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        2013~2018 年重慶地區(qū)2 066 例急性下呼吸道感染住院患兒呼吸道合胞病毒流行特征分析

        2021-01-19 06:03:22任康軼任洛鄧昱謝曉虹臧娜謝軍羅征秀羅健符州劉恩梅李渠北
        中國(guó)當(dāng)代兒科雜志 2021年1期
        關(guān)鍵詞:月齡亞型檢出率

        任康軼 任洛 鄧昱 謝曉虹 臧娜 謝軍 羅征秀羅健 符州 劉恩梅 李渠北

        (重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院呼吸科/國(guó)家兒童健康與疾病臨床醫(yī)學(xué)研究中心/兒童發(fā)育疾病研究教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/兒童感染免疫重慶市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,重慶 400014)

        呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)是引起全球嬰幼兒下呼吸道感染的最主要病毒病原[1],感染RSV后可致毛細(xì)支氣管炎及肺炎等,甚至可引起呼吸衰竭。文獻(xiàn)報(bào)道,RSV 感染主要集中在0~2 歲的嬰幼兒,嬰幼兒時(shí)期重癥RSV 感染與學(xué)齡期持續(xù)喘息、罹患哮喘、肺功能減退有關(guān)[2]。然而至今尚無(wú)有效的疫苗預(yù)防,已造成極大的醫(yī)療負(fù)擔(dān)。RSV 可分為A 和B 亞型,A 和B 亞型又根據(jù)基因序列的不同分為不同的亞型[3]。RSV全年均可檢出,溫帶地區(qū)主要在冬季流行,而熱帶地區(qū)以雨季為主[4]。在全球不同國(guó)家、不同地區(qū)RSV 流行模式不盡相同,故了解一個(gè)地區(qū)的RSV流行規(guī)律有重要意義。本研究分析了2013~2018年重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院呼吸中心住院患兒連續(xù)5 個(gè)流行季RSV 流行特征,以期為后續(xù)RSV分子流行病學(xué)研究提供線索。

        1 資料與方法

        1.1 研究對(duì)象

        本研究回顧性分析了2 066 例2013 年6 月至2018 年5 月于重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院呼吸中心住院,且已完善鼻咽抽吸物16 種常見(jiàn)呼吸道病毒檢測(cè)患兒的臨床資料。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)符合急性下呼吸道感染診斷標(biāo)準(zhǔn)[5];(2)年齡小于2 歲。排除嚴(yán)重心肺疾病、使用免疫抑制劑及患免疫缺陷病、病例資料不全的患兒。

        本研究已通過(guò)我院倫理委員會(huì)審查[審查編號(hào):(2015)年倫審(研)第(77-1)號(hào)]。

        1.2 樣本收集及處理

        由??谱o(hù)士于患兒入院后24 h 內(nèi)采集患兒鼻咽抽吸物標(biāo)本。每管鼻咽抽吸物中加入病毒保護(hù)液2 mL,置于-80℃冰箱備用。

        1.3 核酸提取及cDNA 合成

        利用核酸提取試劑盒(Qiagen,貨號(hào):57704)提取鼻咽抽吸物標(biāo)本中的病毒核酸,采用SuperScriptTMⅢ Reverse Transcriptase System(Invitrogen,貨號(hào):18080-044)試劑盒合成cDNA,操作均嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)執(zhí)行。

        1.4 呼吸道常見(jiàn)病毒的檢測(cè)及分型

        根據(jù)文獻(xiàn)[6-7]采用多重PCR 分兩輪檢測(cè)鼻咽抽吸物中常見(jiàn)的呼吸道病毒,包括RSV A 和B 型,流感病毒(IFV)A、B和C型,副流感病毒(PIV)1、2、3 和4 型,人冠狀病毒(HCoV)229E 和OC43,人偏肺病毒(HMPV),人鼻病毒(HRV)A、B和C 型,人博卡病毒(HBoV),腺病毒(ADV),以及人腸道病毒(HEV)。

        1.5 資料收集

        利用臨床信息登記表收集患兒年齡、性別、現(xiàn)病史、家族史、輔助檢查、診斷等臨床資料。本研究中所有臨床疾?。òǚ窝?、毛細(xì)支氣管炎、支氣管炎)的診斷標(biāo)準(zhǔn)均依據(jù)《諸福棠實(shí)用兒科學(xué)》第8 版[5]。重癥下呼吸道感染(包括重癥肺炎及重癥毛細(xì)支氣管炎)判斷標(biāo)準(zhǔn)[8]為出現(xiàn)以下任何一種情況:(1)一般情況差;(2)有意識(shí)障礙;(3)低氧血癥表現(xiàn):紫紺、呼吸增快(嬰兒呼吸頻率≥70 次/mim,1 歲以上患兒呼吸頻率≥50次/min)、有輔助呼吸(呻吟、鼻扇、三凹征)、間歇性呼吸暫?;蜓躏柡投龋?2%;(4)發(fā)熱:超高熱或持續(xù)高熱超過(guò)5 d ;(5)有脫水征或拒食 ;(6)胸片或胸部CT 提示≥2/3 一側(cè)肺浸潤(rùn)、多葉肺浸潤(rùn)、胸腔積液、氣胸、肺不張、肺壞死或肺膿腫;(7)有肺外并發(fā)癥。

        1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

        采用SPSS 21.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。正態(tài)分布的計(jì)量資料應(yīng)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s,)描述,組間比較采用成組t檢驗(yàn);偏態(tài)分布計(jì)量資料用中位數(shù)(四分位數(shù)間距)[M(P25,P75)]表示,組間比較采用秩和檢驗(yàn)(2 組間用Mann-WhitneyU檢驗(yàn),3 組間用Kruskal-WallisH檢驗(yàn))。計(jì)數(shù)資料采用例數(shù)和構(gòu)成比(%)描述,組間比較使用卡方檢驗(yàn)或Fisher 確切概率檢驗(yàn);多個(gè)樣本的多重比較采用χ2分割法,調(diào)整后的檢驗(yàn)水準(zhǔn)α'=0.0083。其他組間比較P<0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 一般臨床資料及病毒檢出情況

        本研究共收集2013 年6 月至2018 年5 月期間2 歲以內(nèi)急性下呼吸道感染住院患兒鼻咽抽吸物標(biāo)本2 066 份,病毒檢出陽(yáng)性1 595 份(77.20%)。其中RSV 檢出率最高,檢出826 份(39.98%);其次為HRV,檢出521 份(25.22%)。其余病毒檢出情況如下:PIV 401 份(19.41%),HBoV 140份(6.78%),IFV 74 份(3.58%),HMPV 54 份(2.61%),HCoV 34份(1.65%),HEV 19份(0.92%)。

        RSV 幾乎在全年均可檢出,其中冬季檢出率最高。2013~2014 年、2014~2015 年、2016~2017年、2017~2018 年4 個(gè)年度RSV 流行亞型分別以RSV-B、RSV-A、RSV-B、RSV-A 為主導(dǎo),而2015~2016 年為RSV-A 和RSV-B 共同流行。見(jiàn)圖1。

        圖1 2013~2018 年各季度RSV-A 與RSV-B 亞型分布 春季指3~5 月份;夏季指6~8 月份;秋季指9~11 月份;冬季指12 月份至次年2 月份。

        2.2 RSV 檢出陽(yáng)性患兒一般臨床資料

        826 例RSV 檢 出陽(yáng)性樣本中,RSV-A 陽(yáng)性410 份(49.6%),RSV-B 陽(yáng)性414 份(50.1%),RSV-A 與RSV-B 均陽(yáng)性2 份(0.2%)。RSV 檢出陽(yáng)性患兒中,男性562 例(68.0%),女性264 例(32.0%)。中位年齡為7 個(gè)月,其中<6 月齡396例(47.9%),6~11 月齡249 例(30.1%),12~23月齡181 例(21.9%)。中位住院時(shí)間為6 d。重癥下呼吸道感染患兒206 例(24.9%)。

        2.3 RSV 合并其他病毒檢出情況

        在2 066 份樣本中,混合感染檢出樣本464份(22.46%),其中2 種病毒合并檢出共403 份(19.51%)。RSV+HRV 組合最常見(jiàn),檢出123 份(5.95%)。此外,RSV 合并PIV 檢出55 份,合并HBoV 23 份,合并IFV 15 份,合并ADV 4 份,合并HMPV 7 份,合并HCoV 4 份,合并HEV 9 份。3 種病毒混合檢出59 份,4 種病毒混合檢出2 份。

        2.4 RSV 檢出組與其他病毒檢出組臨床特征分析

        為比較各病毒病原檢出組間的臨床特征,本研究排除了所有合并細(xì)菌檢出的樣本,發(fā)現(xiàn)單一RSV 檢出298 份,RSV 混合其他病毒檢出148 份,其他病毒檢出389 份,病毒檢出陰性241 份。其他病毒檢出指除RSV 外后,IFV、PIV、HCoV、HMPV、HRV、HBoV、ADV、HEV 中 任 一 種 或多種病毒檢出陽(yáng)性。與其他病毒檢出組和未檢出病毒組比較,RSV 單一檢出組月齡更小,更易發(fā)生呼吸困難、呼吸衰竭及重癥下呼吸道感染(P<0.0083);RSV 單一檢出組喘息比例高于未檢出病毒組(P<0.0083),RSV 混合其他病毒組喘息比例高于其他病毒組和未檢出病毒組(P<0.0083)。各組間性別、住院時(shí)間、早產(chǎn)史等的比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

        表1 RSV 單一、混合檢出與其他病毒檢出及未檢出病毒組臨床特征比較

        2.5 RSV 單一陽(yáng)性組與RSV 合并HRV 陽(yáng)性組的臨床特征比較

        RSV 最易合并HRV,因此本研究比較了單一RSV 檢出患兒與RSV 合并HRV 檢出患兒的臨床特征。結(jié)果顯示,RSV 合并HRV 檢出患兒更易出現(xiàn)喘息(P=0.030)。兩組患兒血白細(xì)胞計(jì)數(shù)差異雖有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.022),但均在正常范圍內(nèi)。患兒臨床表現(xiàn)、月齡、住院時(shí)間、性別構(gòu)成、早產(chǎn)史比例、濕疹史比例、喘息史比例、疾病嚴(yán)重度、血中性粒細(xì)胞比例及血小板計(jì)數(shù)等差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

        2.6 RSV-A 陽(yáng)性與RSV-B 陽(yáng)性患兒的臨床特征比較

        在298 例RSV 單一陽(yáng)性樣本中,有RSV-A 陽(yáng)性151 例,RSV-B 陽(yáng)性147 例。RSV-A 檢出陽(yáng)性患兒中,男性比例更大(P=0.004)。兩組患兒月齡、住院時(shí)間、臨床表現(xiàn)及血常規(guī)等實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)的比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表3。

        表2 單一RSV 檢出組與RSV 合并HRV 檢出組患兒臨床特征比較

        表3 RSV-A 陽(yáng)性組與RSV-B 陽(yáng)性組患兒臨床特征比較

        3 討論

        RSV 是引起5 歲以下兒童下呼吸道感染最主要的病毒病原體[1]。本研究中下呼吸道感染患兒RSV 檢出率為39.98%,在所檢出的病毒中,其檢出率最高,且RSV 陽(yáng)性中重癥比例較其他病原體陽(yáng)性患兒明顯升高,提示RSV 在嬰幼兒下呼吸道感染中的重要地位。有系統(tǒng)綜述報(bào)道RSV 在急性呼吸道感染患兒中陽(yáng)性檢出率為12%~63%[9],本組病例與之檢出率存在差異可能與納入對(duì)象的年齡、病種、病毒檢測(cè)方法及地域不同等有關(guān)。

        既往文獻(xiàn)報(bào)道,在兒童中,RSV 導(dǎo)致的住院率在0~6 月齡患兒中最高,主要集中在2~3 月齡的嬰兒[10]。本研究也有類似發(fā)現(xiàn),RSV 陽(yáng)性患兒中,0~6 個(gè)月嬰兒占比最高(47.94%)。RSV 幾乎全年均可檢出,我國(guó)主要流行于10 月至次年5月[11]。本研究中RSV 在冬季檢出率最高。全球范圍內(nèi)RSV-A 和RSV-B 兩種亞型交替模式各不相同:南非2006~2012 年以“AABABA”規(guī)律流行[12](流行規(guī)律中“A”指該年度以RSV-A 為主導(dǎo),“B”指該年度以RSV-B 為主導(dǎo));比利時(shí)1996~2005年亞型流行模式由“AAB”循環(huán)模式轉(zhuǎn)變?yōu)椤癆B”交替循環(huán)[13]。中國(guó)各地區(qū)流行規(guī)律也有差異:北京地區(qū)2006~2013 年以“AABBAAB”規(guī)律流行[14],與浙南[15]、上海[16]等地區(qū)在同一時(shí)間流行亞型基本類似,但北京地區(qū)在2013~2014 年、2015~2016年2 個(gè)流行季出現(xiàn)A、B 兩種亞型共同主導(dǎo)的情況[14]。本研究中,2013~2014 年、2014~2015 年、2016~2017 年、2017~2018 年4 個(gè)年度RSV 流行亞型分別以RSV-B、RSV-A、RSV-B、RSV-A 為主導(dǎo),2015~2016 年為RSV-A、RSV-B 共同流行。由此可見(jiàn),在同一流行季不同地區(qū),流行亞型不盡相同,并可出現(xiàn)共同流行的情況,因此研制全球通用的RSV 疫苗時(shí)應(yīng)覆蓋A、B 兩種亞型。

        RSV是引起嬰幼兒喘息最常見(jiàn)的病原體之一。本研究提示,與其他病毒感染患兒相比,RSV 感染患兒月齡更小,出現(xiàn)喘息癥狀可能性更大,且病情較重(呼吸困難、呼吸衰竭、重癥下呼吸道感染比例更大)。高鈺等[17]對(duì)重慶地區(qū)2 歲以下的急性下呼吸道感染門診患兒進(jìn)行臨床特征分析,也得出類似結(jié)論。陳嘉韡等[18]也報(bào)道RSV 引起的嬰幼兒急性下呼吸道感染病情更重。這可能與RSV 感染后對(duì)呼吸道上皮細(xì)胞存在損傷且持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)、易合并其他病毒感染、繼發(fā)細(xì)菌感染等因素有關(guān)。

        本研究發(fā)現(xiàn),在RSV 合并其他病毒的檢出中,HRV 最為常見(jiàn),且RSV 合并HRV 檢出組比單一RSV 檢出組更易出現(xiàn)喘息。Petrarca 等[19]報(bào)道,單一RSV 檢出患兒比RSV 合并其他病毒檢出患兒更易引起發(fā)熱,而多種病毒混合檢出并未增加患兒的疾病嚴(yán)重度及3 年內(nèi)發(fā)生反復(fù)喘息的比例。目前對(duì)這一問(wèn)題仍有爭(zhēng)議。有學(xué)者報(bào)道,RSV 合并其他病毒感染與單一RSV 感染相比,患肺炎比例、住院率及機(jī)械通氣比例均更高[20],而Papenburg 等[21]認(rèn)為兩者病情嚴(yán)重程度無(wú)明顯不同。

        本研究發(fā)現(xiàn)RSV 2 種亞型引起的下呼吸道感染病情嚴(yán)重度無(wú)明顯差異。該問(wèn)題眾說(shuō)紛紜,大部分學(xué)者認(rèn)為RSV-A 引起疾病嚴(yán)重度更高[22-23],轉(zhuǎn)入ICU 及需要輔助通氣的病人比例更高,且RSV-A 感染的細(xì)胞株和動(dòng)物模型都表現(xiàn)出更高的病毒滴度和炎癥反應(yīng)[24-25],因此認(rèn)為RSV-A 亞型是重癥感染的危險(xiǎn)因素。另有學(xué)者則認(rèn)為RSV-B感染所致病情更重[26],還有研究并未發(fā)現(xiàn)2 種亞型所致病情的差異[27]。出現(xiàn)結(jié)果異質(zhì)性可能原因在于影響病情嚴(yán)重度的不僅是病毒因素,宿主因素也扮演了重要角色,同時(shí)各研究的研究方法、樣本量大小、檢測(cè)方法等差異均可能導(dǎo)致結(jié)論的不同。

        本研究中,RSV-A 陽(yáng)性組的男性比例較RSV-B 陽(yáng)性組更大,而Midulla 等[28]、張拓慧等[14]均未發(fā)現(xiàn)RSV 2 種亞型感染患兒間的性別差異。有研究報(bào)道,男性是導(dǎo)致RSV 重癥感染的危險(xiǎn)因素之一,但相關(guān)機(jī)制尚不明確,推測(cè)可能與男性兒童氣道樹(shù)相對(duì)狹窄或性激素影響有關(guān)[29-30]。

        本研究收集了重慶地區(qū)連續(xù)5 個(gè)流行季大樣本量的臨床資料,采用多重PCR 對(duì)多種呼吸道常見(jiàn)病毒進(jìn)行檢測(cè),發(fā)現(xiàn)2013~2018 年重慶地區(qū)RSV-A 與RSV-B 既可分別主導(dǎo)流行,也可共同流行;RSV 是急性下呼吸道感染住院患兒最主要的病毒病原,相較于其他病毒易致重癥下呼吸道感染,合并HRV 檢出時(shí)患兒易發(fā)生喘息;RSV-A 和RSV-B 感染所致臨床表現(xiàn)無(wú)差異,但RSV-A 更易感染男性患兒,為RSV 的分子流行病學(xué)研究提供了一定線索。本研究未行病毒載量檢測(cè)及RSV 基因型分型,后續(xù)研究需進(jìn)一步完善RSV 系統(tǒng)進(jìn)化分析及病毒載量檢測(cè),追蹤RSV 流行情況,探究RSV 分子流行病學(xué)規(guī)律及與臨床特征的關(guān)系,為疫苗研發(fā)提供思路。

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