季曉亮 楊國(guó)建 王旭文 楊偉剛 胡 赟 張艷勝

甲狀腺癌是30 歲以下中國(guó)年輕女性最高發(fā)的惡性腫瘤[1]。甲狀腺乳頭狀癌是甲狀腺惡性腫瘤中最常見(jiàn)的病理類型，占甲狀腺癌所有病理類型的85%左右[2]。術(shù)前診斷主要依靠B 超、CT 和細(xì)針穿刺等，但仍有近1/3 的病例難以明確診斷[3]。核受體共激活因子5（nuclear receptor coactivator 5，NCOA5）是最近發(fā)現(xiàn)的一種由多個(gè)氨基酸組成在腫瘤組織中廣泛表達(dá)的核受體輔助調(diào)節(jié)因子[4]，其表達(dá)程度與多種腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，是分子腫瘤學(xué)研究的熱點(diǎn)。本研究回顧性分析甲狀腺乳頭狀癌手術(shù)標(biāo)本60 例，采用免疫組化方法檢測(cè)甲狀腺乳頭狀癌組織與癌旁組織NCOA5 表達(dá)，比較癌組織NCOA5 表達(dá)程度與患者性別、年齡、腫瘤侵襲性等臨床病理參數(shù)的關(guān)系，探討NCOA5 表達(dá)在甲狀腺乳頭狀癌診斷和改善預(yù)后中的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬湖州中醫(yī)院外科2016 年3 月—2019 年3 月臨床資料完整且病理證實(shí)為甲狀腺乳頭狀癌，行甲狀腺癌根治手術(shù)患者的手術(shù)標(biāo)本，分為癌組織組和與之相對(duì)應(yīng)的癌旁組織組，各60 例。癌旁組織組要求經(jīng)過(guò)病理證實(shí)為正常甲狀腺組織且距離癌灶邊緣>1.0cm。本研究通過(guò)我院倫理委員會(huì)審核（倫理批號(hào)：2019-076-A）。60 例甲狀腺乳頭狀癌患者中，男14 例，女46 例，年齡26～68（40.71±8.64）歲；腫瘤直徑≤4cm 34 例，直徑>4cm 26 例；侵犯包膜21 例，未侵犯包膜39 例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移31 例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移29 例；采用第8 版美國(guó)癌癥聯(lián)合委員會(huì)（American joint committee on cancer，AJCC）TNM 分期[5]，Ⅰ～Ⅱ期42 例，Ⅲ～Ⅳ期18 例。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）手術(shù)標(biāo)本經(jīng)過(guò)病理證實(shí)為甲狀腺乳頭狀癌；（2）具備完整的臨床和病理資料。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）術(shù)前有化療、局部放療、消融治療或甲狀腺手術(shù)史；（2）有橋本甲狀腺炎、亞急性甲狀腺炎等甲狀腺炎性疾病史；（3）有甲狀腺相關(guān)內(nèi)分泌疾病史；（4）合并有其他部位惡性腫瘤病史。

圖1 核受體共激活因子5 在甲狀腺乳頭狀癌組織和癌旁組織表達(dá)（SP 法×400）

1.3 免疫組化方法 采用SP 法，常規(guī)蠟塊3～4μm切片后65℃烤箱過(guò)夜、切片后二甲苯脫蠟；3%H2O2阻斷滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶；EDTA 稀釋液（濃縮液用蒸餾水1:50 稀釋）煮沸修復(fù)抗原；血清工作液封閉20min；滴加 NCOA5 抗體（1∶400），25℃孵育1h；緩沖液沖洗后滴加二抗30min，緩沖液沖洗后DAB 顯色劑顯色；蘇木素復(fù)染；脫水、干燥、封片。本研究采用的NCOA5 多抗體（批號(hào)AI09236261）、免疫組化試劑盒（批號(hào)C-0010）和DAB 顯色試劑盒（批號(hào)BJ07071596），均采購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)有限公司。

1.4 觀察指標(biāo)和結(jié)果判定 經(jīng)過(guò)染色后的切片，其結(jié)果由兩名高年資副高病理科醫(yī)師獨(dú)立進(jìn)行閱片。每張切片在高倍鏡（×400）下隨機(jī)選取5 個(gè)視野，取其平均值，觀察陽(yáng)性細(xì)胞染色強(qiáng)度，并計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)所占百分比，進(jìn)行NCOA5 在癌組織和癌旁組織中表達(dá)結(jié)果評(píng)分。陽(yáng)性細(xì)胞占比評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：>75%計(jì)4分，50%～75%計(jì)3 分，25%～49%計(jì)2 分，5%～24%計(jì)1 分，<5%計(jì)0 分；陽(yáng)性細(xì)胞染色強(qiáng)度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：不顯色為0 分，淺棕色為1 分，棕黃色為2 分，深褐色為3分。取陽(yáng)性細(xì)胞占比評(píng)分和顯色程度評(píng)分的乘積，>9分計(jì)（+++），5～8 分計(jì)（++），2～4 分計(jì)（+），0～1 分計(jì)（-），（+）～（+++）為陽(yáng)性表達(dá)[6-7]。對(duì)比分析PTC 癌組織與癌旁組織NCOA5 陽(yáng)性表達(dá)的差異，并比較患者癌組織NCOA5 表達(dá)程度與患者年齡、性別、腫瘤直徑、侵犯包膜、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分期的關(guān)系。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 26.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（） 表示，以t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用百分率（%）表示，以χ2檢驗(yàn)；以P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 甲狀腺乳頭狀癌組織和癌旁組織NCOA5 表達(dá)情況比較 NCOA5 蛋白在癌組織組和癌旁組織組均有表達(dá)，NCOA5 在癌組織陽(yáng)性表達(dá)率73.33%（44/60），癌旁組織中為21.67%（13/60），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。見(jiàn)圖1。

2.2 甲狀腺乳頭狀癌組織NCOA5 表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系 NCOA5 蛋白的表達(dá)與患者的年齡、性別無(wú)相關(guān)性（P>0.05），與腫瘤直徑、是否侵犯包膜、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤分期相關(guān)。腫瘤直徑>4cm、侵犯包膜、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分期越高者NCOA5 蛋白表達(dá)增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表1。

表1 NCOA5 的表達(dá)與甲狀腺乳頭狀癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系[例（%）]

3 討論

NCOA5 是諸多核受體共激活因子的一種，位于染色體20q13.12 區(qū)域，是一種編碼包含579 個(gè)氨基酸的廣泛表達(dá)的核受體輔助調(diào)節(jié)因子，分子量65kDa，同時(shí)具有折疊的（ΦxxΦΦ）和（LxxLL）結(jié)構(gòu)域而發(fā)揮抑制或激活轉(zhuǎn)錄活性的作用[8]。NCOA5 通過(guò)與核受體結(jié)合，對(duì)核受體的轉(zhuǎn)錄活性進(jìn)行調(diào)控，在細(xì)胞轉(zhuǎn)錄過(guò)程起重要作用。研究發(fā)現(xiàn)，NCOA5 在肝癌組織表達(dá)顯著低于癌旁組織，敲除雄性小鼠NCOA5 基因可誘發(fā)肝癌，NCOA5 低表達(dá)可能是產(chǎn)生肝癌的原因之一[9]。張偉剛[10]研究發(fā)現(xiàn)，NCOA5 在乳腺癌陽(yáng)性表達(dá)與腫瘤的大小、分期呈正相關(guān)，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移也有相關(guān)性，NCOA5 可能是乳腺癌發(fā)生發(fā)展的重要蛋白。周錦都等[11]報(bào)道NCOA5 在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)其在甲狀腺腫瘤組織中表達(dá)增高，岳晚俠等[12]研究發(fā)現(xiàn)，NCOA5 在甲狀腺癌臨床分期Ⅲ+Ⅵ期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織中陽(yáng)性表達(dá)率低于臨床分期Ⅰ+Ⅱ期、非淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織中的陽(yáng)性表達(dá)率。兩項(xiàng)研究的研究對(duì)象病理類型有所不同，研究結(jié)果存在一定差異。本研究發(fā)現(xiàn)，NCOA5蛋白在甲狀腺乳頭狀癌癌組織和癌旁正常組織均有表達(dá)，NCOA5 在癌組織陽(yáng)性表達(dá)率73.33%（44/60），癌旁組織為21.67%（13/60）（P<0.01），NCOA5蛋白表達(dá)與患者的年齡、性別無(wú)關(guān)（P>0.05），腫瘤直徑＞4cm、包膜侵犯、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分期Ⅲ～Ⅳ期者，NCOA5 蛋白呈高表達(dá)狀態(tài)（P<0.05）。據(jù)此推斷，NCOA5 可能是甲狀腺乳頭狀癌發(fā)生發(fā)展的重要蛋白，其表達(dá)程度與甲狀腺乳頭狀癌臨床病理特征關(guān)系密切，可能是影響甲狀腺乳頭狀癌患者預(yù)后的危險(xiǎn)因素之一。NCOA5 參與腫瘤調(diào)控的具體機(jī)制尚不明確，還需要進(jìn)一步的相關(guān)研究。