溶解，將其配置成每1ml含40μg的溶液，即為對照品溶液。

2.2.3 色譜條件：填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠；流動相為乙腈與0.4%的磷酸水溶液以13∶87的比例混合液；檢測波長為327nm；進樣量為10μl，流速為1.0ml/min；按照綠原酸峰值來計算理論塔板數(shù)應(yīng)不低于1000。

2.2.4 測定法：按2.2.3色譜條件，在室溫下精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5～10μl，分別注入高效液相色譜儀，測定各樣品的綠原酸含量。

2.2.5 綠原酸穩(wěn)定性試驗：在室溫下精密吸取各供試品溶液5～10μl，按2.2.3色譜條件，在放置0、1、3、7、10、14、18、24小時后各進樣1針，測得TZ-CJYH-MB-01峰面積分別是 1863951、1852074、1843521、1868757、1856508、1839885、1819742、1860612，得出 RSD 值 為0.9%。表明本品在室溫下放置24小時內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.6 測定結(jié)果：十批樣品的測定結(jié)果詳見表1，按干燥品計算，將含量限度定為含綠原酸（C16H18O9）不得少于1.5%，這與《中國藥典》金銀花限度相一致。

表1 炒金銀花綠原酸含量測定結(jié)果信息表

2.3 HPLC測定木犀草苷的含量：具體如下。

2.3.1 供試品溶液的制備：取炒金銀花粉末（過四號篩）2g，精密稱定后放入具塞錐形瓶中，精密加入70%的乙醇50ml，稱重后超聲處理，超聲功率、頻率、時間分別為250W、35kHz、60min。放冷后再稱重，減少的重量用70%的乙醇補足，搖勻后濾過。精密吸取續(xù)濾液10ml，蒸干回收乙醇，殘渣用70%的乙醇溶解，置5ml棕色量瓶中，再加入70%的乙醇到刻度線，即為供試品溶液。

2.3.2 對照品溶液的制備：精密稱定木犀草苷對照品適量，置棕色量瓶中，加入70%的乙醇進行超聲溶解，將其配置成每1ml含40μg的溶液，即為對照品溶液。

2.3.3 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：用苯基硅烷鍵合硅膠為填充劑（Aglient ZORBAX SB-phenyl 4.6mm×250mm，5μm）；檢測波長為350nm；進樣量為10μl；選用兩個流動相，流動相A為乙腈，流動相B為0.5%的冰醋酸溶液，流速1.0ml·min-1，按表2中的規(guī)定進行梯度洗脫。按照木犀草苷峰值來計算理論塔板數(shù)不低于20000。

表2 高效液相測木犀草苷的梯度洗脫表

2.3.4 測定法：按2.3.3色譜條件，在室溫下精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5～10μl，分別注入高效液相色譜儀，測定各樣品的木犀草苷含量。

2.3.5 木犀草苷穩(wěn)定性試驗：在室溫下精密吸取供試品溶液適量，按2.3.3色譜條件，在放置0、1、3、7、10、16、19、24小時后各進樣1針，測得TZ-CJYH-MB-01峰面積分 別是 919901、923523、923999、915329、921906、933428、925938、937147，得出RSD值為0.8%。表明本品在室溫下放置24小時內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.6 測定結(jié)果：10批樣品的測定結(jié)果詳見表3，根據(jù)制定限度的一般原則，10批樣品的含量限度是0.028。十批中就有兩批不在限度內(nèi)，限度有點嚴(yán)，按干燥品計算，將含量限度定為含木犀草苷（C21H20O11）不得少于0.025%。一批不在限度內(nèi)，屬于正常。

表3 炒金銀花木犀草苷含量測定結(jié)果信息表

3 討論

炒金銀花炮制過程未添加輔料，沒有成分改變，因沒有現(xiàn)成的方法可以參考，所以參照《中國藥典》2015版一部金銀花項下的薄層色譜鑒別法，進行炒金銀花樣品的TLC測定。在測定綠原酸、木犀草苷含量時，只做穩(wěn)定性試驗和含量測定。金銀花中木犀草苷含量在《中國藥典》2015版一部中規(guī)定不小于0.050%，本實驗發(fā)現(xiàn)炒金銀花中木犀草苷含量限度為0.025%，含量下降了很多?？赡芙疸y花經(jīng)過高溫炒制后某些化學(xué)成分變得不穩(wěn)定，甚至結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，所以導(dǎo)致木犀草苷含量的改變。由此表明，有效成分的改變使得炒金銀花與金銀花的功效有所不同，臨床應(yīng)用也有所區(qū)別。