付慧清 王新顏 吳潔清 李燕 李清 劉迎春

糖化血紅蛋白（haemoglobin A1c，HbA1c）與糖尿病并發(fā)癥密切相關，HbAlc 的控制水平直接影響到糖尿病患者的長期預后［1］。隨著研究的不斷深入，有不少國內外研究報道，細胞免疫異常與T2DM 的發(fā)病、進展有著密切聯(lián)系，而活性維生素D 有類激素作用，參與免疫應答、細胞增殖等多種生理過程，其與糖尿病的相互影響越來越受到重視［2-3］。但關于細胞免疫與血糖水平及胰島分泌功能關系的報道較少［4］。本文分析T2DM 患者HbA1c、25-羥維生素D3（25-hydroxyl vitamin D3，25-OH-D3）水平及T 淋巴細胞亞群與胰島素分泌的相關性，具體報告內容如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年5月至2020年5月本院收治的92例T2DM 患者（觀察組）臨床資料，其中男50 例，女42 例，年齡41～74 歲，平均（55.90±3.21）歲，糖尿病病程為1.5～26年，平均病程為（7.18±1.19）年。納入標準：①符合世界衛(wèi)生組織中關于T2DM 診斷標準［5］：空腹血糖（fasting blood glucose，F(xiàn)BG）均＞7.0 mmol·L-1，葡萄糖耐量試驗（glucose tolerance test，GTT）中予以 口服葡萄糖75 g 2 h 后血糖≥11.1 mmol·L-1；②T2DM 患者入院后均可完成所有實驗檢查及配合完成所有治療；③臨床資料完整且準確者。排除標準：①合并糖尿病酮癥酸中毒、糖尿病腎病及其他嚴重并發(fā)癥者；②近期服用維生素D 類藥物者，接受日光暴曬者；③合并惡性腫瘤者；④合并免疫系統(tǒng)、血液系統(tǒng)及甲狀腺疾病。

同時納入同期于本院接受健康體檢結果正常者60 例作為對照組。其中男32 例，女28 例，年齡40～73 歲，平均（55.29±3.16）歲。兩組在性別、年齡等方面比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），均衡可比。本研究經醫(yī)院倫理委員會批準，受試者及家屬簽署知情同意書。

1.2 方法

收集所有研究對象一般資料，記錄其HbA1c、25-OH-D3、T 淋巴細胞亞群（CD4+、CD8+、CD4+/CD8+）水平及FBG、空腹胰島素（fasting insulin，F(xiàn)INS）、胰島β 細胞功能指數(shù)（index of β-cell function in HOMA，HOMA-β）、胰島素抵抗指數(shù)（insulin resistance index in HOMA，HOMA-IR）、胰島素第一分泌時相峰值倍數(shù)（multiple of peak value of the first insulin secretion phase，PR）情況，并采用葡萄糖負荷后30 min 的凈增胰島素與凈增葡萄糖比值（⊿I30/⊿G30）來對胰島素分泌功能進行直接評估，比較兩組體質量指數(shù)（body mass index，BMI）、血清HbA1c、25-OH-D3、T 淋巴細胞亞群水平及胰島分泌相關指標差異，采用Pearson 相關分析分別觀察T2DM 患者血清HbA1c、25-OH-D3、T 淋巴細胞亞群和胰島分泌的關系。

1.3 觀察指標

1.3.1 HbA1c、25-OH-D3、T 淋巴細胞亞群的檢測

觀察組入院患者入院后次日清晨抽取空腹靜脈血3 mL，對照組體檢者體檢當日清晨抽取空腹靜脈血3 mL，在低溫離心機中離心（3 000 r/min，15 min）后分離血清，將其置于-70℃冰箱中貯存以待檢測。采用高壓液相色譜法（日本Bio Rad 公司）檢測HbA1c，采用酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）檢測25-OH-D3 水平，采用流式細胞儀檢測T 淋巴細胞亞群水平，操作過程嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.3.2 胰島分泌相關指標檢測

所有研究對象入院后進行口服葡萄糖耐受試驗（oral glucose tolerance test，OGTT）及胰島素釋放試驗。采用電化學發(fā)光法測定FINS 水平，采用葡萄糖氧化酶法測定BG、HOMA-β、HOMA-IR、PR 情況，并采用葡萄糖負荷后30 min 的凈增胰島素與凈增葡萄糖比值（⊿I30/⊿IG30）來直接評估胰島素分泌功能。PR=峰值/FINS，HOMA-β= FINS×20/（FPG-3.5），HOMA-IR = FPG X FIN S/22.5。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 22.0 軟件進行統(tǒng)計分析，計量資料以（±s）表示，采用t檢驗；相關性采用Pearson 相關分析；P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組間BMI、HbA1c 及25-OH-D3 水平比較

兩組BMI比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；觀察組HbA1c水平顯著高于對照組，而25-OH-D3水平顯著低于對照組差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 兩組間BMI、HbA1c 及25-OH-D3 水平比較（±s）Table 1 Comparison of BMI，HbA1c and 25-oh-d3 levels between the two groups（±s）

表1 兩組間BMI、HbA1c 及25-OH-D3 水平比較（±s）Table 1 Comparison of BMI，HbA1c and 25-oh-d3 levels between the two groups（±s）

分組對照組觀察組t 值P 值n 60 92--BMI（kg/m2）23.87±1.12 24.09±1.27 1.093 0.276 HbA1c（%）5.87±0.65 8.15±1.16 13.862＜0.001 25-OH-D3（mmol/L）44.76±3.59 23.19±1.17 53.516＜0.001

2.2 兩組間T 淋巴細胞亞群比較水平

觀察組CD4+水平、CD4+/CD8+值顯著低于對照組，而CD8+水平高于對照組差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組間T 淋巴細胞亞群比較水平（±s）Table 2 Comparison of T lymphocyte subsets between the two groups（±s）

表2 兩組間T 淋巴細胞亞群比較水平（±s）Table 2 Comparison of T lymphocyte subsets between the two groups（±s）

組別對照組觀察組t 值P 值n 60 92--CD4+42.68±3.97 33.19±2.07 19.280＜0.001 CD8+24.89±2.47 29.08±4.09 7.128＜0.001 CD4+/CD8+1.81±0.37 1.22±0.25 10.837＜0.001

2.3 兩組胰島分泌相關指標比較

觀察組FBG、FINS、HOMA-β、HOMA-IR 及PR 值顯著高于對照組，而⊿I30/⊿IG30顯著低于對照組差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表3。

2.4 T2DM 患者血清HbA1c 和胰島分泌的相關性分析

T2DM 患者血清HbA1c 水平與FBG 呈正相關，與FINS、HOMA-β、PR 及⊿I30/⊿IG30呈負相關（P＜0.05）。見表4。

2.5 T2DM 患者血清25-OH-D3 和胰島分泌的相關性分析

T2DM 患者血清25-OH-D3 水平與FINS、HOMA-β、PR 及⊿I30/⊿IG30呈正相關，與FBG 及HOMA-IR 呈負相關（P＜0.05）。見表5。

表3 兩組胰島分泌相關指標比較（±s）Table 3 Comparison of related indexes of islet secretion between 2 groups（±s）

表3 兩組胰島分泌相關指標比較（±s）Table 3 Comparison of related indexes of islet secretion between 2 groups（±s）

組別對照組觀察組t 值P 值n 60 92--FBG（mmol/L）5.14±0.32 7.95±1.09 19.411＜0.001 FINS（μg/mL）7.98±1.54 20.13±3.53 25.125＜0.001 HOMA-β 57.97±2.04 72.19±2.89 33.097＜0.001 HOMA-IR 1.59±0.33 7.23±1.21 35.224＜0.001 PR 8.12±0.79 17.90±1.56 44.915＜0.001⊿I30/⊿IG30 30.79±3.13 19.07±1.22 32.384＜0.001

表4 T2DM 患者血清HbA1c 和胰島分泌的相關性分析Table 4 Correlation Analysis of serum HbA1c and islet secretion in T2DM patients

表5 T2DM 患者血清25-OH-D3 和胰島分泌相關性Table 5 Correlation Analysis of serum 25-OH-D3 and islet secretion in T2DM patients

2.6 T2DM 患者T 淋巴細胞亞群和胰島分泌的相關性分析

T2DM 患者CD8+、CD4+/CD8+與FBG、FINS、HOMA-β、HOMA-IR 及PR 均無顯著相關性（P＞0.05）；而CD4+與FBG、HOMA-IR 呈負相關，而與FINS、HOMA-β、PR 及⊿I30/⊿IG30 呈正相關（P＜0.05）。見表6。

表6 T2DM 患者T 淋巴細胞亞群和胰島分泌的相關性Table 6 correlation analysis of T lymphocyte subsets and islet secretion in T2DM patients

3 討論

本組數(shù)據(jù)顯示，HbA1c 水平與FBG 呈正相關，與FINS、HOMA-β、PR 及⊿I30/⊿IG30 呈負相關，提示，在T2DM 患者中，HbA1c 水平的表達與胰島分泌功能具有密切聯(lián)系。相關文獻提出，HbA1c 水平越高提示患者近期血糖水平控制不佳［6］。而HbA1c 與FINS、HOMA-β、PR 及⊿I30/⊿IG30 呈負相關，與HOMA-IR 無相關性，提示隨著HbA1c 水平的升高，患者胰島β 細胞功能已受損，分泌功能出現(xiàn)下降，考慮機制可能為長期高血糖導致一系列氧化應激反應的發(fā)生。故動態(tài)監(jiān)測T2DM 患者HbA1c水平有利于評估患者近期血糖控制及預防。

曾有國外動物實驗研究結果顯示，機體維生素D 水平過于缺乏對胰島素的分泌存在不良影響，從而導致胰島素分泌不足，增加T2DM 發(fā)生風險［7］。本組數(shù)據(jù)結果顯示，F(xiàn)INS、HOMA-β、HOM A-IR 及PR 是反映胰島素分泌的良好指標，而⊿I30/⊿IG30值大小可直接反映胰島功能好壞。經Pearson相關分析提示25-OH-D3 水平的缺乏與胰島分泌功能的相關性。曾有生物學研究證實，25-OH-D 可與胰腺維生素D 受體結合，然后激活β 細胞中L 型鈣離通道，使得胰島素釋放，胰島素受體底物酪氨酸磷酸化，從而啟動胰島素信號的傳導，達到胰島素分泌控制血糖效果［8］。故當機體出現(xiàn)25-OH-D3 缺乏時，可能是導致T2DM 患者胰島分泌功能減弱下降的主要原因，從而引發(fā)血糖升高等現(xiàn)象。

近年來，不少國內外研究報道在T2DM 患者中存在免疫異常［9］。相關研究報道顯示，在內循環(huán)中，CD4+、CD4+/CD8+值的降低是免疫缺陷的重要指征［10］，而本研究結果符合上述研究理論。除此之外，本組Pearson 相關分析提示機體免疫缺陷的產生與胰島分泌功能密切相關。曾有相關報道表明，自身免疫性胰島炎與T2DM 患者胰島β 細胞凋亡及胰島分泌缺陷有著密切聯(lián)系，而胰島炎的發(fā)生可能是機體固有免疫系統(tǒng)激活的結果，在免疫系統(tǒng)的激活中，T 淋巴細胞亞群的失衡扮演著重要角色［11］。李蓉等［12］報道，當血糖升高時，淋巴細胞數(shù)量下降，且長期高血糖會導致免疫缺陷的產生和T 淋巴細胞亞群紊亂，從而加重胰島β 細胞凋亡和胰島分泌功能的障礙。故高血糖、細胞免疫異常及胰島分泌缺陷在T2DM 中呈現(xiàn)惡性循環(huán)，相互影響，但是具體詳細機制還有待加大樣本含量和延長研究時間進一步深入研究。

綜上所述，HbA1c、CD8+在T2DM 患者中表達上升，而25-OH-D3、CD4+及CD4+/CD8+值表達下降，且隨著HbA1c 的升高、CD4+的下降及25-OH-D3的缺乏，胰島素敏感性下降，胰島分泌功能減弱，故聯(lián)合三者檢測有利于評估T2DM 患者胰島分泌功能，在臨床治療上具有一定指導意義。