王 磊 馬 超 張 華 凌春勤

（成都生物制品研究所有限責任公司，四川 成都 610023）

0 前言

非最終滅菌產品的無菌生產需要在相應潔凈度要求的區(qū)域內進行，企業(yè)根據(jù)產品在不同狀態(tài)下的操作、轉運、過濾和配制，直接接觸藥品的包裝材料和器具的清洗、裝配、滅菌、轉運和存放等進行風險評估，劃分生產的風險等級[2]。懸浮粒子檢測系統(tǒng)以及粒子和微生物監(jiān)控點位置、頻率以及采樣高度主要參考相關GMP法規(guī)的要求、基于正式的分析評估研究以及在驗證過程中獲得的數(shù)據(jù)，目的是為了更好地達到無菌生產最真實的現(xiàn)場情況，用收集的數(shù)據(jù)分析影響無菌分裝的因素，控制無菌生產的環(huán)境。測定點位A1受層流和機罩保護高風險區(qū)，生產中人員操作多（灌裝點）。點位A2受層流和機罩保護高風險區(qū)，生產中人員操作少（轉盤點）。點位B1受層流和無機罩保護中風險區(qū)，生產中人員操作多（凍干柜點）。點位B2受層流和無機罩保護中風險區(qū)，生產中人員操作少（高壓存放間）。

1 材料與方法

1.1 設備及材料

BOSCH FLC3080 分裝機，廠家為德國博士公司；2 mL中硼硅玻璃管制注射劑瓶，廠家為寧波正力藥品包裝有限責任公司。13 mm 注射用鹵化丁基膠塞，廠家為盛州醫(yī)藥包裝材料科技（中國）有限責任公司。LYO-10 真空冷凍干燥機，廠家為上海東富龍科技有限公司。Remote 3102 多點在線激光塵埃粒子計數(shù)器，廠家為蘇州蘇凈儀器自控設備有限公司。25S 無油真空泵，廠家為意大利BGS GENERAL 公司。

1.2 塵埃粒子檢測方法

分裝過程可以分3 個階段：準備階段、正式分裝階段和清場階段。其中準備階段又可以細分為前清場、自凈、組裝工具、試運行和抽量等。利用在線粒子實時監(jiān)測系統(tǒng)觀測顆粒粒徑為0.5 μm 數(shù)據(jù)、外接溫濕度、壓差和風速傳感器。收集無菌分裝過程中環(huán)境參數(shù)對潔凈室的可變因素，通過監(jiān)測點的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計與分析。

1.2.1 方法一

通過在線懸浮粒子監(jiān)測，在一定溫度、壓差、濕度和風數(shù)控制下，分析同一批生產點位A1、A2、B1和B2懸浮粒子變動趨勢。統(tǒng)計多批生產同一點位的懸浮粒子變動趨勢，分析原因。

1.2.2 方法二

通過在線懸浮粒子監(jiān)測，在一定溫度、壓差、濕度和風數(shù)控制下，比較多批生產中1 人在機罩內組裝工具和2 人同時在機罩內組裝工具時，在每10 min 內統(tǒng)計懸浮粒子的最大粒子數(shù)，分析懸浮粒子變動趨勢。

1.2.3 方法三

通過在線懸浮粒子監(jiān)測，在一定壓差和風數(shù)控制下，溫度波動，分析懸浮粒子變動趨勢。

1.3 可接受標準

潔凈度級別對懸浮粒子的規(guī)定見表1[3]。

表1 潔凈度級別對懸浮粒子的規(guī)定

根據(jù)法規(guī)可接受標準制定潔凈級別0.5 μm 動態(tài)A 級：警戒線1 750 個/m3，糾偏限度3 500 個/m3。0.5 μm 動態(tài)B級：警戒線175 000 個/m3，糾偏限度350 000 個/m3。

2 結果

2.1 一批多點位和多批同點位懸浮粒子變動趨勢

通過在線懸浮粒子監(jiān)測，在一定溫度、壓差、濕度和風數(shù)控制下，分析同一批生產點位A1、A2、B1和B2懸浮粒子變動趨勢。統(tǒng)計多批生產同一點位A1的懸浮粒子變動趨勢，分析原因。

從圖1 可以看出，同一批次中A 級區(qū)域點位A1處的粒子數(shù)從11：24 開始出現(xiàn)較大波動，最大粒子數(shù)為562 個/m3，此時為前清場階段；13：00 開啟分裝后，粒子數(shù)下降，最大粒子數(shù)為68 個/m3。A2處的粒子數(shù)，從11：22 開始，A2粒子數(shù)開始增加，最大粒子數(shù)46 個/m3；從13：00 開始粒子數(shù)下降，到分裝結束最大粒子數(shù)為12 個/m3，符合動態(tài)A 級標準。從圖2 可以看出，同一批次B 級區(qū)域點位B1處的粒子從13：25 開始波動比較大，呈現(xiàn)出每隔10 min 左右的一個入柜動作規(guī)律波動，都處于警戒線下，其中最大粒子數(shù)在13：25 的開柜門為15 029 個/m3。B2粒子變化從生產開始到結束，都有少量的粒子變化，其中最大的為5 145 個/m3，這與人員出入擾亂氣流和清潔有關，如消毒液擦拭墻壁消毒后，是否用無菌注射用水擦去消毒液產生的顆粒，粒子數(shù)符合動態(tài)B 級標準。

圖1 同一批點位A1 與A2 處0．5 μm 粒子數(shù)

從表2 看出，分析的21 個批次中相同點位粒子數(shù)最大值發(fā)生階段——人員前清場12 批、人員組裝工具7 批、人員處理故障1 批和正常分裝過程1 批，都符合相應級別標準。21個批次中最小值都為0，且平均值都較小，說明操作室的清潔維護較好，最大值相差很大，這與不同人操作有關，也與操作時動作幅度相關。

2.2 組裝工具人數(shù)變化

懸浮粒子變動趨勢通過在線懸浮粒子監(jiān)測，在一定溫度、壓差、濕度和風數(shù)控制下，比較多批生產中1 人在機罩內組裝工具和2 人同時在機罩內組裝工具時，在每10 min 統(tǒng)計懸浮粒子的最大粒子數(shù)，分析懸浮粒子數(shù)變動趨勢。

圖2 同一批次點位B1 與B2 處0．5 μm 粒子數(shù)

從圖3 中可以看出，在機罩內組裝工具時，當人數(shù)增多后，懸浮粒子數(shù)有上升趨勢，同時隨著連續(xù)工作時間增長，粒子數(shù)有一個上升趨勢，2 人操作和1 人操作變化更明顯。當操作時間達到30 min 時，1 人操作的粒子數(shù)為671 個/m3，2人操作時粒子數(shù)為1 069 個/m3。

2.3 多批生產，溫度波動懸浮粒子變動趨勢。

通過在線懸浮粒子監(jiān)測，在一定壓差和風數(shù)控制下，溫度波動19 ℃～24 ℃，規(guī)定溫度范圍為18 ℃～25 ℃，分析懸浮粒子數(shù)變動趨勢。

從圖4 中可以看出，隨著溫度波動，懸浮粒子也有一定的變化。當溫度升高到23 ℃時，懸浮粒子波動加大，當天的最多粒子數(shù)增加到2 106 個/m3，其與溫度升高，人員的操作舒適度減少，人員操作的規(guī)范性變差有關。操作室內在保證產品特性的溫濕度下，還應該盡量滿足人員適應的溫度。

表2 多批次點位A1 處粒子數(shù)

圖3 人數(shù)與粒子數(shù)變化趨勢圖

3 討論

通過在線懸浮粒子的動態(tài)監(jiān)控，排除偶發(fā)事件，例如閃電造成的電力故障、系統(tǒng)損壞等可變因素。根據(jù)產品特性，凍干粉制劑為非最終凍干產品，沒有軋蓋之前都屬于半加塞狀態(tài)，未完全密封狀態(tài)。半成品從攪拌罐里通過蠕動泵經(jīng)過分液器分裝到西林瓶，震蕩盤半加膠塞，整個過程在分裝機保護罩內完成。半加塞制品分盤后轉移到層流車，操作人員轉移入柜，凍干完成后全加塞，整個過程都屬于高風險過程，人員操作較頻繁，需要控制好可控的人為因素。從圖1 與圖2 可以看出，在同一批分裝過程中點位A1、A2、B1和B2粒子波動，主要原因是在分裝準備階段進行了前清場、自凈、組裝工具（分液器、灌注泵、膠塞鎖、膠塞倉等）、試運行和抽量等過程，正式分裝階段轉運凍干制品，與入柜的動作，需要頻繁的人員活動，對氣流方向擾動影響較大，就對粒子數(shù)產生異常影響。入柜處的B1點位懸浮粒子波動最大，為產品特性凍干后為蛋糕狀會產塵、入柜的動作和開關柜門擾亂氣流所導致，因此該處粒子數(shù)產生規(guī)律性的波動。多批同一點位和同一批多點位懸浮粒子波動的原因相同，都是有人員操作時段波動[4]。每一批懸浮粒子的波動范圍有差別，這與不同人的操作關系很大，例如，不同的操作人員的動作幅度不同。圖3 可以看出懸浮粒子數(shù)隨著人員的數(shù)量明顯增多，現(xiàn)潔凈室根據(jù)新風量、換氣次數(shù)、房間高度和面積等計算出潔凈室的最大人數(shù)量，缺少對在關鍵點操作時人數(shù)的控制，以及人數(shù)不同時操作時限的控制。根據(jù)實際操作，建議20 m2左右的灌裝機關鍵點操作，例如組裝工具（分液器、灌注泵、膠塞鎖、膠塞倉等）、試運行和抽量等過程人數(shù)不超過2 個人，連續(xù)時間不超過30 min。除了制定監(jiān)控的警戒糾偏線外來動態(tài)監(jiān)控，還要規(guī)范操作人員的動作和移動，加強人員培訓。隨著季節(jié)的變化，溫差變化大，而空調系統(tǒng)的調解能力至關重要，這些都會造成潔凈室的溫度、濕度有波動。尤其是溫度變化會產生人員操作不適感，人為原因帶入的顆粒也會有所增加。潔凈室需要控管的項目包括溫度、濕度、靜壓差、風速、微粒、浮游菌和沉降菌等。溫度、濕度、靜壓差和風速是預測試指標，只有這些指標都在規(guī)定范圍內，后續(xù)3 個主測試指標的監(jiān)測才有意義[5]。適宜的溫度和濕度不僅可以防止一些微生物的生長，還可以增加人員環(huán)境的舒適度，可以避免因環(huán)境不適感引起的情緒波動而造成操作行為的不規(guī)范，可以通過增加實驗區(qū)域基本參數(shù)（面積、層流風速和人數(shù)）等硬件參數(shù)來提高生產規(guī)范。

圖4 溫度波動粒子變化趨勢圖

無菌藥品的生產必須嚴格按照工藝來設計并依據(jù)經(jīng)驗證的方法及規(guī)程進行，產品的無菌或其他質量特性，決不能只依賴任何形式的最終處理或成品檢驗。嚴格控制生產過程和環(huán)境條件是合格生產的關鍵之一。由于生產人員的技能、所受的培訓及工作態(tài)度是防止微生物和各種微粒污染的關鍵因素，因此應該盡量減少操作人員流動所產生的塵粒、規(guī)范物料傳遞、減少設備保護罩開啟次數(shù)以及機器的產塵，提高設備的密閉程度。嚴格執(zhí)行規(guī)章制度，提高管理和操作人員的思想素質，職業(yè)道德和技術素質。