劉俊峰

（新密市中醫(yī)院普外二科，河南 新密 452370）

肝癌是臨床常見(jiàn)的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一，惡性程度高，患者預(yù)后差，死亡率目前位居所有惡性腫瘤第三位，我國(guó)屬于乙肝大國(guó)，因此乙肝病毒感染是國(guó)內(nèi)造成肝癌發(fā)病率升高的主要原因，目前臨床對(duì)于肝癌的早期診斷并開(kāi)展治療對(duì)于改善患者預(yù)后具有重要意義[1]。近年來(lái)如何早期判斷肝癌復(fù)發(fā)一直是臨床研究的熱點(diǎn),傳統(tǒng)的診斷方法是采取甲胎蛋白進(jìn)行預(yù)測(cè),但是診斷準(zhǔn)確性與可靠性值得商榷，隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展，分子生物學(xué)指標(biāo)已成為判斷腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)重要的方法，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)已經(jīng)證實(shí)肝癌屬于高代謝惡性腫瘤，耗氧量顯著高于正常組織，缺氧誘導(dǎo)因子-1α 屬于缺氧效應(yīng)調(diào)控過(guò)程中最為關(guān)鍵的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，有報(bào)道指出同肝癌發(fā)生發(fā)展以及轉(zhuǎn)移關(guān)系密切；多藥耐藥蛋白（英文全稱，MRP）過(guò)度表達(dá)則同腫瘤細(xì)胞出現(xiàn)多重耐藥關(guān)系密切,而且同腫瘤惡性生物學(xué)行為之間聯(lián)系緊密,而臨床對(duì)于兩種因子相關(guān)性研究報(bào)道較為少見(jiàn)[2]。本研究分析了肝癌組織中缺氧誘導(dǎo)因子-1α （英文全稱，HIF-1α）、 MRP 表達(dá)情況,以期為臨床提供指導(dǎo)和依據(jù)，現(xiàn)匯報(bào)如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 一般資料 選取 2017 年 2 月-2018 年 8 月在我院接受治療的肝癌患者100 例為研究對(duì)象。其中男 65 例，女 35 例，年齡 58～83 歲，平均 72.38±5.02 歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴年齡≥50 周歲；⑵經(jīng)病理檢查確診為肝癌者；⑶無(wú)其他嚴(yán)重基礎(chǔ)疾病者；排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴臨床資料不全者；⑵合并其他免疫系統(tǒng)疾病者。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)共納入病例數(shù)100 例, 其中男78例,女 22 例，年齡 60～84 歲，平均 72.35±4.13 歲；非肝癌患者納入排除標(biāo)準(zhǔn)：年齡≥50 周歲；經(jīng)病理檢查確診為非肝癌者；近期無(wú)其他腫瘤疾病者。本項(xiàng)研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)評(píng)審?fù)ㄟ^(guò)。

1.2 方法 采用免疫組化SP 法染色并進(jìn)行檢測(cè)，按照流程進(jìn)行脫蠟、水化、阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化酶、EDTA 熱抗原修復(fù)、血清封閉、孵育、DAB 顯色、脫水、透明、封片、顯微鏡下觀察等步驟進(jìn)行檢查，知陽(yáng)性反應(yīng)片為陽(yáng)性對(duì)照，PBS 代替一抗為陰性對(duì)照。所有使用試劑均由北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司購(gòu)進(jìn)，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作。

1.3 評(píng)價(jià)指標(biāo) 觀察兩組患者 HIF-1α、 MRP 表達(dá)情況， 比較不同臨床病理特征肝癌患者HIF-1α、MRP 表達(dá)情況，分析影響肝癌患者HIF-1α、 MRP表達(dá)的因素。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)采用 Excle 錄入后, 采用SPSS 11.5 軟件進(jìn)行分析。兩組患者、不同臨床病理特征肝癌患者HIF-1α、 MRP 表達(dá)情況采用例表示，采用卡方檢驗(yàn)和回歸分析法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者 HIF-1α、 MRP 表達(dá)情況的比較 表1 顯示,肝癌組織中 HIF-1α、MRP 陽(yáng)性表達(dá)率分別為 75.00%、80.00%, 均高于非肝癌組織 （χ2值=95.577、93.076，P＜0.001）。

2.2 不同臨床病理特征肝癌患者HIF-1α、 MRP表達(dá)情況的比較 表2 顯示，有肝炎史、腫瘤直徑＞5cm、包膜不完整、TNM 分期為Ⅲ+Ⅳ、分化程度為中低分化、 有淋巴轉(zhuǎn)移的肝癌患者HIF-1α、 MRP陽(yáng)性表達(dá)率較高，不同年齡、性別的肝癌患者HIF-1α、 MRP 陽(yáng)性表達(dá)率無(wú)差別。

2.3 影響肝癌患者HIF-1α、 MRP 表達(dá)的因素分析 將單因素分析有意義的因素作為自變量，將HIF-1α、 MRP 水平作為因變量進(jìn)行回歸分析，結(jié)果顯示， 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和分化程度是影響肝癌患者HIF-1α、 MRP 的因素。見(jiàn)表 3。

表2 不同臨床病理特征肝癌患者HIF-1α、MRP 表達(dá)情況的比較

表3 影響肝癌患者HIF-1α、MRP 表達(dá)的因素分析

3 討論

原發(fā)性肝癌屬于臨床常見(jiàn)的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，是目前世界范圍內(nèi)死亡率最高的癌癥之一，目前在我國(guó)肝癌發(fā)病率呈現(xiàn)逐年升高的趨勢(shì),預(yù)后極差，有報(bào)道顯示診斷后五年生存率不足5%[3]。由于肝癌發(fā)病隱匿，臨床癥狀不典型，因此多數(shù)患者就診時(shí)已處于中晚期,外科手術(shù)一直是治療肝癌的首選方法,但是外科手術(shù)治療也無(wú)法達(dá)到完全根除腫瘤的目的,術(shù)后出現(xiàn)復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移會(huì)影響患者預(yù)后[4]。目前認(rèn)為肝癌的發(fā)生和發(fā)展史多因素、多階段的過(guò)程, 一般認(rèn)為肝細(xì)胞惡性腫瘤主要是由乙肝病毒、丙肝病毒慢性感染或者黃曲霉毒素感染造成肝硬化進(jìn)而演變而來(lái)[5]。由于肝癌發(fā)病隱匿，臨床癥狀不典型，因此多數(shù)患者就診時(shí)已處于中晚期，外科手術(shù)一直是治療肝癌的首選方法,但是外科手術(shù)治療也無(wú)法達(dá)到完全根除腫瘤的目的,術(shù)后出現(xiàn)復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移會(huì)影響患者預(yù)后[6]。研究發(fā)現(xiàn)腫瘤干細(xì)胞是慢周期細(xì)胞,大部分處于細(xì)胞分裂周期的G0 和G1周期,一旦受到外界刺激情況下回表達(dá)具有化學(xué)抵抗分子或者活化的信號(hào)通路,導(dǎo)致進(jìn)行細(xì)胞分裂增殖周期,但是在手術(shù)后未被殺死腫瘤干細(xì)胞會(huì)進(jìn)入到細(xì)胞周期并參與調(diào)控腫瘤細(xì)胞增殖和分化過(guò)程,也是術(shù)后導(dǎo)致肝癌復(fù)發(fā)的重要原因[7]。病理學(xué)檢查一直是肝癌診斷的金標(biāo)準(zhǔn),但是在部分患者中可能出現(xiàn)假陰性率,而且在操作的過(guò)程中也可能導(dǎo)致腫瘤破裂引發(fā)播散種植的風(fēng)險(xiǎn)[8]。近年來(lái)化學(xué)腫瘤標(biāo)記物檢查在臨床應(yīng)用越來(lái)越廣泛,其中甲胎蛋白是原發(fā)性肝癌應(yīng)用最廣泛的標(biāo)記物,但是近年來(lái)研究顯示其缺乏敏感性與特異性，尤其是在肝炎、肝硬化患者病變急劇惡化時(shí)AFP 數(shù)值也會(huì)顯著升高，而且在妊娠或者炎癥反應(yīng)過(guò)程中甲胎蛋白也存在假陽(yáng)性的結(jié)果,而在部分原發(fā)性肝癌患者中也存在甲胎蛋白陰性或者數(shù)值較低的情況,但是目前臨床尚無(wú)更為可靠地血清標(biāo)記物取代AFP 在肝癌診斷和評(píng)估治療效果中的地位[9]。

研究顯示肝癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程涉及到多個(gè)分子通路，牽涉的基因較多，而且越來(lái)越多的研究寄希望與通過(guò)相關(guān)基因作為靶點(diǎn)可以早期對(duì)肝癌進(jìn)行診斷并開(kāi)展治療,細(xì)胞出現(xiàn)給你個(gè)異常后惡性細(xì)胞無(wú)法及時(shí)清除就會(huì)不斷生長(zhǎng),繼而形成聚集造成腫瘤形成。本研究分析了肝癌組織中缺氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）、 多藥耐藥蛋白（MRP）表達(dá)情況，HIF-1α 屬于低氧誘導(dǎo)因子家族的一種，一般在低氧狀態(tài)下會(huì)出現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài),導(dǎo)致大量的靶基因表達(dá),也可以同標(biāo)志性蛋白進(jìn)行結(jié)合對(duì)于細(xì)胞的自噬和調(diào)控[10]。近年來(lái)大量的研究發(fā)現(xiàn)腫瘤組織內(nèi)部細(xì)胞缺氧屬于惡性腫瘤生物學(xué)特征,多數(shù)患者體內(nèi)處于低氧環(huán)境，HIF-1α 可以調(diào)控下游蛋白與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)對(duì)腫瘤發(fā)生和發(fā)展產(chǎn)生影響[11]。一般在低氧狀況下腫瘤會(huì)從有氧代謝朝向無(wú)氧代謝進(jìn)行轉(zhuǎn)變,HIF-1α 可以降低脂質(zhì)代謝的因子表達(dá)抑制脂肪酸氧化過(guò)程,因此對(duì)于肝臟惡性腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖過(guò)程產(chǎn)生影響；HIF-1α 還可以調(diào)節(jié)人體血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程，增加其mRNA 穩(wěn)定性，提升了血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子轉(zhuǎn)錄活性,促進(jìn)了腫瘤血管形成[12]。此外HIF-1α 同肝癌的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移之間關(guān)系密切,該因子可以上調(diào)體內(nèi)多種因子的活性為腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移提供分子生物學(xué)基礎(chǔ),同時(shí)可以調(diào)節(jié)體內(nèi)趨化因子促進(jìn)細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力。近年來(lái)還不斷有研究發(fā)現(xiàn)HIF-1α 同肝癌治療過(guò)程中的治療抵抗存在關(guān)系，不僅參與化療和放療的低氧耐藥情況，同時(shí)低氧環(huán)境會(huì)激活HIF-1α 蛋白啟動(dòng)MDR1 轉(zhuǎn)錄過(guò)程，形成P-糖蛋白后將藥物從細(xì)胞內(nèi)泵出，將更低了細(xì)胞內(nèi)的藥物濃度[13]。近年來(lái)腫瘤治療的多藥耐藥現(xiàn)象較為嚴(yán)重,也是影響惡性腫瘤預(yù)后的重要因素,多藥耐藥蛋白屬于跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白超家族成員之一，其參與多種腫瘤細(xì)胞耐藥過(guò)程，多藥耐藥蛋白具有轉(zhuǎn)運(yùn)的疏水性,因此通過(guò)協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)的機(jī)制對(duì)多種化療藥物達(dá)到作用部位數(shù)量以及藥物分布進(jìn)行調(diào)控[14]。多藥耐藥相關(guān)蛋白在中低分化癌的表達(dá)明顯高于高分化的癌,說(shuō)明中低分化癌與原發(fā)性耐藥密切相關(guān),但是也有學(xué)者指出其表達(dá)低于癌旁組織及正常組織,因此是否與原發(fā)性肝癌的耐藥性有關(guān)還有待于進(jìn)一步探討。此外有學(xué)者指出MRP 在癌旁組織中的表達(dá)高于腫瘤組織及正常組織，在伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的臨床病人腫瘤組織中MRP 的表達(dá)顯著高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者組的腫瘤組織，提示MRP 的表達(dá)水平可能與肝癌轉(zhuǎn)移存在一定的關(guān)系[15]。

本研究顯示，肝癌組織中HIF-1α、 MRP 陽(yáng)性表達(dá)率分別為75.00%、80.00%,均高于非肝癌組織,說(shuō)明在肝癌患者存HIF-1α、MRP 陽(yáng)性表達(dá)升高。通過(guò)對(duì)不同病理特征肝癌患者分析發(fā)現(xiàn)， 具有肝炎病史、腫瘤直徑較大、包膜不完整、分期靠后、中低分化以及伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肝癌患者HIF-1α、MRP 陽(yáng)性表達(dá)率較高。通過(guò)單因素分析發(fā)現(xiàn)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和分化程度是影響肝癌患者HIF-1α、 MRP的因素。

綜上所述，肝癌組織中HIF-1α、 MRP 陽(yáng)性表達(dá)率較高, 且受患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和分化程度的影響。