曾 健，蔣 斌，黃 果，陳 娟

乳腺癌是一種激素依賴(lài)性的高度異質(zhì)性腫瘤，是女性癌癥相關(guān)死亡的主要原因[1]，其早期極易漏檢，而確診時(shí)往往已是晚期，同時(shí)高度異質(zhì)性使其預(yù)后較差[2]。膠原三螺旋重復(fù)蛋白1(collagen triple helix repeat containing-1，CTHRC1)是一種抑制膠原蛋白表達(dá)和增加細(xì)胞遷移的分泌蛋白，可參與腫瘤病理進(jìn)程。研究[3]顯示CTHRC1蛋白在乳腺癌組織高表達(dá)，并與乳腺癌不良預(yù)后相關(guān)；Lai et al[4]進(jìn)一步表明CTHRC1可促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞增殖、侵襲與轉(zhuǎn)移，并抑制凋亡，但并未闡明其具體分子機(jī)制。p53是一種抑癌基因，通過(guò)調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)、凋亡和DNA損傷修復(fù)等過(guò)程抑制腫瘤進(jìn)程[5]。研究[6]表明CTHRC1可負(fù)調(diào)控p53表達(dá)，促進(jìn)肝癌的進(jìn)程。然而，沉默CTHRC1表達(dá)是否可通過(guò)上調(diào)p53表達(dá)而激活線粒體凋亡途徑誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡，目前尚未闡明。因此，該研究通過(guò)探討CTHRC1沉默是否通過(guò)激活p53介導(dǎo)的線粒體凋亡途徑誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡，為臨床靶向治療乳腺癌提供更多理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 主要試劑和儀器人乳腺癌MCF-7細(xì)胞株購(gòu)自北京中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所；DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基和胎牛血清購(gòu)自美國(guó)Gibco公司；shRNA CTHRC1干擾質(zhì)粒及其陰性對(duì)照質(zhì)粒、siRNA p53干擾質(zhì)粒及其陰性對(duì)照質(zhì)粒均購(gòu)自廣州銳博生物科技公司；LipofectamineTM3000試劑購(gòu)自美國(guó)ThermoFisher公司；CTHRC1及GAPDH引物均由上海生工生物公司合成；RT-PCR試劑盒購(gòu)自上海全式金公司；CCK-8試劑盒、Annexin V-FITC/PI凋亡檢測(cè)試劑盒、胞質(zhì)和線粒體蛋白質(zhì)提取試劑盒均購(gòu)自上海碧云天生物技術(shù)有限公司；線粒體膜電位檢測(cè)試劑盒(JC-10)購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司；CTHRC1抗體、PUMA抗體、Bax抗體、Bcl-2抗體、Apaf-1抗體均購(gòu)自美國(guó)SANTA公司；caspase 3抗體、Cleaved- caspase 9抗體、Cytochrome C(Cyt C)抗體均購(gòu)自美國(guó)CST公司；COX IV抗體購(gòu)自美國(guó)Abbkine公司；GAPDH抗體購(gòu)自英國(guó)Abcam公司；qPCR儀(VeritiTM96-well Thermal Cycler)購(gòu)自美國(guó)ThermoFisher公司；酶標(biāo)儀(Synergy H1 Hybriod Reader)購(gòu)自美國(guó)BioTek公司；Western blot顯影儀購(gòu)自上海天能生物公司；流式細(xì)胞儀(BD CALIBUR)購(gòu)自美國(guó)BD公司。

1.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期人乳腺癌細(xì)胞MCF-7種于6孔板中，5×105個(gè)/孔，每孔加2 ml含10%牛血清DMEM培養(yǎng)基，置于37 ℃、CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)，待細(xì)胞貼壁后進(jìn)行分組：blank組(不做任何處理)、sh-NC組(轉(zhuǎn)染shRNA CTHRC1陰性對(duì)照質(zhì)粒pGPU6/GFP/Neo-NC)、sh-CTHRC1組(轉(zhuǎn)染shRNA CTHRC1干擾質(zhì)粒pGPU6/GFP/Neo-CTHRC1)。當(dāng)細(xì)胞融合度約達(dá)到80%時(shí)，按照LipofectamineTM3000轉(zhuǎn)染試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行轉(zhuǎn)染操作，將shRNA CTHRC1陰性對(duì)照質(zhì)粒和shRNA CTHRC1干擾質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染到MCF-7細(xì)胞中，轉(zhuǎn)染48 h后，收集細(xì)胞樣品檢測(cè)CTHRC1 mRNA和蛋白表達(dá)情況。CTHRC1 shRNA干擾序列：5′-ATCCCAAGTATAAT GGGAT-3′; 5′-ATCTGGAGAGATCCAATAT-3′。

1.3 Real-time PCR檢測(cè)收集各組細(xì)胞，采用TRIzol法提取細(xì)胞總RNA，分光光度法測(cè)量總RNA含量及純度，并將RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，以cDNA為模板進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增。引物序列：CTHRC1，F(xiàn)：5′-TCATCGCACTTCTTCTGTGGA- 3′，R：5′-GCCAACC CAGATAGCAACATC-3′；GAPDH，F(xiàn)：5′-AAGATCAT CAGCAATGCCTCC-3′，R：5′-TGGACTGTGGTCATGC CTT-3′。PCR反應(yīng)條件：95 ℃、10 min；95 ℃、15 s，60 ℃、1 min，40個(gè)循環(huán)；94 ℃、15 s；60 ℃、1 min；95 ℃、15 min。以GAPDH為內(nèi)參，采用2-ΔΔCt方法計(jì)算CTHRC1相對(duì)表達(dá)量。

1.4 Western blot檢測(cè)蛋白表達(dá)收集各組細(xì)胞，采用RIPA裂解液裂解細(xì)胞，12 000 r/min離心25 min，取上清液得到總蛋白樣品，使用考馬斯亮(G250)檢測(cè)法測(cè)定蛋白濃度。取20 μg蛋白上樣，進(jìn)行SDS-PAGE凝膠電泳，接著轉(zhuǎn)到PVDF膜上，脫脂牛奶室溫封閉2 h，洗滌后加入一抗CTHRC1(1 ∶200)、caspase 3(1 ∶1 000)、Cyt C(1 ∶1 000)、PUMA(1 ∶500)、Bax(1 ∶500)、Bcl-2(1 ∶500)、Apaf-1(1 ∶1 000)、Cleaved-caspase 9(1 ∶1 000)、COX IV(1 ∶1 000)、GAPDH(1 ∶1 000)，4 ℃孵育過(guò)夜，次日PBST緩沖液洗滌后，加入羊抗兔或鼠二抗(1 ∶10 000)，室溫孵育30 min，洗滌后加入顯影液，采用Image-Pro Plus6.0軟件進(jìn)行灰度分析，以目的蛋白條帶灰度值與對(duì)照組條帶灰度值的比值為相對(duì)表達(dá)量。

1.5 CCK-8檢測(cè)細(xì)胞活性取對(duì)數(shù)期各組MCF-7細(xì)胞種于96孔板，5 000個(gè)/孔，置于37 ℃、CO2培養(yǎng)箱分別培養(yǎng)12、24、48、72 h。每個(gè)培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)結(jié)束后每孔分別加入10 μl CCK-8，37 ℃繼續(xù)培養(yǎng)4 h，用酶標(biāo)儀在450 nm下檢測(cè)吸光度(optical density, OD)值，最終以時(shí)間為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)繪制細(xì)胞增殖曲線。

1.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期各組MCF-7細(xì)胞種于6孔板中，5×105個(gè)/孔，培養(yǎng)48 h后用胰酶輕柔消化得到單細(xì)胞，預(yù)冷PBS洗3次，加195 μl Annexin V-FITC結(jié)合液重懸浮細(xì)胞，再分別加入5 μl Annexin V-FITC和10 μl PI，25 ℃避光孵育20 min后，采用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。

1.7 線粒體膜電位檢測(cè)取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期各組MCF-7細(xì)胞種于6孔板中，5×105個(gè)/孔，培養(yǎng)48 h后用胰酶將細(xì)胞消化成單細(xì)胞，按照線粒體膜電位試劑盒說(shuō)明書(shū)加入1 ml 1×JC-10染色工作液，細(xì)胞培養(yǎng)箱中37 ℃孵育20 min，用預(yù)冷的1×JC-10染色緩沖液洗滌2次，200 μl 1×JC-10染色緩沖液重懸浮細(xì)胞，采用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。

1.8 線粒體和細(xì)胞質(zhì)蛋白中Cyt C蛋白檢測(cè)收集對(duì)數(shù)期各組MCF-7細(xì)胞，預(yù)冷PBS(pH 7.4)洗滌細(xì)胞2次，按照胞質(zhì)和線粒體蛋白質(zhì)提取試劑盒說(shuō)明書(shū)，利用胞質(zhì)提取緩沖液和線粒體裂解緩沖液分別提取胞質(zhì)蛋白和線粒體蛋白，按照上述1.4實(shí)驗(yàn)步驟檢測(cè)Cyt C蛋白表達(dá)情況。

1.9 sh-CTHRC1和si-p53共干擾實(shí)驗(yàn)將對(duì)數(shù)期MCF-7細(xì)胞種于6孔板，5×105個(gè)/孔，將細(xì)胞分組為NC組(轉(zhuǎn)染shRNA CTHRC1陰性對(duì)照質(zhì)粒和siRNA p53陰性對(duì)照質(zhì)粒)、sh-CTHRC1組(轉(zhuǎn)染shRNA CTHRC1干擾質(zhì)粒)、si-p53組(轉(zhuǎn)染siRNA p53干擾質(zhì)粒)、sh-CTHRC1+si-p53組(共轉(zhuǎn)染shRNA CTHRC1干擾質(zhì)粒和siRNA p53干擾質(zhì)粒)，采用LipofectamineTM3000將以上質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至MCF-7細(xì)胞中，細(xì)胞轉(zhuǎn)染48 h后收集細(xì)胞，按照上述1.6、1.4分別檢測(cè)線粒體和胞質(zhì)蛋白中Cyt C以及凋亡通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平。p53 siRNA干擾片段：5′-GAATGAGGC CTTAGAGTTA-3′。

1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，本研究的連續(xù)數(shù)據(jù)以3個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的表示。兩組比較采用t檢驗(yàn)，單因素方差分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CTHCR1沉默對(duì)MCF-7細(xì)胞中CTHRC1 mRNA和蛋白表達(dá)的影響與blank組比較，sh-CTHRC1組細(xì)胞中CTHRC1 mRNA和蛋白表達(dá)水平均下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=53.921、62.942，P<0.001)，而sh-NC組的CTHRC1 mRNA和蛋白表達(dá)水平無(wú)明顯差異，見(jiàn)圖1。表明成功干擾乳腺癌MCF-7細(xì)胞中CTHCR1表達(dá)。

圖1 CTHCR1沉默后MCF-7細(xì)胞中CTHRC1 mRNA和蛋白水平檢測(cè)

2.2 CTHRC1沉默對(duì)MCF-7細(xì)胞活性的影響CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與blank組比較，sh-CTHRC1組細(xì)胞在培養(yǎng)24、48、72 h時(shí)其增殖活性均被性抑制，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=6.852、10.361、37.214，P<0.05)，見(jiàn)圖2。表明沉默CTHRC1可抑制乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖。

2.3 CTHRC1沉默后對(duì)MCF-7細(xì)胞凋亡的影響流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果(圖3A)顯示，與blank組比較，sh-CTHRC1組細(xì)胞凋亡率性升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=73.254，P<0.001)，sh-NC組細(xì)胞凋亡發(fā)生率無(wú)差異性，；Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果(圖3B)顯示，與blank組比較，sh-CTHRC1組細(xì)胞中Cleaved-caspase3表達(dá)量升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=53.921，P<0.001)，sh-NC組細(xì)胞中Cleaved-caspase3表達(dá)無(wú)差異性。表明沉默CTHRC1可促進(jìn)MCF-7細(xì)胞凋亡。

圖2 CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞活性

2.4 CTHRC1沉默后對(duì)MCF-7線粒體膜電位及Cyt C蛋白胞內(nèi)定位影響線粒體膜電位檢測(cè)結(jié)果(圖4A)顯示，與blank組比較，sh-NC組細(xì)胞線粒體膜電位無(wú)變化，sh-CTHRC1組細(xì)胞線粒體膜電位下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=49.911，P<0.001)。Western blot結(jié)果(圖4B)顯示，與blank組比較，sh-CTHRC1組細(xì)胞線粒體中Cyt C蛋白表達(dá)降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=197.014，P<0.001)，而胞質(zhì)中Cyt C蛋白表達(dá)升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=123.412，P<0.001)。表明CTHRC1沉默可導(dǎo)致MCF-7細(xì)胞線粒體損傷并可能誘發(fā)線粒體介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡途徑。

2.5 CTHRC1沉默后對(duì)p53介導(dǎo)的線粒體凋亡途徑相關(guān)蛋白表達(dá)影響與blank組比較，sh-CTHRC1組中p53蛋白表達(dá)升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=60.714，P<0.001)，p53介導(dǎo)的線粒體凋亡途徑相關(guān)蛋白Apaf-1、Cleaved-caspase 9表達(dá)上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=42.331、57.683，P<0.001)，抑凋亡因子Bcl-2蛋白表達(dá)下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=23.214，P<0.001)，而促凋亡因子Bax和PUMA蛋白表達(dá)上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=44.075、35.237，P<0.001)，而sh-NC組細(xì)胞中Apaf-1、Cleaved-caspase9、Bcl-2、Bax和PUMA蛋白表達(dá)水平無(wú)差異變化。提示CTHRC1沉默可能通過(guò)p53介導(dǎo)的線粒體途徑凋亡誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞凋亡。見(jiàn)圖5。

2.6 CTHRC1和p53共干擾后對(duì)MCF-7細(xì)胞凋亡的影響與NC組比較，si-p53組細(xì)胞p53蛋白水平下調(diào)(t=40.401，P<0.001)，表明p53干擾成功(圖6A)。細(xì)胞凋亡檢測(cè)結(jié)果(圖6B)顯示，與NC組比較，si-p53組細(xì)胞凋亡率無(wú)差異(t=0.281，P>0.05)，而sh-CTHRC1組細(xì)胞凋亡率增加(t=38.852，P<0.001)；與sh-CTHRC1組比較，sh-CTHRC1+si-p53組細(xì)胞凋亡率又降低(t=13.990，P<0.01)，說(shuō)明CTHRC1沉默誘導(dǎo)的MCF-7細(xì)胞凋亡依賴(lài)于p53蛋白。Western blot結(jié)果(圖6C)顯示，與sh-CTHRC1組比較，sh-CTHRC1+si-p53組細(xì)胞線粒體中Cyt C蛋白表達(dá)升高(t=21.723，P<0.01)，而細(xì)胞質(zhì)Cyt C蛋白表達(dá)降低(t=65.129，P<0.01)。進(jìn)一步表明CTHRC1沉默可激活p53介導(dǎo)的線粒體細(xì)胞凋亡途徑進(jìn)而誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞凋亡。

圖3 CTHRC1沉默檢測(cè)MCF-7凋亡率和凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)

圖4 CTHRC1沉默后檢測(cè)MCF-7細(xì)胞線粒體膜電位和Cyt C蛋白表達(dá)

圖5 CTHRC1沉默后檢測(cè)p53介導(dǎo)的線粒體凋亡途徑相關(guān)蛋白表達(dá)

圖6 共干擾CTHRC1和p53后檢測(cè)細(xì)胞凋亡率和Cyt C蛋白胞內(nèi)定位

3 討論

盡管醫(yī)療水平提高，乳腺癌早期臨床檢測(cè)和治療策略有所改善，但乳腺癌患者的預(yù)后仍較差[7]，CTHRC1作為一種新的致癌基因，已被證實(shí)在乳腺癌中異常高表達(dá)[3]。Lai et al[4]利用薈萃分析310例乳腺癌患者進(jìn)行CTHRC1的預(yù)后價(jià)值評(píng)估，發(fā)現(xiàn)CTHRC1與較差生存率密切相關(guān)，可以作為乳腺癌新的獨(dú)立預(yù)后生物標(biāo)志物。因此，可以探究CTHRC1在乳腺癌發(fā)生過(guò)程中的作用機(jī)制，為臨床靶向治療提供理論依據(jù)。本研究選用CTHRC1高表達(dá)乳腺癌細(xì)胞MCF-7，研究沉默CTHRC1表達(dá)對(duì)MCF-7細(xì)胞凋亡影響以及內(nèi)在分子機(jī)制。當(dāng)沉默MCF-7細(xì)胞中CTHRC1表達(dá)，細(xì)胞增殖活性抑制，提示CTHRC1沉默可能與抑制乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)有關(guān)聯(lián)。

凋亡是一個(gè)細(xì)胞程序性停止生長(zhǎng)和分裂的過(guò)程，特征是發(fā)生眾多與酶相關(guān)的生化反應(yīng)以及細(xì)胞結(jié)構(gòu)發(fā)生特征性的形態(tài)學(xué)改變，結(jié)果是清除機(jī)體有害細(xì)胞，且對(duì)周?chē)M織損傷最小[8]，細(xì)胞凋亡調(diào)控失敗，體內(nèi)受損細(xì)胞累積，容易導(dǎo)致癌癥發(fā)生。細(xì)胞凋亡的啟動(dòng)依賴(lài)于一系列的半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶的激活，這些蛋白酶被稱(chēng)為caspases，分為兩類(lèi)，起始凋亡蛋白酶和執(zhí)行凋亡蛋白酶[9]，凋亡機(jī)制一旦檢測(cè)到細(xì)胞損傷，起始凋亡蛋白酶如caspase 9會(huì)從非活性狀態(tài)下即前體-凋亡蛋白酶被激活，進(jìn)而對(duì)執(zhí)行凋亡蛋白酶前體如Pro-caspase 3進(jìn)行切割，產(chǎn)生有活性的執(zhí)行蛋白酶如Cleaved-caspase 3，激活內(nèi)切酶導(dǎo)致DNA片段化和細(xì)胞骨架破壞等一系列引起細(xì)胞凋亡事件。在MCF-7細(xì)胞中沉默CTHRC1表達(dá)，細(xì)胞凋亡水平升高，進(jìn)一步檢測(cè)相關(guān)蛋白顯示，Cleaved-caspase 9表達(dá)升高，caspase 3發(fā)生切割現(xiàn)象，說(shuō)明CTHRC1的沉默可以引起起始凋亡蛋白caspase 9活化，進(jìn)而活化caspase 3蛋白誘導(dǎo)凋亡發(fā)生。執(zhí)行凋亡蛋白酶caspase 9參與哺乳動(dòng)物細(xì)胞中線粒體起始的內(nèi)源凋亡途徑，這種形式的凋亡依賴(lài)于線粒體釋放的凋亡因子其中最主要的是細(xì)胞色素C(Cyt C)[10]，當(dāng)細(xì)胞受凋亡信號(hào)刺激時(shí)，Bcl-2家族蛋白中的促凋亡因子Bax從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)移到線粒體外膜，與膜上的電壓依賴(lài)性陰離子通道相互作用，線粒體膜電位下降，膜通透轉(zhuǎn)變孔(MPTP)打開(kāi)促進(jìn)線粒體釋放Cyt C到細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中，而B(niǎo)cl-2家族蛋白中的抑凋亡因子Bcl-2抑制Bax功能阻止線粒體通膜道開(kāi)啟[11]，Cyt C被釋放到細(xì)胞質(zhì)中，會(huì)與凋亡因子Apaf-1結(jié)合，其N(xiāo)端的caspase招募結(jié)構(gòu)域招募caspase 9，并促進(jìn)其自身切割活化[12]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，CTHRC1沉默后Bax蛋白表達(dá)升高，線粒體膜電位下降，Cyt C蛋白從線粒體高表達(dá)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中高表達(dá)，Apaf-1蛋白表達(dá)也升高，進(jìn)一步說(shuō)明CTHRC1沉默誘導(dǎo)MCF-7凋亡是依賴(lài)于線粒體起始的內(nèi)源凋亡途徑。

p53基因是關(guān)鍵的腫瘤抑癌基因， p53蛋白控制著機(jī)體重要的細(xì)胞進(jìn)程，如DNA修復(fù)、凋亡、代謝、發(fā)育和炎癥等[13]。P53蛋白作為轉(zhuǎn)錄激活因子可以促進(jìn)其下游基因PUMA、Bax表達(dá)。本研究結(jié)果顯示在MCF-7細(xì)胞中，CTHRC1沉默后PUMA蛋白和Bax蛋白表達(dá)均升高。細(xì)胞應(yīng)激引起凋亡時(shí)，一方面p53直接與促凋亡因子Bax結(jié)合，誘導(dǎo)線粒體外膜通透性改變；另一方面PUMA抑制抗凋亡因子BCL-xL與p53蛋白結(jié)合，促進(jìn)自由的 p53蛋白與Bax結(jié)合誘導(dǎo)線粒體介導(dǎo)的凋亡[14]。有研究[6,15]報(bào)道，在肝癌細(xì)胞中被乙肝病毒(HBV)激活的CTHRC1通過(guò)抑制p53蛋白促進(jìn)癌細(xì)胞增殖。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，CTHRC1沉默后，p53蛋白表達(dá)升高，說(shuō)明CTHCR1在MCF-7細(xì)胞中發(fā)生了依賴(lài)于p53介導(dǎo)的線粒體凋亡。進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)表明，當(dāng)CTHRC1和p53蛋白共干擾后，MCF-7細(xì)胞凋亡發(fā)生被逆轉(zhuǎn)，Cyt C蛋白在線粒體中表達(dá)升高，說(shuō)明p53的干擾阻止了線粒體外膜變化，抑制了凋亡的發(fā)生。

綜上，本研究確定了shRNA沉默CTHRC1可以激活p53介導(dǎo)的線粒體凋亡，抑制乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)。然而，作為致癌基因CTHRC1如何調(diào)控p53基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)目前還不知曉，本研究下一步將重點(diǎn)研究CTHRC1調(diào)控p53表達(dá)的機(jī)制，以期為解決乳腺癌預(yù)后性差提供新的靶點(diǎn)和解決方案。