紀(jì)向云 印漢 任小青 李德軍 夏志輝

摘 ?要：小熱激蛋白（small heat shock protein， sHSP）是一類脅迫誘導(dǎo)蛋白，不僅參與植物發(fā)育還響應(yīng)生物與非生物脅迫。本研究通過(guò)分析轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)獲得橡膠樹12個(gè)sHSP基因家族成員。生物信息學(xué)分析和表達(dá)譜分析結(jié)果表明：蛋白保守結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)顯示12個(gè)sHSP均具有α-晶體蛋白保守結(jié)構(gòu)域;二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)結(jié)果顯示，12個(gè)sHSP均由α-螺旋、β-轉(zhuǎn)角、延伸鏈和大量的隨機(jī)卷曲組成。通過(guò)RT-PCR技術(shù)分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)這12個(gè)sHSP家族基因在橡膠樹不同組織和葉片不同發(fā)育時(shí)期中表達(dá)有明顯差異，HbsHSP15.8、HbsHSP16.2、HbsHSP17.3、HbsHSP17.4、HbsHSP17.5b、HbsHSP18.2、HbsHSP18.3、HbsHSP22.5、HbsHSP22.6和HbsHSP23.9在膠乳中高表達(dá)，HbsHSP17.4在樹皮中高表達(dá)，HbsHSP17.5a在樹莖中高表達(dá)，HbsHSP25.8則在樹葉中表達(dá)量最高。乙烯利處理后，12個(gè)sHSP家族基因的表達(dá)總體呈下降趨勢(shì)。在不同死皮等級(jí)橡膠樹中12個(gè)sHSP家族基因的表達(dá)也具有明顯差異，與健康樹相比，HbsHSP15.8、HbsHSP17.4、HbsHSP17.5a、HbsHSP17.5b、HbsHSP18.2、HbsHSP18.3、HbsHSP22.6、HbsHSP23.9和HbsHSP25.8在死皮樹中的表達(dá)量呈下降趨勢(shì);HbsHSP16.2、HbsHSP17.3和HbsHSP22.5的表達(dá)量呈上升趨勢(shì)。因此推測(cè)橡膠樹sHSP家族基因可能參與橡膠樹生物與非生物逆境脅迫響應(yīng)，以及可能在乙烯作用途徑中發(fā)揮作用。

關(guān)鍵詞：橡膠樹;小熱激蛋白;表達(dá)譜分析;脅迫響應(yīng)

中圖分類號(hào)：Q813.3 ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

Abstract： Small heat shock protein （sHSP） is a type of stress-inducing protein that not only participates in plant development but also responds to biotic and abiotic stresses. In this study， 12 sHSP gene family members of Hevea brasiliensis were obtained by analyzing transcriptome data. The results of bioinformatics analysis and expression profile analysis showed that all 12 sHSPs had α-crystallin conserved domains. The secondary structure prediction results showed that the 12 sHSPs were all composed of α-helix， β-turn， extended strand and a great quantity of random coils. RT-PCR analysis showed the expression of the 12 sHSP family genes in different tissues and developmental stages were significantly different， HbsHSP15.8， HbsHSP16.2， HbsHSP17.3， HbsHSP17.4， HbsHSP17.5b， HbsHSP18.2， HbsHSP18.3， HbsHSP22.5， HbsHSP22.6 and HbsHSP23.9 were highly expressed in latex， HbsHSP17.4 was highly expressed in bark， HbsHSP17.5a was highly expressed in tree stems， and HbsHSP25.8 was highly expressed in leaves. After ethephon treatment， the expression of the 12 sHSPs family genes showed an overall downward trend. The expression of the 12 sHSPs family genes in H. brasiliensis of different tapping panel dryness grades was also significantly different. The expression levels of HbsHSP15.8， HbsHSP17.4， HbsHSP17.5a， HbsHSP17.5b， HbsHSP18.2， HbsHSP18.3， HbsHSP22.6， HbsHSP23.9 and HbsHSP25.8 in diseased trees were significantly lower than that in healthy trees. The expression levels of HbsHSP16.2， HbsHSP17.3 and HbsHSP22.5 were significantly higher than that of healthy trees. It indicates that the sHSP family genes of H. brasiliensis may be involved in the response of rubber tree to biotic and abiotic stresses， and they may play an important role in ethylene pathway.

Keywords： Hevea brasiliensis; small heat shock protein; expression profiles analysis; stress response

DOI： 10.3969/j.issn.1000-2561.2021.12.007

熱激蛋白（heat shock protein， HSP）又稱熱休克蛋白，是指生物體遭受物理、化學(xué)和生物等脅迫刺激后，大量表達(dá)或者新合成的一類高度保守的蛋白質(zhì)。HSP廣泛存在于各種生物體內(nèi)，在結(jié)構(gòu)上高度保守，根據(jù)分子量大小將HSP分為HSP100、HSP90、HSP70、HSP60、sHSP家族[1]。小熱激蛋白（small heat shock protein， sHSP）是植物中含量最豐富的熱激蛋白，分子量約為12～ 42 kDa，多數(shù)為15～27 kDa。植物sHSP由核內(nèi)多基因家族編碼，并且其sHSP的數(shù)量因植物種類而異。如擬南芥有19個(gè)sHSP[2]，水稻有23個(gè)sHSP[3]，楊樹有36個(gè)sHSP[4]，辣椒有35個(gè)sHSP[5]，番茄有42個(gè)sHSP[6]。

在正常生長(zhǎng)情況下，植物組織中sHSP基因家族表達(dá)量非常低，而一旦熱激或其它逆境脅迫誘導(dǎo)刺激，sHSP基因家族的表達(dá)量迅速增加，同時(shí)生物體對(duì)逆境脅迫的耐受能力也會(huì)提高。水稻多重應(yīng)激反應(yīng)基因3（multiple stress-responsive gene 3， OsMSR3）是一個(gè)sHSP基因，其表達(dá)在提高擬南芥對(duì)金屬離子鎘脅迫的耐受性的同時(shí)也增加了抗氧化相關(guān)基因的表達(dá)[7];在擬南芥中過(guò)表達(dá)茶樹CsHSP17.2，可顯著提高轉(zhuǎn)基因擬南芥在熱激脅迫下的存活率[8];甘蔗sHSP通過(guò)硅脅迫可誘導(dǎo)甘蔗抗旱性提高[9]。sHSP家族能夠行使各種不同的功能，核心在于其具有分子伴侶活性。豌豆中線粒體sHSP22表現(xiàn)為一種保持酶，可與其他蛋白質(zhì)共沉淀，以幫助緩解在熱脅迫適應(yīng)過(guò)程中其他分子伴侶的分解和重折疊[10]。此外，sHSP具有調(diào)節(jié)植物發(fā)育的功能，如VvHSP20s參與了葡萄漿果的發(fā)育[11];而SlHSP17.7和糖可相互作用以調(diào)節(jié)番茄果實(shí)的發(fā)育，并影響番茄的品質(zhì)[12]。因此，植物sHSP是一類具有多樣化功能的小分子蛋白。

巴西橡膠樹又名三葉橡膠，多年生常綠落葉大喬木，原產(chǎn)于拉丁美洲的亞馬遜流域。由于病害、臺(tái)風(fēng)、干旱和低溫等逆境脅迫，使得橡膠樹干膠產(chǎn)量嚴(yán)重下降。因此，研究橡膠樹抗逆機(jī)制具有十分重要的意義。鑒于sHSP基因家族在植物抵抗逆境脅迫響應(yīng)中的重要作用，及其在進(jìn)化和功能上的高度保守，推測(cè)sHSP基因家族可能在橡膠樹抗逆境脅迫中發(fā)揮重要作用。以往有關(guān)植物sHSP家族基因的研究主要集中在擬南芥、水稻、番茄和楊樹等植物中，關(guān)于多年生熱帶植物中的sHSP研究鮮有報(bào)道。目前，在橡膠樹中，sHSP基因家族成員是否響應(yīng)生物或非生物脅迫還未見系統(tǒng)報(bào)道。本研究系統(tǒng)研究橡膠樹sHSP家族中12個(gè)sHSP基因家族成員的生物信息學(xué)和表達(dá)模式，為深入研究sHSP家族基因在橡膠樹抗逆鏡脅迫中的功能奠定基礎(chǔ)。

1 ?材料與方法

1.1 ?材料

巴西橡膠樹（Hevea brasiliensis）‘熱研7-33-97’品系幼樹購(gòu)自于中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院橡膠研究所，乙烯利處理參照Hao等[13]的方法，處理濃度為1%，以不做任何處理的幼樹為對(duì)照，采集處理后0、4、8、24、48、72 h樹皮;本研究中橡膠樹不同組織材料均取自‘熱研7-33-97’健康樹，以上樣品分別設(shè)置至少3個(gè)生物學(xué)重復(fù)。以‘熱研8-79’健康樹、2～3級(jí)和4～5級(jí)死皮樹為材料提取樹皮的RNA，由中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院橡膠研究所李德軍研究員贈(zèng)予。RNA提取試劑盒購(gòu)自百泰克;反轉(zhuǎn)錄試劑盒和熒光定量試劑盒均購(gòu)自天根公司;所用引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成;其余試劑藥品購(gòu)于索萊寶公司;熒光定量PCR儀器為瑞士Roche公司的LightCycler? 96。

1.2 ?方法

1.2.1 ?總RNA提取及cDNA第一鏈合成 ?按照通用植物總RNA提取試劑盒（RP3001）提取橡膠樹不同組織總RNA，對(duì)總RNA進(jìn)行定量和電泳檢測(cè)，樣品cDNA第一鏈合成按照FastKing gDNA Dispelling RT SuperMix（KR118）說(shuō)明書進(jìn)行。

1.2.2 ?橡膠樹sHSP基因家族成員的命名與生物信息學(xué)分析 ?課題組前期獲得橡膠樹轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)[14]，通過(guò)分析獲得12個(gè)橡膠樹sHSP家族基因;通過(guò)ExPASy網(wǎng)站中的在線程序ProtParam分析蛋白質(zhì)的基本性質(zhì);利用NCBI中Conserved Domain Database預(yù)測(cè)蛋白保守結(jié)構(gòu)域;通過(guò)SOPMA在線工具預(yù)測(cè)蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)。

1.2.3 ?橡膠樹sHSP基因家族的表達(dá)譜分析 ?采用羅氏LightCycler? 96的RT-PCR系統(tǒng)對(duì)12個(gè)橡膠樹sHSP基因家族的表達(dá)模式進(jìn)行分析。以分別稀釋10倍的各樣品cDNA為模板，Hbβ-actin為內(nèi)參，使用各sHSP基因特異性引物進(jìn)行RT-PCR分析。反應(yīng)總體系為20 μL，其中包括4.0 μL mix，上下游熒光定量特異性引物（10 μmol/L）各0.6 μL，cDNA模板1.0 μL。PCR反應(yīng)程序：95 ℃預(yù)變性15 min;95 ℃ 10 s，58 ℃ 20 s，72 ℃ 20 s，共40個(gè)循環(huán)。每個(gè)樣品重復(fù)3次，采用2–ΔΔCT法計(jì)算基因的相對(duì)表達(dá)量。使用SPSS 26.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行差異顯著性分析，用Excel 2019軟件制圖。本研究所用的引物序列見表1。

2 ?結(jié)果與分析

2.1 ?sHSP基因家族的命名與生物信息學(xué)分析

通過(guò)ExPASy網(wǎng)站中的在線程序ProtParam分析12個(gè)橡膠樹sHSP蛋白質(zhì)的基本性質(zhì)，并根據(jù)各個(gè)sHSP的蛋白分子量將其標(biāo)準(zhǔn)化命名如表2所示。通過(guò)NCBI中Conserved Domain Database分析，12個(gè)橡膠樹sHSP成員均在蛋白序列C端含有α-晶體蛋白結(jié)構(gòu)域（α-crystallin domain， ACD），且它們?nèi)繉儆讦?晶體-熱激蛋白23類超基因家族特有結(jié)構(gòu)域;SOPMA二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)結(jié)果見表3，12個(gè)sHSP皆由α-螺旋、β-轉(zhuǎn)角、延伸鏈和大量的隨機(jī)卷曲組成。以上2個(gè)特征都是典型的sHSP蛋白結(jié)構(gòu)特征，是sHSP蛋白行使其功能的重要結(jié)構(gòu)特征。

2.2 ?sHSP基因家族在不同組織和葉片不同發(fā)育時(shí)期表達(dá)分析

通過(guò)RT-PCR分析12個(gè)sHSP家族基因的組織表達(dá)模式，sHSP家族基因的表達(dá)量在各組織中的表達(dá)水平存在明顯差異（P<0.05）。除了HbsHSP 22.6在膠乳中高表達(dá)，在樹皮中較低表達(dá)，而在其他組織中超低表達(dá)或幾乎不表達(dá)，其他sHSP成員沒(méi)有組織特異性，大部分sHSP成員在膠乳中表達(dá)量最高，如HbsHSP15.8、HbsHSP16.2、HbsHSP17.3、HbsHSP17.4、HbsHSP17.5b、HbsHSP 18.2、HbsHSP 8.3、HbsHSP22.5和HbsHSP23.9;而HbsHSP17.4則在樹皮中表達(dá)量最高;HbsHSP 17.5a則在樹莖中表達(dá)量最高;HbsHSP25.8則在樹葉中表達(dá)量最高（圖1）。12個(gè)sHSP家族基因在橡膠樹葉片的不同發(fā)育時(shí)期的表達(dá)模式結(jié)果見圖2，每個(gè)小熱激蛋白在橡膠樹葉片的每個(gè)發(fā)育時(shí)期（古銅期、淺綠期、成熟期、衰老期）均有表達(dá)，其中，HbsHSP15.8在成熟期中顯著高表達(dá);HbsHSP16.2、HbsHSP 7.4和HbsHSP18.2在古銅期和淺綠期2個(gè)時(shí)期表達(dá)量最高;HbsHSP23.9和HbsHSP25.8在古銅期和衰老期表達(dá)量最高;HbsHSP17.3、HbsHSP17.5a、HbsHSP18.3和Hbs HSP22.6在橡膠樹葉片古銅期表達(dá)量最高，且HbsHSP17.3和HbsHSP22.6的基因表達(dá)模式類似，表達(dá)量在葉片發(fā)育中從古銅期至衰老期呈現(xiàn)緩慢下調(diào)的趨勢(shì)，而HbsHSP17.5a和HbsHSP18.3則呈現(xiàn)顯著的下降-上升-下降的趨勢(shì);HbsHSP17.5a和HbsHSP22.6基因在橡膠樹葉片不同發(fā)育時(shí)期的表達(dá)量無(wú)明顯變化。

2.3 ?sHSP家族基因在不同死皮等級(jí)橡膠樹中的差異表達(dá)

為了明確橡膠樹12個(gè)sHSP家族基因在不同死皮等級(jí)橡膠樹中的表達(dá)譜。本研究利用RT-PCR系統(tǒng)分析12個(gè)sHSP家族基因在健康、輕度死皮和重度死皮橡膠樹樹皮中的表達(dá)水平。統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果表明，在橡膠樹品種‘熱研8-79’中，HbsHSP 15.8、HbsHSP 17.4、HbsHSP17.5a、HbsHSP17.5b、Hbs SP18.2、HbsHSP18.3、HbsHSP23.9和HbsHSP 25.8在死皮樹中的表達(dá)量與健康樹相比明顯降低，且隨著橡膠樹死皮病嚴(yán)重程度的增加呈現(xiàn)顯著下降趨勢(shì);HbsHSP22.6基因在患輕度死皮病樹皮中的表達(dá)量與健康樹無(wú)明顯差異，而在重度死皮樹中嚴(yán)重下降;相反，HbsHSP16.2、HbsHSP17.3和Hbs HSP22.5基因在罹病樹中的表達(dá)水平與健康樹相比均有不同程度的上調(diào)，其中HbsHSP16.2只有在重度患病樹中顯著上調(diào)，HbsHSP17.3的表達(dá)模式則隨死皮病嚴(yán)重程度的增加呈現(xiàn)顯著上調(diào)的趨勢(shì)，而HbsHSP22.5雖然在患病樹中大量積累，卻與死皮病的嚴(yán)重程度無(wú)明顯相關(guān)（圖3）。橡膠樹死皮病是一種十分復(fù)雜的生物學(xué)過(guò)程，可能由多個(gè)途徑參與調(diào)控，綜上所述，推測(cè)橡膠樹sHSP家族基因可能以正調(diào)控或負(fù)調(diào)控的方式參與橡膠樹多種逆境脅迫或病害等，并在其中發(fā)揮重要作用。

2.4 ?乙烯處理對(duì)橡膠樹sHSP基因家族表達(dá)的影響

通過(guò)RT-PCR分析sHSP基因家族在乙烯處理橡膠樹中的表達(dá)模式，結(jié)果見圖4。HbsHSP15.8的表達(dá)量在1%乙烯處理4 h后明顯下降，8 h時(shí)上升，24 h時(shí)再下降，48 h到72 h逐步上升到原來(lái)的水平;HbsHSP16.2在乙烯處理后表達(dá)量顯著下降，直到48 h開始有緩慢上升的趨勢(shì);HbsHSP17.3則在乙烯處理后，表達(dá)量在4 h和8 h顯著上升，然后在24 h顯著下調(diào)，到72 h時(shí)略有上升;Hbs HSP17.4與HbsHSP17.3總體上相似，不同的是HbsHSP17.4是在8 h時(shí)才開始顯著上升;而HbsHSP17.5a、HbsHSP17.5b、HbsHSP22.5的表達(dá)模式大致為上升-下降-上升趨勢(shì);而HbsHSP 18.2和HbsHSP23.9從4 h開始顯著下調(diào)，HbsHSP 18.2在72 h時(shí)有上調(diào)，HbsHSP23.9則從48 h開始略有上調(diào);HbsHSP22.6在乙烯處理后，顯著下降，隨著處理時(shí)間的推移，未有明顯上升趨勢(shì)，推測(cè)HbsHSP22.6可能受逆境脅迫影響最嚴(yán)重，使得其表達(dá)量急劇下降。HbsHSP18.3和HbsHSP 25.8呈下降-上升-下降趨勢(shì)，區(qū)別是HbsHSP18.3在8 h時(shí)表達(dá)量不僅顯著上升，并且超過(guò)了對(duì)照。上述結(jié)果表明，橡膠樹sHSP基因家族的12個(gè)成員均可能參與乙烯相關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。

3 ?討論

不同植物的同種sHSP在氨基酸組成上具有高度同源性，所有sHSP的C端都有一個(gè)保守的ACD結(jié)構(gòu)域。不同的sHSP分子在結(jié)構(gòu)上呈現(xiàn)復(fù)雜的多元化，其編碼的蛋白主要由3部分組成，包括不同物種間不相同的N端臂、高度保守的ACD結(jié)構(gòu)域和相似的C端延伸結(jié)構(gòu)，同一物種間具有相對(duì)保守性。本研究檢測(cè)了橡膠樹sHSP基因家族中12個(gè)sHSP基因成員的表達(dá)模式，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在12個(gè)sHSP蛋白中均預(yù)測(cè)到ACD結(jié)構(gòu)存在。二級(jí)結(jié)構(gòu)分析顯示，12個(gè)sHSP蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)均具有sHSP蛋白的典型特征，由α-螺旋、β-轉(zhuǎn)角、延伸鏈和大量的隨機(jī)卷曲組成。ACD保守區(qū)域和二級(jí)結(jié)構(gòu)的分布與含量特征對(duì)sHSP蛋白行使功能至關(guān)重要，推測(cè)橡膠樹的這12個(gè)sHSP蛋白具有小熱激蛋白分子伴侶活性，可能參與逆境脅迫。

已有研究結(jié)果表明，除熱激外，sHSP基因家族也在胚胎發(fā)生、種子成熟和萌發(fā)、花粉發(fā)育及果實(shí)成熟等植物生長(zhǎng)發(fā)育的特定時(shí)期表達(dá)[15]。對(duì)高粱sHsp基因家族中的15個(gè)SbsHSP家族基因表達(dá)譜分析發(fā)現(xiàn)，SbsHsp家族基因在根和葉中大量積累[16];在豌豆中，線粒體sHSP2基因在葉子中受熱激或氧化脅迫誘導(dǎo)，但在種子發(fā)育過(guò)程中也強(qiáng)烈積累[10];葉綠體sHSP21蛋白通過(guò)和質(zhì)體類核蛋白pTAC5（plastid transcriptionally active 5）相互作用，構(gòu)成一個(gè)蛋白復(fù)合體，是葉綠體發(fā)育所必需的[17]。與上述研究結(jié)果一致，橡膠樹sHSP家族中的12個(gè)sHSP成員在橡膠樹不同組織和葉片發(fā)育時(shí)期表達(dá)存在差異。大多數(shù)橡膠樹sHSP基因家族成員如Hbs SP15.8、HbsHSP16.2、HbsHSP 17.3、HbsHSP 7.4、HbsHSP17.5b、HbsHSP18.2、HbsHSP18.3、HbsHSP 2.5、HbsHSP22.6和HbsHSP 23.9在膠乳中的表達(dá)量明顯高于其他組織，暗示其在膠乳中具有重要功能。

由于sHSP合成與脅迫響應(yīng)相關(guān)，人們普遍認(rèn)為sHSP的作用在于保護(hù)逆境中的細(xì)胞，減輕逆境脅迫對(duì)植物體的損害。在熱脅迫下，耐熱品系辣椒比熱敏品系辣椒具有更高的CaHSP16.4表達(dá)水平。在耐熱品系中沉默的CaHSP16.4會(huì)導(dǎo)致丙二醛含量的顯著增加和總?cè)~綠素含量的顯著降低，而將其轉(zhuǎn)入擬南芥后，CaHSP16.4過(guò)表達(dá)系的存活率明顯高于野生型，電導(dǎo)滲漏率明顯降低，說(shuō)明CaHSP16.4可幫助植物增強(qiáng)熱脅迫的耐受性[18];而Hsp17.6CⅡ的過(guò)表達(dá)賦予了擬南芥過(guò)氧化氫酶活性和對(duì)非生物脅迫的耐受性[19];前人研究表明，小麥TaHSP20基因家族在小麥脅迫調(diào)控應(yīng)答中的重要性，并提出sHSP可提高小麥耐熱性的育種目標(biāo)[20]。與上述報(bào)道結(jié)果一致，本研究結(jié)果表明，橡膠樹sHSP基因家族表達(dá)受乙烯和死皮病害的脅迫調(diào)控，推測(cè)sHSP基因家族參與橡膠逆境脅迫反應(yīng)并在其中發(fā)揮重要作用。我國(guó)屬非傳統(tǒng)植膠區(qū)，橡膠樹生長(zhǎng)周期內(nèi)不可避免地受到臺(tái)風(fēng)、低溫和季節(jié)性干旱等逆境條件影響。在此之前，研究者就關(guān)注到sHSP基因在橡膠樹抗逆鏡過(guò)程中扮演的重要角色，先后研究了HbsHSP14和HbsHSP17[21]，以及HbsHSP23.8[22]，以上2個(gè)研究都較全面的分析了橡膠樹在不同脅迫逆境下HbsHSP14、HbsHSP17和HbsHSP23.8基因的表達(dá)模式，其結(jié)果也表明HbsHSP14、HbsHSP17和HbsHSP23.8基因的表達(dá)受到高鹽、干旱、低溫、乙烯和茉莉酸處理調(diào)控，揭示了HbsHSP14、HbsHSP17和HbsHSP23.8在橡膠樹逆境脅迫應(yīng)答、乙烯和茉莉酸信號(hào)途徑中可能發(fā)揮作用。乙烯是在橡膠樹中研究較為深入且應(yīng)用較廣的激素，實(shí)踐證明乙烯可作為橡膠樹增產(chǎn)刺激劑，通過(guò)延長(zhǎng)排膠時(shí)間提高橡膠產(chǎn)量。鑒于sHSP基因在進(jìn)化和功能上的保守性，以及橡膠樹sHSP基因家族在逆境處理的表達(dá)模式的相對(duì)一致性，進(jìn)一步揭示了sHSP在抵御橡膠樹逆境脅迫中的重要作用。

參考文獻(xiàn)

[1] Morimoto R I， Santoro M G. Stress-inducible responses and heat shock proteins： new pharmacologic targets for cytoprotection[J]. Nature Biotechnology， 1998， 16（9）： 833-838.

[2] Scharf K D， Siddique M， Vierling E. The expanding family of Arabidopsis thaliana small heat stress proteins and a new family of proteins containing alpha-crystallin domains （Acd proteins）[J]. Cell Stress & Chaperones， 2001， 6（3）： 225-237.

[3] Sarkar N K， Kim Y K， Grover A. Rice sHsp genes： genomic organization and expression profiling under stress and de-velopment[J]. BMC Genomics， 2009， 10（1）： 393.

[4] Waters E R， Aevermann B D， Sanders-Reed Z. Comparative analysis of the small heat shock proteins in three angiosperm genomes identifies new subfamilies and reveals diverse evolutionary patterns[J]. Cell Stress & Chaperones， 2008， 13（2）： 127-142.

[5] Guo M， Liu J H， Lu J P， et al. Genome-wide analysis of the CaHsp20 gene family in pepper： comprehensive sequence and expression profile analysis under heat stress[J]. Frontiers in Plant Science， 2015， 6： 806.

[6] Yu J， Cheng Y， Feng K， et al. Genome-wide identification and expression profiling of tomato Hsp20 gene family in response to biotic and abiotic stresses[J]. Frontiers in Plant Science， 2016， 7： 1215.

[7] Cui Y， Wang M， Yin X， et al. OsMSR3， a small heat shock protein， confers enhanced tolerance to copper stress in Ara-bidopsis thaliana[J]. International Journal of Molecular Sciences， 2019， 20（23）： 6096.

[8] Wang M， Zou Z， Li Q， et al. The CsHSP17.2 molecular chaperone is essential for thermotolerance in camellia sinensis[J]. Scientific Reports， 2017， 7（1）： 1237.

[9] Liang P X， Zhou J T， Huang X， et al. Cloning of small heat-shock protein （sHSP） Gene from sugarcaneand analysis of its expression under drought stress[J]. Agricultural Biotechnology， 2017， 6（2）： 6-10， 14.

[10] Avelange-Macherel M H， Rolland A， Hinault M P， et al. The mitochondrial small heat shock protein HSP22 from pea is a thermosoluble chaperone prone to co-precipitate with un-folding client proteins[J]. International Journal of Molecular Sciences， 2019， 21（1）： 97.

[11] Ji X R， Yu Y H， Ni P Y， et al. Genome-wide identification of small heat-shock protein （HSP20） gene family in grape and expression profile during berry development[J]. BMC Plant Biology， 2019， 19（1）： 433.

[12] Zhang N， Shi J， Zhao H， et al. Activation of small heat shock protein （SlHSP17.7） gene by cell wall invertase inhibitor （SlCIF1） gene involved in sugar metabolism in tomato[J]. Gene， 2018， 679： 90-99.

[13] Hao B Z， Wu J L. Laticifer differentiation in Hevea brasi-liensis： induction by exogenous jasmonic acid and linolenic acid[J]. Annals of Botany， 2000， 85（1）： 37-43.

[14] Xia Z， Xu H， Zhai J， et al. RNA-Seq analysis and de novo transcriptome assembly of Hevea brasiliensis[J]. Plant Mo-lecular Biology， 2011， 77（3）： 299-308.

[15] Waters E R. The evolution， function， structure， and expres-sion of the plant sHSPs[J]. Journal of Experimental Botany， 2013， 64（2）： 391-403.

[16] Marka N， Palakolanu S R， Kumar S， et al. Genome-wide identification and transcriptional profiling of small heat shock protein gene family under diverse abiotic stress conditions in Sorghum bicolor （L.）[J]. International Journal of Biological Macromolecules， 2019， 142： 822-834.

[17] Zhong L， Zhou W， Wang H， et al. Chloroplast small heat shock protein HSP21 interacts with plastid nucleoid protein pTAC5 and is essential for chloroplast development in Ara-bidopsis under heat stress[J]. Plant Cell， 2013， 25（8）： 2925-2943.

[18] Huang L J， Cheng G X， Khan A， et al. CaHSP16.4， a small heat shock protein gene in pepper， is involved in heat and drought tolerance[J]. Protoplasma， 2018， 256： 39-51.

[19] Li G， Li J， Hao R， et al. Activation of catalase activity by a peroxisome-localized small heat shock protein Hsp17.6CII[J]. Journal of Genetics and Genomics， 2017， 44（8）： 395-404.

[20] Muthusamy S K， Dalal M， Chinnusamy V， et al. Ge-nome-wide identification and analysis of biotic and abiotic stress regulation of small heat shock protein （HSP20） family genes in bread wheat[J]. Journal of Plant Physiology， 2017， 211： 100-113.

[21] 郭會(huì)娜. 巴西橡膠樹小熱激蛋白基因克隆、表達(dá)及功能研究[D]. ?？冢?海南大學(xué)， 2014.

[22] 李德軍， 郭會(huì)娜， 鄧 ?治， 等. 巴西橡膠樹sHSP23.8基因的克隆、生物信息學(xué)及表達(dá)分析[J]. 植物生理學(xué)報(bào)， 2015， 51（11）： 1955-1962.

責(zé)任編輯：黃東杰