高恬媛，曹曉智，汪俊茹

（皖南醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院 病理科，安徽 蕪湖）

0 引言

我國女性惡性腫瘤發(fā)病率中乳腺癌居首位，近十年發(fā)病率仍呈上升趨勢[1]，在世界范圍內(nèi)亦是女性癌癥死亡的第二個主要原因，女性乳腺癌的早期診斷預(yù)防則顯得尤為重要[2]。研究認(rèn)為內(nèi)源性雌激素在乳腺的發(fā)育過程中起著重要作用，增加雌激素的敏感性或者更長時間使用雌激素可能會增加腫瘤發(fā)生的風(fēng)險[3]。孕激素受體膜組分1（Progesterone Receptor Membrane Component 1, PGRMC1）是一種多功能蛋白，屬于真核生物中廣泛存在的膜相關(guān)孕酮受體（MAPR）蛋白家族，在乳腺癌細(xì)胞中過表達(dá)[4]。近期研究發(fā)現(xiàn)，乳腺癌患者雌激素水平較高，血液呈高凝狀態(tài)，血小板參數(shù)明顯改變，如PLT明顯升高，而PLT升高與凝血功能激活有關(guān)。血小板活化后顆粒內(nèi)容物、炎癥介質(zhì)等釋放增加，血管通透性增高，參與血管新生，促進腫瘤細(xì)胞生長、逃逸[5-6]。本實驗通過研究浸潤性乳腺癌患者PGRMC1的表達(dá)與血小板參數(shù)的相關(guān)性，對乳腺癌的早期診斷提供幫助。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2016年1月至2018年8月浸潤性乳腺癌組標(biāo)本60例，患者年齡26～78歲，平均（53.1±10.1）歲。乳腺良性腫瘤組織20例，患者年齡20～55歲，平均（38.5±10.2）歲。收集患者入院的血小板參數(shù)指標(biāo)。所有病例均為女性，經(jīng)臨床病理確診，術(shù)前均未行化療、放療，研究經(jīng)過患者及家屬同意，并簽署知情同意書。

1.2 主要試劑

PGRMC1兔多克隆抗體購自美國Proteintech公司（編號：12990-1-AP）；免疫組化染色劑，顯色劑及封閉試劑等均購自美國Leica公司。

1.3 方法

1.3.1 免疫組化

Envision法將白片經(jīng)二甲苯脫蠟，酒精梯度水化，檸檬酸熱修復(fù)，3% H2O2封閉去除內(nèi)源性酶，10%動物血清孵育，PGRMC1原液1:300稀釋，室溫孵育1 h；二抗室溫孵育30 min，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，梯度酒精脫水，透明后封片。

1.3.2 血小板參數(shù)

采集患者入院后次日清晨外周血2 mL于EDTA抗凝管，希森美康（Sysmex）全自動血液分析儀XN-1000V檢測血小板參數(shù)：血小板計數(shù)（PLT）、血小板壓積（PCT）、平均血小板體積（MPV）、血小板分布寬度數(shù)據(jù)（PDW）。

1.4 結(jié)果評定標(biāo)準(zhǔn)

PGRMC1定位于細(xì)胞漿，陽性細(xì)胞漿呈棕褐色，胞核藍(lán)染，高倍鏡下觀察，依據(jù)染色陽性強度分為0分（無色），1分（淡黃色），2分（棕黃色），3分（深褐色）；依據(jù)陽性檢出率劃分，陽性細(xì)胞占腫瘤細(xì)胞比例<10%，10%～50%，50%～75%，>75%依次分為1～4分。染色強度乘檢出率得到染色指數(shù)，<3 分為（–），3～5分（+），6～9分為（++），>9分為（+++），由兩位高年資診斷醫(yī)師雙盲檢出。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

SPSS 20.0統(tǒng)計軟件處理，Shapiro-Wilk檢驗是否符合正態(tài)分布，獨立樣本t檢驗或Mann-Whitney U秩和檢驗確定各指標(biāo)組間差異是否有統(tǒng)計學(xué)意義，相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)，P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PGRMC1在乳腺良、惡性腫瘤中的表達(dá)

由圖1可明顯看出，PGRMC1在浸潤性乳腺癌胞漿中高表達(dá)，在乳腺良性腫瘤中弱表達(dá)。表1中可見，良性腫瘤組的PGRMC1幾乎不表達(dá)強陽性（2組），浸潤性乳腺癌組多表達(dá)為強陽性或者陽性，兩組間的PGRMC1表達(dá)有顯著差異（Z=-6.01,P<0.001）。

表1 乳腺良、惡性腫瘤患者PGRMC1表達(dá)差異

圖1 PGRMC1在乳腺良惡性腫瘤中的表達(dá)（×100）

2.2 乳腺良、惡性腫瘤中血小板參數(shù)比較

表2可觀察到較乳腺良性腫瘤組，PLT、PCT在浸潤性乳腺癌中明顯升高（P<0.05），PDW、MPV無明顯差異性改變（P>0.05），提示血小板參數(shù)在浸潤性乳腺癌和乳腺良性腫瘤中有較為明顯改變。

表2 乳腺良、惡性腫瘤患者血小板相關(guān)參數(shù)差異性檢驗

2.3 PGRMC1與血小板參數(shù)的相關(guān)性

實驗發(fā)現(xiàn)PGRMC1與PLT、PCT之間具有顯著相關(guān)性（見表3），提示在進行乳腺良、惡性腫瘤研究中，PGRMC1與PLT、PCT高度相關(guān)，可以與血小板相關(guān)參數(shù)進行聯(lián)合參考。

表3 PGRMC1與血小板相關(guān)指標(biāo)間相關(guān)系數(shù)表

3 討論

PGRMC1是細(xì)胞色素b5相關(guān)的血紅素結(jié)合蛋白，具有Src同源性2和Src同源性3結(jié)構(gòu)域蛋白的結(jié)合位點，參與血紅素及親脂性分子從質(zhì)膜、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體等細(xì)胞器中轉(zhuǎn)運[7]。大多數(shù)組織均可檢測出，多種腫瘤組織中過表達(dá)，如乳腺、甲狀腺、結(jié)腸、卵巢、肺癌等[8-9]。本實驗發(fā)現(xiàn)PGRMC1在浸潤性乳腺癌多表達(dá)為強陽性，良性腫瘤中弱表達(dá)，兩組間表達(dá)有顯著差異（Z=-6.01,P<0.001），說明在浸潤性乳腺癌中PGRMC1表達(dá)明顯增高。目前，國內(nèi)外研究認(rèn)為PGRMC1促進乳腺癌細(xì)胞中的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，增加Akt活化和IκB磷酸化，導(dǎo)致NFκB活化，并且PGRMC1上存在PDK1結(jié)合區(qū)，Akt可以被PDK1蛋白激酶磷酸化。Neubauer H等[10]發(fā)現(xiàn)在卵巢癌細(xì)胞RMG細(xì)胞中，PGRMC1觸發(fā)下游細(xì)胞內(nèi)鈣離子釋放增加，使得PI3-K通過調(diào)節(jié)PKC活化環(huán)中氨基酸殘基的PDK1依賴性磷酸化來促進PKC活性的調(diào)節(jié)進而引起絲裂原蛋白激酶（ERK）活化，隨后導(dǎo)致不同的細(xì)胞反應(yīng)，表明PGRMC1可能激活下游多種膜受體類型的通路，包括GPCRs、受體酪氨酸激酶和各種細(xì)胞因子受體等。

術(shù)前血小板參數(shù)可作為乳腺癌早期診斷和評估病情的指標(biāo)，升高的PLT、PCT預(yù)示患者預(yù)后較差。本實驗結(jié)果顯示浸潤性乳腺癌PLT、PCT均明顯增高，且PGRMC1與PLT、PCT之間有顯著相關(guān)性，而血小板活化可以通過PI3K-Akt通路激活，其中PDK1是該通路中重要作用位點[11-12]，PGRMC1又有其結(jié)合區(qū)域，可以使得Akt活化，猜想PGRMC1與血小板活化有共同通路，可以作為乳腺癌早期的診斷依據(jù)，是臨床病理對浸潤性乳腺癌研究的一個新的角度。近幾年報道PGRMC1作為浸潤性乳腺癌輔助診斷[12-13]，且發(fā)現(xiàn)其表達(dá)還與腫瘤大小、乳腺癌的臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，對乳腺癌預(yù)后具有重要指示作用[14-15]。本實驗中PLT、PCT的升高可能由于浸潤性乳腺癌患者的血小板數(shù)增加包裹癌栓形成，促進腫瘤細(xì)胞逃逸[5]，可能與腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。

綜上所述，浸潤性乳腺癌患者的PGRMC1和血小板相關(guān)參數(shù)PLT、PCT明顯升高，并且具有顯著的相關(guān)性，可以為臨床的乳腺癌早期輔助診斷提供參考。