周順平

（河南紅陽工業(yè)有限責任公司職工醫(yī)院婦產(chǎn)科，河南 南召 474678）

宮頸癌是女性常見惡性腫瘤,主要發(fā)生于宮頸陰道部或移行帶及宮頸管內(nèi)膜交界處,其中人乳頭狀瘤病毒感染、性激素失調(diào)、早婚早育及子宮頸糜爛癥均為宮頸癌的誘發(fā)因素,近年來發(fā)病率呈逐年升高趨勢[1]。文獻[2，3]提示多種細胞因子與宮頸癌的侵襲和轉(zhuǎn)移機制具有密切關(guān)系,多種因素共同影響癌細胞的快速增值、DNA 合成及修復，調(diào)控宮頸癌的發(fā)生發(fā)展，其中葉酸在癌細胞的DNA 高效分裂具有重要作用,因而轉(zhuǎn)運葉酸的受體α 成為了研究熱點，而FR-α 在黏液腺癌及部分腦腫瘤中均具有重要作用。TopoⅡ能夠通過調(diào)節(jié)核酸結(jié)構(gòu)的動態(tài)變化而調(diào)節(jié)DNA 修復、復制及轉(zhuǎn)錄等生命活動[4]。但FR-α、TopoⅡ蛋白在宮頸癌組織中表達及意義研究鮮有報道。因而，本研究深入探討了FR-、TopoⅡ蛋白在宮頸癌組織、 癌旁組織及正常宮頸組織中的表達情況及與宮頸癌臨床病理特征關(guān)系,旨在為尋求新的靶向治療提供一定的幫助和依據(jù),現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取 2017 年 1 月至 2019 年 2 月在我院手術(shù)切除的宮頸癌組織、 癌旁組織標本92例,納入標準：⑴均經(jīng)病理學確診；⑵術(shù)前未行放化療等抗腫瘤治療； ⑶臨床資料保存完整。排除標準：⑴合并有其他系統(tǒng)腫瘤者；⑵合并有免疫系統(tǒng)性疾病、嚴重肝腎功能障礙、血液系統(tǒng)疾病等。同時選取正常宮頸組織標本78 例，宮頸癌和正常宮頸組織患者一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義 （P＞0.05）,見表 1。

表1 宮頸癌和正常宮頸組織一般資料比較

1.2 實驗方法 免疫組化染色法檢測各組織標本FR-、TopoⅡ表達，常規(guī)石蠟切片后脫蠟處理，梯度水化后H2O2（3%）抑制內(nèi)源性過氧化酶，枸櫞酸鈉（0.01mol/L） 抗原修復后，100℃熱水 10min 加熱，PBS 洗片后BSA（10%）封閉非特異性位點10min，4℃一抗孵育過夜， 以PBS 代替一抗呈陰性對照，加入生物素標記二抗，37℃下孵育30min，PBS 沖洗3 次，DAB 顯色后蘇木素復染，脫水、透明、干燥及封片。

1.3 結(jié)果判斷 采用半定量積分方法,染色強度：無著色為0 分,淡黃色為1 分，棕黃色為2 分，棕褐色為3 分；陽性細胞比例＜1%為 0 分,1%～10%為 1 分,11%～50%為 2 分,51%～74%為 3 分,≥75%為 4 分。染色強度和陽性細胞比例得分之積≥3 分為陽性表達[5]。

1.4 統(tǒng)計學處理 采用SPSS22.0 進行統(tǒng)計分析，計量資料采用表示，組間比較使用t 檢驗，計數(shù)資料比較使用χ2檢驗，相關(guān)性采用Spearman 秩相關(guān)分析。檢驗水準α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 宮頸癌組織、 癌旁組織和正常宮頸組織FR-、TopoⅡ蛋白表達 宮頸癌組織FR-、TopoⅡ蛋白陽性表達率明顯高于癌旁組織和正常宮頸組織 （P＜0.05),而癌旁組織與正常宮頸組織間差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。見表 2。

表2 宮頸癌組織、癌旁組織和正常宮頸組織FR-、TopoⅡ蛋白表達n（%）

2.2 FR-、TopoⅡ蛋白表達與宮頸癌臨床病理關(guān)系宮頸鱗狀細胞癌、TNM 分期Ⅲ期、中低分化和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移宮頸癌組織FR-α 陽性表達率明顯高于宮頸腺癌、Ⅰ～Ⅱ期、高分化和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移宮頸癌組織（P＜0.05）； TNM 分期Ⅲ期、中低分化和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移宮頸癌組織TopoⅡ蛋白陽性表達率明顯高于宮頸腺癌、Ⅰ～Ⅱ期、高分化和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移宮頸癌組織（P＜0.05）。見表 3。

表3 FR-、TopoⅡ蛋白表達與宮頸癌臨床病理關(guān)系n（%）

2.3 FR-、TopoⅡ蛋白表達相關(guān)性 將宮頸癌組織FR-與TopoⅡ蛋白表達進行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示FR-與 TopoⅡ蛋白表達呈正相關(guān) （rs=0.392，P＜0.05），見表 4。

表4 FR-、TopoⅡ蛋白表達相關(guān)性

3 討論

宮頸癌臨床發(fā)生率僅次于乳腺癌,屬于臨床常見惡性腫瘤,其中我國宮頸癌的發(fā)生率約占全球?qū)m頸癌總病例的30%左右[6]。宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展受到多種基因的調(diào)控，研究[7]發(fā)現(xiàn)多種存在致癌可能性的環(huán)境共同作用可誘發(fā)抑癌基因和原癌基因的功能障礙，進而導致正常細胞出現(xiàn)惡性病變。現(xiàn)臨床關(guān)于宮頸癌的發(fā)病機制尚不完全明確,普遍認為有多因素參與,其發(fā)生、發(fā)展涉及較多因素，均可能促進了疾病的發(fā)生、發(fā)展[8,9]。

宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展屬于復雜的過程，相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)葉酸受體與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展可能存在重要關(guān)系，其中 FR-α、FR-β 及 FR-γ 均是葉酸受體的主要類型。早期研究[10]發(fā)現(xiàn)FR-α 在卵巢癌的早期診斷過程中具有較高的靈敏度和特異性,但新階段與FR-α 與宮頸癌的相關(guān)性研究資料較為缺乏。文獻[11,12]提示TopoⅡ能夠評估宮頸癌患者預后，進而指導治療方案的制定并在疾病的發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用。本研究發(fā)現(xiàn)宮頸癌組織FR-、TopoⅡ蛋白陽性表達率明顯高于癌旁組織和正常宮頸組織。該結(jié)果提示FR-、TopoⅡ蛋白具有成為診斷宮頸癌重要指標的潛力。TopoⅡ主要位于正常細胞的S、G、M 期，可在 G2/M 期達至峰值，進而參與細胞的分裂過程,屬于臨床細胞分裂的重要特異性指標[13]。故而，宮頸癌組織的TopoⅡ陽性表達要明顯高于癌旁組織和正常宮頸組織。

FR-、TopoⅡ蛋白表達與宮頸癌臨床病理關(guān)系研究結(jié)果顯示宮頸鱗狀細胞癌、TNM 分期Ⅲ期、中低分化和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移宮頸癌組織FR-陽性表達率明顯高于宮頸腺癌、Ⅰ～Ⅱ期、高分化和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移宮頸癌組織； TNM 分期Ⅲ期、中低分化和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移宮頸癌組織TopoⅡ蛋白陽性表達率明顯高于宮頸腺癌、Ⅰ～Ⅱ期、高分化和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移宮頸癌組織。該結(jié)果說明宮頸癌組織FR-、TopoⅡ蛋白可參與宮頸癌疾病進展及轉(zhuǎn)移侵襲過程。TopoⅡ是機體常見核蛋白，在DNA 修復、復制及轉(zhuǎn)錄等過程均具有重要作用,還能在一定程度上調(diào)節(jié)核酸結(jié)構(gòu)變化，進而維持機體的生命系統(tǒng)運轉(zhuǎn)。因而，為提高宮頸癌的治療效果，需要及時完善宮頸癌組織FR-與TopoⅡ蛋白等因子的檢查,指導術(shù)后恢復治療；通過對宮頸癌組織FR-與TopoⅡ蛋白的檢查能夠動態(tài)了解患者疾病發(fā)展,加強治療的針對性，進而采取及時有效的干預措施，加速患者的恢復。

本研究將宮頸癌組織FR-與TopoⅡ蛋白表達進行相關(guān)性分析,結(jié)果顯示FR-與TopoⅡ蛋白表達呈正相關(guān)。該結(jié)果說明宮頸癌組織FR-與TopoⅡ可能存在某種作用機制，在宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展過程中相互調(diào)節(jié)并發(fā)揮作用,但具體機制還有待進一步探討。國外研究[14]發(fā)現(xiàn)細胞分化程度越低，TopoⅡ含量越高，其表達水平與基地細胞增生、細胞的異型性均具有密切相關(guān)性,在外陰鱗癌及口腔上皮鱗癌中腫瘤細胞的分級均與TopoⅡ正相關(guān),這也與本研究結(jié)論一致。相關(guān)研究[15,16]發(fā)現(xiàn)葉酸與多種藥物（血清白蛋白、辣根過氧化物酶等）的共價偶聯(lián)，通過FR-介導進入細胞,證實細胞不僅是通過吸收葉酸到細胞質(zhì)中發(fā)揮作用而是以功能活性的形式參與到細胞蛋白的合成過程中,這也為葉酸受體與癌細胞的作用機制提供了理論基礎(chǔ)。

綜上所述, 宮頸癌組織FR-、TopoⅡ蛋白表達明顯上調(diào),與患者臨床病理有一定關(guān)系。