韓 影，程 薇，刁文卓

（吉林省吉林市中心醫(yī)院1.病理科；2.神經(jīng)外科，吉林 吉林 132011）

結直腸癌是消化道內最常見的惡性腫瘤之一，近年來隨著生活水平的提高及不健康的飲食習慣，其發(fā)病率也逐漸攀升，其危害非常大。資料顯示，該病在我國境內呈現(xiàn)出同比國際水平每年3%增速更高的漲幅，甚至可達5%，新發(fā)病例可高達40萬/年。臨床中，對于處于同樣年齡段、分期，甚至性別均相同的病例，經(jīng)同樣藥物采用，所獲療效具較大差異性。鑒于此，基于同病異治理念的個體化靶向藥物治療，于患者及醫(yī)生均為佳選。

E2F1是調節(jié)細胞周期重要的影響因子之一，同時參與細胞的代謝、增殖及凋亡，是腫瘤發(fā)生、進展的關鍵中心環(huán)節(jié)，可作為一個潛在的治療靶點，對腫瘤的治療產生重要的影響[1]。LGR5在多種腫瘤組織中過表達，是腫瘤干細胞標記物中非常有影響力的一個標記物，特別是在結直腸癌中與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有一定關聯(lián)[2]。

1 材料與方法

1.1 材料

收集我院2016～2019年間手術及內鏡活檢的石蠟包埋標本200例，其中結直腸癌患者80例，腺瘤患者120例，所有病例均按照消化系統(tǒng)WHO標準進行分期，結直腸癌患者高分化25人、中分化30人、低分化25人進行分組，腺瘤患者低級別60人，高級別60人，隨機自腫瘤患者中采集20人癌旁正常組織進行檢測，并納入對照組。納入試驗者在術前均未接受放化療。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑

北京中衫金橋生物技術有限公司所予提供的鼠抗人E2F1單克隆抗體，福州邁新生物技術有限公司所予提供的DAB試劑、SP染色試劑盒，LGR5鼠抗人多克隆抗體。

1.2.2 主要儀器

免疫組化配套儀器，石蠟切片機，電熱恒溫干燥箱，光學顯微鏡等。

1.2.3 免疫組化染色

針對所有病理切片進行連續(xù)切片，厚度保持在2.5 μm，從中擇取一組，遵HE染色程序行標準染色，經(jīng)SP免疫組化法完成指標E2F1、LGR5的檢測工作。

1.2.4 結果判定

基于半定量雙盲法，結合顯微鏡下所觀測到的免疫組化陽性細胞染色情況予以結果評價，一抗E2F1抗體呈陽性反應判斷依據(jù)為細胞核呈現(xiàn)出棕黃色、棕褐色特征，LGR5抗體陽性反應判斷依據(jù)為細胞膜與細胞漿經(jīng)觀測均有棕黃色顆粒呈現(xiàn)，陰性對照為PBS代替一抗，針對每張切片均予以5個高倍視野隨機觀察，每個視野內有200個腫瘤細胞呈現(xiàn)，其中陽性細胞數(shù)計數(shù)達50%及以上判定強陽性診斷（+++），介于49%～25%判定陽性（++），介于25%～5%范圍評定弱陽性（+），而低于5%即為陰性判定（—）。

1.2.5 統(tǒng)計方法

對研究所獲數(shù)據(jù)倶以全新數(shù)據(jù)模型構建，予以平均值±標準誤（MEAN±SE）表示，并經(jīng)Graph Pad Instat 5.0完善統(tǒng)計學分析，多組間比較實施單因素方差分析，兩組間比較實施Student’st檢驗。結果以P＜0.05呈現(xiàn)，示意差異具統(tǒng)計學意義。

2 結 果

研究表明E2F1抗體陽性反應為細胞核著色，我們的研究結果表明，正常結直腸粘膜組織和結直腸腺瘤中陽性表達較明顯，在結直腸癌組織中低表達或不表達（P＜0.05），而腫瘤組織中高、中、低分化程度之間則沒有明顯的顯著差異。說明E2F1抗體的陽性表達與結直腸癌的惡性程度呈負相關。見表1。

表1 E2F1在結直腸癌及腺瘤中的表達

3 討 論

社會經(jīng)濟、科技以及醫(yī)療水平的高速發(fā)展與大幅進步，使得近年臨床所予結直腸癌可實施的治療方案與手段呈現(xiàn)突飛猛進的發(fā)展態(tài)勢，但并不與之呈相應發(fā)展的民眾非健康生活方式，如飲食方式及飲食習慣等諸多問題的出現(xiàn)，結直腸癌的發(fā)病率逐年上升，且越來越年輕化。并且結直腸癌患者約占所有腸癌的90%左右，甚至占比更多，所以臨床醫(yī)生更迫切的需要尋找有效的診斷方法和治療手段，從而延長患者生命并提高其生活質量[3]。

（1）E2F1是Helin于1992年最先篩選出來的，也是轉錄因子E2F家族8個家族成員之一，E2F1作為轉錄因子能夠參與調節(jié)細胞周期，但是高表達的E2F1的也同樣能誘導諸多類型的細胞凋亡。在一些腫瘤如乳腺癌、肺癌等腫瘤中，E2F1是促進細胞癌變的。在我們的研究中，我們發(fā)現(xiàn)正常結直腸粘膜的E2F1表達明顯，在腺瘤中表達有所下降，特別是低級別瘤變的組織中，而癌組織中表達明顯減少，這就說明在結直腸癌患者中，E2F1起到一個腫瘤抑制的作用[4]。

（2）LGR5廣泛分布在人體多種器官，是G蛋白偶聯(lián)激素受體家族成員之一，也是一種獨立的G蛋白偶聯(lián)受體分子，亦被稱作G蛋白偶聯(lián)受體49（GPR49）。許多國內外研究均證實LGR5在多種腫瘤中高表達，如結直腸癌，肝細胞癌，卵巢癌，以及皮膚基底細胞癌等[5]。新近有研究表明LGR5在結直腸系膜隱窩的基底部高表達，提示此處可能為干細胞聚集的位置。也有文獻顯示在毛囊干細胞LGR5也會高表達，因此，我們推測LGR5在干細胞中可能起到重要作用。

結直腸癌的發(fā)生是一個復雜過程，可以有多種因素參與，E2F1、LGR5即為與其呈密切相關的因子，檢測所得數(shù)據(jù)顯示，前者與腫瘤惡性程度為正向相關關系，后者則為負相關。此外，本研究結果示，E2F1、LGR5在腫瘤發(fā)生中呈現(xiàn)出相互抑制特性。在臨床實踐中，E2F1、LGR5可視為結直腸癌檢測與診斷的突出且重要標志物，并經(jīng)結合其他臨床參數(shù)，為治療方案制定與調整提供方向，且可評價預后[6]。采取有效方法實現(xiàn)對此兩種指標表達水平的控制，或可成為結直腸癌臨床有效治療的新思路與方向。