王鑫鑫 河南省民權(quán)縣綜合檢驗檢測中心

游離氨基酸組成是生物技術(shù)和生物醫(yī)學(xué)代謝研究的一個重要指標(biāo)，也是食品營養(yǎng)分析中常用的一個參數(shù)。高效液相色譜和氨基酸自動分析儀是氨基酸定性和定量分析的常用儀器，全自動化氨基酸分析儀的移動相和試劑價格昂貴，因此氨基酸的成分和含量采用高效液相色譜分析。氨基酸分析一般分為生物液體和食物，檢測方法為氨基酸分析儀和高效液相色譜法。在檢測實際食物成分的過程中，氨基酸分析儀的方法有許多優(yōu)點，例如易用性。但是，在實踐中，必須認(rèn)識到氨基酸分析儀比其他檢測方法更昂貴。此外，由于標(biāo)準(zhǔn)和環(huán)境的差異，可靠性得不到有效保證。如果氨基酸是液相色譜分析的，通常是人工推導(dǎo)出來的。但是，這種處理方法勞動強(qiáng)度高，步驟復(fù)雜，重復(fù)性差。這項研究選擇了一些常用的衍生物試劑，這些試劑在網(wǎng)上衍生后經(jīng)過直接處理和分析，從而消除了傳統(tǒng)操作造成的錯誤。本文試劑研究結(jié)果表明，本文采用的分析方法是重復(fù)的，值得推廣。

一、實驗準(zhǔn)備

（一）檢測儀器與試劑的準(zhǔn)備

高效液相色譜是常用的色譜檢測方法。其基本原理是將不同溶劑作為液相導(dǎo)入到具有固定相的彩色列中。分離待試驗物體的組成后，應(yīng)使用有關(guān)設(shè)備進(jìn)行檢測，完成樣品分析。目前，高效液相色譜已廣泛應(yīng)用于化學(xué)和醫(yī)學(xué)等許多領(lǐng)域。隨著高效液相色譜的廣泛應(yīng)用，其技術(shù)和設(shè)備不斷更新。目前常用的高效液相色譜設(shè)備是敏捷1100高效液相色譜、賽多爾天平TB-215D等。這些設(shè)備具有靈活性和高精度，能夠滿足日常檢測需求。目前，高效液相色譜中常用的試劑主要是含有10mg/mL的鄰苯二甲酸酯溶液、0.4N和ph10.4的硼酸緩沖溶液。這些試劑易于設(shè)置，可以滿足人們的日常檢測需要。此外，還需要制備三乙胺等試劑，三乙胺是常用溶劑和催化劑之一，在高效液相色譜應(yīng)用中發(fā)揮著重要作用。

（二）樣品預(yù)處理方法分析

在進(jìn)行高效液相色譜檢測之前，必須進(jìn)行必要的預(yù)處理，以確保檢測的順利進(jìn)行和結(jié)果的有效性。最可靠的預(yù)處理方法是在試管中預(yù)先稱重一定數(shù)量的食物，具體數(shù)量必須根據(jù)實際情況確定。然后按比例將鹽酸添加到噴嘴中。然后，它執(zhí)行水解等活動。以上處理后，用容積瓶等進(jìn)行定量工作以便于后續(xù)測試。

二、結(jié)果與討論

1.分析氨基酸的常用推導(dǎo)方法有：PA推導(dǎo)方法、fdb推導(dǎo)方法、pit推導(dǎo)方法等。為確保衍生物效應(yīng)，分別選擇了PA和FMOC作為初級衍生物和二級氨基酸衍生物。在一定的濃度范圍內(nèi)，二極管陣列探測器可以顯示良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.9988～ 0.9999。不同濃度氨基酸的重復(fù)實驗精度低于5%。當(dāng)信噪比為3時，二極管網(wǎng)絡(luò)檢測線檢出限為1～4mol。在測量樣品時，回收率可達(dá)90%至97%，取得最佳結(jié)果。但是，就固體樣品的測量而言，只能得到78%至89%的回收率，樣品的狀況也與預(yù)處理有關(guān)。PA推導(dǎo)方法具有反應(yīng)速度快、靈敏度高、不干擾過強(qiáng)的衍生物分離等特點，但這種推導(dǎo)方法不能直接與氨基酸及其衍生物反應(yīng)，具有不穩(wěn)定的缺點。由于衍生物衰減速度快，人工分流操作時間難以保證均勻性，成為液相檢測氨基酸常規(guī)分析中最不穩(wěn)定的因素。本文選用FM0C作為二次氨基酸衍生物試劑，采用自動取樣器進(jìn)行在線漂移，有效消除了離線漂移和手動操作引起的誤差，降低了工作強(qiáng)度，提高了漂移精度。

2.雖然顯示器的靈敏度高于二極管陣列顯示器，但它們基本上對酪氨酸沒有反應(yīng)。由于一般樣品中氨基酸的實際含量對二極管陣列探測器來說是足夠的，而且當(dāng)探測器串聯(lián)連接時，屏幕光源探測器在二極管陣列后面有大量死量，定量檢測主要基于二極管陣列探測器的結(jié)果。光分析儀的數(shù)據(jù)只有在樣品溶液濃度低于50pmol/μ時才能量化，但酪氨酸必須始終使用二極管網(wǎng)絡(luò)信號量化。表征是分析和檢測氨基酸的一個常見問題。在僅僅確定氨基酸的保存期限時，往往難以確保其可靠性。本研究采用連續(xù)使用方法。一方面對二極管網(wǎng)絡(luò)檢測特性進(jìn)行定位，另一方面以兩種不同的探測器作為定性參考。使用這種方法在某種程度上提高了定性分析的準(zhǔn)確性。該研究方法可同時測量食物中的17種氨基酸，具有高質(zhì)量分析和高質(zhì)量、準(zhǔn)確分析的優(yōu)點。此外，本文件使用的研究方法不需要購買特殊的分析工具，測試費用低，可以推廣。

三、結(jié)束語

綜上所述，高效液相色譜的應(yīng)用對于測量食品中氨基酸含量十分重要。本文通過分析相關(guān)數(shù)據(jù)，研究了高效液相色譜中使用的設(shè)備和試劑，探討了高效液相色譜分析方法和主要結(jié)果分析要點。這些研究有助于高效液相色譜的應(yīng)用和食品檢測的發(fā)展。