美日阿依·買(mǎi)合買(mǎi)提，朱夢(mèng)婷，牟健，邵焱焱，趙宗勝

(石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，新疆 石河子 832003)

目前大多綿羊(Ovis aries)都屬于季節(jié)性繁殖動(dòng)物，尤其哈薩克羊作為本地典型的季節(jié)性繁殖綿羊，參與了優(yōu)良母系品種的培養(yǎng)(如新疆的細(xì)毛羊、卡拉庫(kù)爾羊)。2-6月是哈薩克母羊的乏情期，因?yàn)榇藭r(shí)間段大多母羊的生殖器官無(wú)明顯變化，卵泡發(fā)育停止、不排卵，也不接受公羊的交配，進(jìn)而導(dǎo)致乏情。哈薩克羊一般年產(chǎn)一胎，其季節(jié)性發(fā)情、產(chǎn)羔數(shù)少是本地養(yǎng)殖效率較低的主要原因。季節(jié)性發(fā)情主要涉及下丘腦-垂體-卵巢(hypothalamic- pituitary-gonadal axis，HPG) 性腺軸系統(tǒng)的調(diào)配控制[1]，GOODMAN等[2]對(duì)比研究薩?？四秆蛟诎l(fā)情期和乏情期體內(nèi)生殖激素的變化發(fā)現(xiàn)，成年的薩?？四秆蛟?個(gè)季節(jié)中，其雌激素含量的變化相對(duì)穩(wěn)定。近年來(lái)，研究者對(duì)季節(jié)性繁殖動(dòng)物發(fā)情調(diào)控機(jī)制的研究不光集中在光周期調(diào)控通路上，營(yíng)養(yǎng)因素對(duì)動(dòng)物繁殖活動(dòng)的影響也倍受關(guān)注[3]。研究表明[4]母羊的營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)能夠?qū)δ秆蚍敝承阅墚a(chǎn)生遠(yuǎn)大的影響，高營(yíng)養(yǎng)水平可保持在生殖激素的正常分泌，且可使母畜的發(fā)情期提前發(fā)生。如綿羊機(jī)體發(fā)生營(yíng)養(yǎng)不足,會(huì)導(dǎo)致母羊子宮和卵巢發(fā)育不健全、初情期延遲、出現(xiàn)不發(fā)情現(xiàn)象，甚至出現(xiàn)流產(chǎn)、胎兒發(fā)育不良、死羔等現(xiàn)象[5]。日糧中的鈣和磷是孕酮黃體的合成、卵母細(xì)胞的成熟、能量代謝、骨骼肌發(fā)育等繁殖性能所需的重要物質(zhì)[6]。SHORT R E等[7]提出，因長(zhǎng)期能量的供應(yīng)不足，性成熟推遲的母牛會(huì)造成初情期和產(chǎn)后乏情期延長(zhǎng)，這樣會(huì)直接拉長(zhǎng)產(chǎn)犢間隔時(shí)間和降低繁殖能力。

本研究選擇季節(jié)性發(fā)情的哈薩克羊?yàn)檠芯繉?duì)象，在乏情期通過(guò)補(bǔ)飼精料，檢測(cè)其誘導(dǎo)發(fā)情的效果；同時(shí)測(cè)定哈薩克發(fā)情母羊與不發(fā)情母羊外周血液中的E2(雌二醇)、FSH(促卵泡激素)和LH(促黃體素)以及P4(孕酮)的差異，分析母羊生殖激素變化差異，進(jìn)而解析通過(guò)在乏情期補(bǔ)飼精料誘導(dǎo)哈薩克母羊發(fā)情生殖激素變化規(guī)律。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物分組和飼喂

在乏情期(3～5月)選擇3～4周歲、體重45～55 kg的36只哈薩克成年母羊作為試驗(yàn)對(duì)象，隨機(jī)分成試驗(yàn)組(18只)和對(duì)照組(18只)。試驗(yàn)組在飼喂苜蓿的基礎(chǔ)上，每只羊每天補(bǔ)飼400 g精料(天康672)，對(duì)照組僅飼喂苜蓿。每天早晨8點(diǎn)及晚上7點(diǎn)統(tǒng)一飼喂，兩組自由飲水，保證每天的浪費(fèi)量不超過(guò)飼喂量的5%，兩組飼料的具體營(yíng)養(yǎng)成分見(jiàn)表1。保證兩組的飼養(yǎng)條件以及免疫措施保持一致，試驗(yàn)動(dòng)物統(tǒng)一飼養(yǎng)于石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院實(shí)驗(yàn)站。

表1 兩組飼料的營(yíng)養(yǎng)成分表

1.2 發(fā)情鑒定

采用公羊試情的方式進(jìn)行發(fā)情鑒定，試情的時(shí)間是在補(bǔ)飼精料一個(gè)月后，試情頻率間隔為早晚各一次，根據(jù)試情實(shí)際情況，重點(diǎn)對(duì)其外陰部進(jìn)行觀(guān)察，并仔細(xì)記錄變化規(guī)律。當(dāng)母羊處于發(fā)情期時(shí)，通常表現(xiàn)為高聲咩鳴、排尿頻繁、搖動(dòng)尾巴等狀態(tài)，同時(shí)，做出一些接近公羊的行為，并發(fā)出愿意被爬跨、交配的信號(hào)。并且外陰部出現(xiàn)明顯紅潤(rùn)腫脹和流出粘液之類(lèi)情況。相比之下，處于乏情期的母羊則會(huì)遠(yuǎn)離公羊，拒絕與其交配。

1.3 血清樣品及激素測(cè)定

將試驗(yàn)羊中發(fā)情母羊(11只)和不發(fā)情母羊(25只)，每天清晨7：00采用不抗凝的采血管進(jìn)行血液采集，采集量為3 mL·次-1，合計(jì)40 d。將采集的血液放在37 ℃靜置2 h，以每分鐘3 000 r的速度離心15 min后，提取上清液放到1.5 mL離心管中，在-20 ℃冰箱中保存，采用酶聯(lián)免疫的方法(ELISA)對(duì)血清中生殖激素P4、E2、LH 和 FSH 進(jìn)行檢測(cè)。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)用SPSS13.0和EXCEL等統(tǒng)計(jì)軟件處理,對(duì)其數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 乏情期補(bǔ)飼精料對(duì)母羊發(fā)情影響

乏情期試驗(yàn)綿羊的發(fā)情記錄見(jiàn)表2，乏情期試驗(yàn)組發(fā)情母羊8只，發(fā)情率達(dá)44%，顯著高于對(duì)照組(16%)(P<0.05)。

表2 乏情期發(fā)情及不發(fā)情綿羊數(shù)量

2.2 在乏情期發(fā)情母羊與不發(fā)情母羊血液中四種生殖激素分泌趨勢(shì)的對(duì)比

在乏情期，發(fā)情母羊與不發(fā)情母羊孕酮濃度變化有差別，發(fā)情母羊血液中孕酮濃度第6天開(kāi)始緩慢上升，第14天開(kāi)始下降；與不發(fā)情母羊相比，差異顯著(P<0.05)，其分泌趨勢(shì)呈波動(dòng)式變化。在發(fā)情周期的前5天和后5天不發(fā)情母羊分泌孕酮極顯著(P<0.01)高于發(fā)情母羊(圖1)。

*表示差異顯著(P<0.05)，** 表示差異極顯著(P<0.01)。

在乏情期，發(fā)情母羊與不發(fā)情母羊雌二醇分泌趨勢(shì)不同，分泌量也呈現(xiàn)波動(dòng)式變化；發(fā)情母羊雌二醇分泌量在發(fā)情周期的第4天、第5天和第10天與不發(fā)情母羊相比差異顯著(P<0.05)；第16天，發(fā)情母羊分泌的雌二醇迅速上升，第17達(dá)到最高峰，隨后開(kāi)始急速下降，這三天都極顯著(P<0.01)高于不發(fā)情母羊(圖2)。

*表示差異顯著(P<0.05)，**表示差異極顯著(P<0.01)。

在乏情期，發(fā)情母羊與不發(fā)情母促黃體素分泌量變化不同，發(fā)情母羊LH濃度水平在發(fā)情周期的第4、17天顯著上升，差異極顯著(P<0.01)；第17天達(dá)到分泌峰值，呈現(xiàn)脈沖式分泌；第16天和第18天與不發(fā)情母羊相比差異顯著(P<0.05)，高于不發(fā)情母羊(圖3)。

*表示差異顯著(P<0.05)，**表示差異極顯著(P<0.01)。

在乏情期，發(fā)情母羊與不發(fā)情母促卵泡素濃度變化趨勢(shì)不同，F(xiàn)SH與LH的分泌都呈現(xiàn)脈沖式分泌，可見(jiàn)兩者分泌規(guī)律相似(圖4)。

*表示差異顯著(P<0.05)，**表示差異極顯著(P<0.01)。

發(fā)情母羊分泌的促卵泡素濃度在發(fā)情周期的第5天出現(xiàn)上升趨勢(shì)，明顯高于其余天數(shù)，差異顯著(P<0.05)；第15天含量達(dá)到最高值，之后急劇下降，差異極顯著(P<0.01)，高于不發(fā)情母羊(圖4)。

3 討論

3.1 乏情期提高營(yíng)養(yǎng)水平對(duì)舍飼綿羊發(fā)情的影響

新疆哈薩克綿羊是典型的季節(jié)性發(fā)情動(dòng)物，其季節(jié)性發(fā)情受較多因素的影響，如營(yíng)養(yǎng)、光照、飼喂環(huán)境等，其中營(yíng)養(yǎng)因素尤為重要。母羊長(zhǎng)期營(yíng)養(yǎng)不足會(huì)延緩其初情期，甚至導(dǎo)致排卵障礙，進(jìn)而影響其繁育性能[8]。朱夢(mèng)婷等[9]通過(guò)在非繁殖季節(jié)對(duì)哈薩克母羊補(bǔ)飼高能飼料發(fā)現(xiàn)，其發(fā)情率達(dá)到31.25%。趙有璋等[10]研究表明，在發(fā)情季節(jié)短期進(jìn)行優(yōu)飼精料的補(bǔ)充有利于綿羊發(fā)情。這些研究說(shuō)明了在一定范圍內(nèi)適量提高母羊營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)可以誘導(dǎo)綿羊在乏情期發(fā)情。因此，當(dāng)機(jī)體進(jìn)入乏情期時(shí)，對(duì)綿羊進(jìn)行短期優(yōu)飼，能夠有效的增強(qiáng)其營(yíng)養(yǎng)的補(bǔ)充并且能夠誘導(dǎo)母羊在斷奶后出現(xiàn)發(fā)情以及排卵的情況[11]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，舍飼情況下每只羊每天平均采食量為1.5 kg苜蓿，其中含粗蛋白16.04%、粗灰分9.11%、粗脂肪2.74%、鈣1.43%以及磷為0.15%，其攝入量均以及達(dá)到美國(guó)制定的NRC綿羊飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)(1985年)，能夠符合成年母羊營(yíng)養(yǎng)的需求。對(duì)于試驗(yàn)組的綿羊，除了滿(mǎn)足此標(biāo)準(zhǔn)之外，額外補(bǔ)飼500 g·只-1的精料，飼料中含粗蛋白18.72%、粗灰分11.03%、粗脂肪3.21%、鈣1.5%以及磷0.4%，補(bǔ)給精料充分提高了機(jī)體營(yíng)養(yǎng)水平，從而為發(fā)情提供了營(yíng)養(yǎng)儲(chǔ)備。

3.2 P4、E2、LH、FSH的濃度變化對(duì)乏情期綿羊發(fā)情的影響

綿羊季節(jié)性發(fā)情涉及下丘腦-垂體-卵巢系統(tǒng)的調(diào)控。雌激素對(duì)動(dòng)物性器官的正常發(fā)育有重要作用，也對(duì)機(jī)體正常生殖功能的維持來(lái)說(shuō)也極為重要，雌激素是一種綿羊發(fā)情機(jī)制中有著關(guān)鍵作用的類(lèi)固醇激素[12]。促卵泡素是對(duì)卵泡發(fā)育有重大作用的糖蛋白激素，并且對(duì)發(fā)情后的恢復(fù)起關(guān)鍵性作用。而孕酮能夠正負(fù)反饋?zhàn)饔糜诖贵w促性腺激素，進(jìn)而調(diào)節(jié)綿羊發(fā)情。母羊發(fā)情機(jī)制中孕酮類(lèi)似于“按鈕”，具有“開(kāi)啟”母羊發(fā)情作用，能夠改變母羊卵巢的活動(dòng)形態(tài)，導(dǎo)致母羊能夠發(fā)情和排卵[13]。動(dòng)物體內(nèi)孕酮濃度過(guò)高會(huì)抑制雌二醇的分泌，進(jìn)而導(dǎo)致母羊不能發(fā)情。人為降低孕酮濃度可作為在乏情季節(jié)讓母畜出現(xiàn)發(fā)情狀況的一個(gè)前提條件，并且能夠成功進(jìn)入下一個(gè)發(fā)情周期的有利手段，這與本研究出來(lái)的結(jié)果相似[14-15]。我們可推測(cè)，在乏情季節(jié)機(jī)體孕酮濃度過(guò)高可能是導(dǎo)致綿羊不發(fā)情的重要原因之一。趙松華等[16]研究中表明，綿羊體內(nèi)雌二醇分泌量的提升能作為綿羊在乏情季節(jié)發(fā)情的前提條和典型特征。田占偉等[17]發(fā)現(xiàn)，哈薩克綿羊體內(nèi)雌二醇分泌量在發(fā)情期迅速上升至發(fā)情周期中的最高分泌值，而其分泌量在黃體期維持較低水平，這與本研究結(jié)果相同。乏情期綿羊體內(nèi)雌二醇分泌量的升高，可以作為乏情期綿羊發(fā)情鑒別的可靠方法。

LH對(duì)于卵泡成熟以及雌激素的釋放具有很好的促進(jìn)作用。本研究發(fā)現(xiàn)，乏情期發(fā)情綿羊在特定日期LH有顯著提升趨勢(shì)，這說(shuō)明乏情期綿羊出現(xiàn)發(fā)情排卵時(shí)，其體內(nèi)的LH分泌量顯著高于不發(fā)情綿羊。這一結(jié)果和前人研究中得出的LH在乏情期保持基礎(chǔ)分泌水平顯示的結(jié)果相同[18-20]。祁云霞等[21]研究得出，當(dāng)巴美肉羊處于發(fā)情狀態(tài)時(shí)，其分泌的激素中LH和FSH分泌的形態(tài)呈現(xiàn)出脈沖式釋放，且發(fā)情的過(guò)程中均呈現(xiàn)出一個(gè)峰值，此研究與本研究結(jié)果相同。LH和FSH在機(jī)體乏情狀態(tài)時(shí)濃度會(huì)在一個(gè)較低值，一旦進(jìn)入發(fā)情階段后，LH和FSH的濃度會(huì)出現(xiàn)上升的情況。可認(rèn)為高濃度的LH和FSH是小尾寒羊常年發(fā)情的一個(gè)原因[22-23]。

本研究發(fā)現(xiàn)，在乏情期補(bǔ)飼精料可誘導(dǎo)哈薩克母羊發(fā)情。發(fā)情母羊與不發(fā)情母羊在乏情期時(shí)外周血液中E2和P4呈波動(dòng)式變化，LH和FSH呈脈沖式變化。因此，建議個(gè)體養(yǎng)殖或集約化養(yǎng)殖在實(shí)際生產(chǎn)過(guò)程中，應(yīng)當(dāng)結(jié)合自身的養(yǎng)殖條件在乏情期適量補(bǔ)飼精料可以作為誘導(dǎo)綿羊發(fā)情的手段，這能夠有效地誘導(dǎo)母羊提前進(jìn)入發(fā)情期，提高其利用價(jià)值，且提高其繁殖效率。