周貴芬

（九江市濂溪區(qū)人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江西 九江 332005）

梅毒（Syphilis）為臨床發(fā)病率較高的一種慢性全身性感染性疾病，因蒼白螺旋體感染所致，具有危害大、傳染性強(qiáng)等特征，可經(jīng)母嬰、血液、性接觸等途徑傳播， 且受世界人口流動(dòng)頻繁等多種因素的影響，導(dǎo)致其患病率呈現(xiàn)明顯上升趨勢[1,2]。該疾病的臨床表現(xiàn)較相對(duì)復(fù)雜， 同時(shí)梅毒螺旋體培養(yǎng)較為困難， 而血清學(xué)檢測可為臨床診斷提供重要依據(jù)， 其中蒼白密螺旋體明膠顆粒凝集試驗(yàn)（Treponema pallidum particle agglutination assay，TPPA）、化學(xué)發(fā)光免疫分析法（Chemiluminescence immunoassay，CLIA）及酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）及甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)（Toluidine red unheated serum test，TRUST）均為臨床常見血清學(xué)檢測方法，但其診斷效能存在一定差異性[3,4]?；诖?，本研究進(jìn)一步探討上述檢測方法對(duì)梅毒螺旋體抗體的檢測結(jié)果。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析 2018 年7 月至 2019年7 月期間在九江市濂溪區(qū)人民醫(yī)院就診的130例疑似梅毒感染患者的臨床資料， 其男性71 例，女性 59 例； 年齡 20～85 歲， 平均年齡 52.31±4.15歲；身體質(zhì)量指數(shù)（Body mass index,BMI）18.3-24.6 kg/m2，平均 BMI 21.44±1.07kg/m2；來源：骨科 6 例，五官科8 例，疾控4 例，體檢科 13 例，外一科 12例，外二科 16 例，內(nèi)一科 15 例，內(nèi)二科 7 例，急診科 3 例，婦產(chǎn)科 30 例，皮膚科 16 例。

1.2 入選標(biāo)準(zhǔn) ⑴納入標(biāo)準(zhǔn)：①存在梅毒性脫發(fā)、全身淺表淋巴結(jié)腫大、發(fā)熱、頭痛等臨床表現(xiàn)者；②臨床資料完整者；③肝腎功能正常者；④梅毒感染者符合《梅毒、淋病、生殖器皰疹、生殖道沙眼衣原體感染診療指南(2014)》[5]內(nèi)診斷標(biāo)準(zhǔn)。⑵排除標(biāo)準(zhǔn)：①嚴(yán)重器官功能衰竭者；②凝血功能障礙者；③表達(dá)障礙或精神疾病者； ④既往接受抗梅毒治療者。

1.3 方法 所有入選者均需空腹抽取5ml 靜脈血，3000r/min 離心 10min，分離血清。⑴CLIA：于微孔板內(nèi)加入 50μl 待測標(biāo)本,50μl 磁微粒，100μl 酶結(jié)合物溶液,于37℃環(huán)境下給予溫育，時(shí)長30min，通過磁分離洗滌設(shè)備進(jìn)一步洗滌4 次，加入100μl 發(fā)光底物，于室溫下進(jìn)行避光反應(yīng)，時(shí)長5min，經(jīng)安圖全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀（AutolumoA2000)進(jìn)行測定。⑵ （珠海麗珠有限公司提供的試劑）ELISA：將50μl 待測標(biāo)本加入至預(yù)包被條孔處，同時(shí)設(shè)置為空白對(duì)照、陰性與陽性，在37℃環(huán)境下孕育60min， 將50μl 酶標(biāo)物分別加入至陽性與陰性對(duì)照孔內(nèi)，振蕩搖勻，放置在37℃環(huán)境下給予溫育30min,而后于各孔內(nèi)置入50μl 底物緩沖液，振蕩搖勻，放置在37℃環(huán)境下溫育30min，隨后將50μl終止液加入至隔孔內(nèi)， 給予輕輕搖勻， 于酶標(biāo)儀（鄭州安圖有限公司提供） 上進(jìn)行讀數(shù)。⑶TRUST（上海榮盛生物有限公司試劑）：于卡片圈內(nèi)放置50μl 血清，均勻涂抹，搖勻抗原，滴加 1 滴，將卡片放置于立體脫色搖床處，振蕩8min 搖勻，于亮光下觀察結(jié)果；⑷TPPA：各標(biāo)本均需做9 孔，于U 型反應(yīng)板內(nèi)放置標(biāo)本稀釋液，1 孔需加入 100μl，2～9孔各需加入 25μl，將 25μl 血清加入至 1 孔，給予混勻操作，取25μl 加入至2 孔，術(shù)后依次添加至9孔，于 3 孔內(nèi)將 25μl 未致敏粒子 D 液，4～9 孔加入25μlC 液，振蕩30s，將微量反應(yīng)板進(jìn)一步置入至有蓋濕盒內(nèi)，于15～30℃環(huán)境下靜置2h，而后觀察結(jié)果，TPPA 試劑盒由上海士鋒生物科技有限公司提供。

1.4 評(píng)價(jià)指標(biāo) ELISA：S/CO≥1 視作陽性；CLIA：S/CO≥1 視作陽性；TRUST：有凝集者視作陽性；TPPA：顆粒散開，陽性(+)滴度：1：80 視作陽性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS24.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資料用百分比表示，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 診斷結(jié)果 將TPPA 檢測結(jié)果視作金標(biāo)準(zhǔn)，CLIA 的診斷梅毒抗體準(zhǔn)確度為98.46%（128/130）,ELISA 為 96.92%(126/130),TRUST 為 85.38%(111/130)。TPPA 與 CLIA、ELISA 診斷準(zhǔn)確率對(duì)比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （χ2=0.504、2.285，P=0.156、0.131）；TRUST 診斷準(zhǔn)確率均低于TPPA 診斷結(jié)果,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=20.498，P=0.000）。見表 1。

表1 不同檢測方法診斷結(jié)果對(duì)比n(%)

2.2 診斷效能 CLIA、ELISA 診斷梅毒抗體的敏感度、 特異度、 陽性預(yù)測值、 陰性預(yù)測值均高于TRUST 診斷結(jié)果，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

3 討論

表2 不同檢測方法診斷效能對(duì)比n(%)

梅毒因梅毒蒼白螺旋體導(dǎo)致,可經(jīng)性行為于人群內(nèi)相互傳播，且可經(jīng)胎盤進(jìn)一步傳染胎兒，危及下一代身心健康。在我國，該疾病表現(xiàn)為爆發(fā)型增長態(tài)勢，可對(duì)患者生活質(zhì)量產(chǎn)生嚴(yán)重影響[6,7]。因此，探求有效診斷方式，控制疾病傳播顯得極為重要。

梅毒螺旋體檢查為既往常見診斷方式,通過直接免疫熒光試驗(yàn)或暗視野顯微鏡檢查法,于顯微鏡下對(duì)梅毒螺旋體運(yùn)動(dòng)方式、特征性形態(tài)給予觀察，但其易受到檢測人員技能、檢測儀器狀態(tài)、患者用藥等多種因素的制約，且臨床檢出率較低，費(fèi)力費(fèi)時(shí)，無法作為大規(guī)模篩查手段[8,9]。當(dāng)人體感染梅毒螺旋體后， 可進(jìn)一步產(chǎn)生特異性抗密螺旋體抗體以及非特異性抗心磷脂抗體[10]。CLIA、ELISA、TPPA以及TRUST 等均為臨床較為常見的血清學(xué)檢測方式，其中TRUST 可作為梅毒篩查手段，通過定量實(shí)驗(yàn)可有效評(píng)估療效， 但其存在一定的假陰性與假陽性， 難以對(duì)其進(jìn)行篩查實(shí)驗(yàn)；ELISA 以及CLIA可有效通過基因重組工程進(jìn)一步合成梅毒螺旋體多肽抗原包被于微孔滴定板處， 利于檢測人體血清內(nèi)梅毒特異性抗體，TRUST 則于抗原中加入活性炭顆粒、甲苯胺紅顆粒作為指示物，以便肉眼觀察；TPPA 法雖具有良好的特異性與穩(wěn)定性， 可對(duì)梅毒篩查顯示為陽性的標(biāo)本給予進(jìn)一步確診，但其試劑昂貴、操作復(fù)雜、耗時(shí)較長，難以進(jìn)行梅毒大規(guī)模篩查以及觀察療效[11-13]。本研究結(jié)果顯示，CLIA 診斷梅毒抗體的準(zhǔn)確度為98.46%；ELISA 為96.82%，TRUST 為 85.38%，TPPA 與 CLIA、ELISA診斷準(zhǔn)確率無明顯差異，TRUST 診斷準(zhǔn)確率明顯低于TPPA 診斷結(jié)果,且 CLIA、ELISA 診斷敏感度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值均高于TRUST 診斷結(jié)果。且禹梅等[14]研究結(jié)果顯示,CLIA、ELISA 的診斷準(zhǔn)確率分別為99.62%、99.50%, 均高達(dá)95.00%以上，與本研究結(jié)果具有一致性。鄒紅霞等[15]研究結(jié)果顯示，CLIA、ELISA 在敏感度及特異度方面無明顯差異， 而TRUST 的敏感度及特異度均明顯低于CLIA、ELISA，與本研究結(jié)果一致。究其原因?yàn)?，TRUST 檢測多為非異性抗體，故可出現(xiàn)一定生物學(xué)假陽性現(xiàn)象，多見于慢性腎炎、結(jié)核、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、病毒性肺炎以及紅斑狼瘡等疾病[16-18]。但值得注意的是，ELISA 雖具有良好的特異性以及敏感度，可作為該疾病大規(guī)模篩查手段，但同樣存在一定假陽性現(xiàn)象， 并難以反映患者是否存在現(xiàn)癥感染， 需進(jìn)一步結(jié)合臨床表現(xiàn)和相關(guān)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行判斷與確診，而CLIA 為現(xiàn)臨床檢測梅毒螺旋體特異性抗體的一種新方式，具有診斷效能高、操作簡便等優(yōu)勢， 其可顯色底物進(jìn)一步轉(zhuǎn)換為化學(xué)發(fā)光底物，利于提高穩(wěn)定性，延長發(fā)光信號(hào)時(shí)間，具有一定應(yīng)用前景，但同樣存在一定假陽性現(xiàn)象[19,20]。

綜上所述，CLIA 與ELISA 在梅毒螺旋體抗體檢測方面均具有良好診斷效能， 但臨床應(yīng)依據(jù)實(shí)際情況采取對(duì)應(yīng)檢測方法，以滿足臨床需求。