王順山，楊文文，王志龍，唐乃鑫，祝希輝，郭鵬，賀亞奇，李玉保*

（1.北京華夏興洋生物科技有限公司北京 102600；2.聊城大學(xué)農(nóng)學(xué)院山東聊城25205）

新城疫（ND）、傳染性支氣管炎（IB）、H9 亞型禽流感（H9 AIV）以及傳染性法氏囊炎（IBD）是肉雞常見(jiàn)的病毒性疾病，疫苗免疫是目前有效預(yù)防方案。滅活苗具有安全性好、穩(wěn)定性高、便于運(yùn)輸和保存等優(yōu)勢(shì)，使用不同的佐劑能夠提高滅活苗免疫效果[1,2]。獸用疫苗生產(chǎn)中廣泛使用礦物油佐劑，在免疫應(yīng)答和免疫持續(xù)期方面具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，但也存在疫苗黏度大、不易注射、不易吸收、疫苗副反應(yīng)大等問(wèn)題。北京生泰爾生物科技有限公司申請(qǐng)獲批含有高分子膠和植物提取物的“新型疫苗佐劑”發(fā)明專利[3]，應(yīng)用該發(fā)明專利生產(chǎn)新支流法四聯(lián)滅活疫苗。為客觀評(píng)價(jià)新型疫苗佐劑新支流法四聯(lián)疫苗在肉雞臨床應(yīng)用效果以及1 日齡防疫新支流法對(duì)肉雞后期抗體滴度提升效果，設(shè)計(jì)開(kāi)展了臨床試驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1 疫苗

新支流法四聯(lián)新型佐劑疫苗（批號(hào)2020012），由北京華夏興洋生物科技有限公司提供；新支流法四聯(lián)礦物油佐劑疫苗，采購(gòu)于市場(chǎng)流通商品。

1.2 主要試劑

IBD、IB 抗體檢測(cè)試劑盒，均購(gòu)自上海酶聯(lián)生物科技有限公司；ND、H9 AIV 血凝抑制試驗(yàn)抗原，均購(gòu)自哈爾濱維科生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司。

1.3 試驗(yàn)動(dòng)物

1 日齡雛雞62,400 只，平均分為A、B、C、D 共4 棟。A 棟和B棟為新支流法四聯(lián)新佐劑疫苗試驗(yàn)組，1 日齡頸部皮下注射0.2mL/ 只；C 棟和D 棟為新支流法四聯(lián)礦物油佐劑疫苗對(duì)照組，1日齡頸部皮下注射0.2mL/ 只。試驗(yàn)組與對(duì)照組其余疫苗免疫程序相同，1 日齡新支二聯(lián)弱毒苗噴霧免疫（0.6 羽份/ 只），7 日齡新支二聯(lián)弱毒苗飲水免疫（1.5 羽份/ 只）。

1.4 免疫應(yīng)激

1 日齡注射滅活苗，觀察雛雞進(jìn)入雞舍后，雛雞在養(yǎng)殖籠內(nèi)的分布、飲水、采食情況，記錄數(shù)據(jù)并拍照。

1.5 疫苗吸收

分別在7、14 日齡時(shí)，每組剖殺10 只試驗(yàn)雞只，觀察頸部滅活苗注射部位疫苗吸收情況，并拍照。

1.6 免疫器官指數(shù)

分別在7、14、21、35 日齡，各棟隨機(jī)抽取10 只，控飼3h，稱重、剖殺，稱取胸腺、脾臟、法氏囊等免疫器官重量，計(jì)算免疫器官指數(shù)。

免疫器官指數(shù)=免疫器官鮮重（g）÷體重（kg）

1.7 抗體滴度檢測(cè)

分別在7、14、21、28 和35 日齡及出欄時(shí)，各棟隨機(jī)采血10份，分離血清，利用ELISA 試劑盒、血凝/ 血凝抑制試驗(yàn)檢測(cè)IBD、IB、H9 AIV、ND 抗體滴度。

1.8 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 20 軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析（One-way ANOVA），試驗(yàn)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果

2.1 免疫應(yīng)激

各組雛雞進(jìn)入雞舍后，開(kāi)始飲水時(shí)間、開(kāi)始吃料時(shí)間、早期耗料量以及在養(yǎng)殖籠內(nèi)雛雞分布無(wú)明顯差異（圖1）。

2.2 疫苗吸收情況

于7、14 日齡剖殺各棟雛雞，觀察疫苗吸收情況。試驗(yàn)組疫苗吸收稍優(yōu)于對(duì)照組（圖2）。

2.3 免疫器官指數(shù)

7 日齡時(shí)，試驗(yàn)組A 棟胸腺指數(shù)極顯著高于對(duì)照組C 棟和D棟（P≤0.01）；21 日齡時(shí)，試驗(yàn)組A 棟和B 棟胸腺指數(shù)顯著高于對(duì)照組C 棟和D 棟（P≤0.05）。脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)，試驗(yàn)組與對(duì)照組無(wú)顯著性差異。

表1 試驗(yàn)雞只免疫器官指數(shù)

2.4 抗體水平

21 日齡時(shí)，H9 抗體滴度試驗(yàn)組顯著高于對(duì)照組C 棟（P≤0.05）；ND 抗體滴度，各日齡試驗(yàn)組與對(duì)照組均無(wú)顯著性差異（表2）。IB及IBD 抗體滴度，各日齡試驗(yàn)組與對(duì)照組差異均無(wú)顯著性差異（未附數(shù)據(jù)）。

3 討論與結(jié)論

新支流法四聯(lián)新型疫苗佐劑疫苗免疫效果具有一定的優(yōu)勢(shì)。新型疫苗佐劑含有高分子膠和植物提取物[3]，能夠提高機(jī)體非特異性免疫[4]，在免疫早期能夠促進(jìn)胸腺發(fā)育，提高胸腺指數(shù)；抗體結(jié)果顯示，雖然只有在21 日齡時(shí)，試驗(yàn)組H9 AIV 抗體滴度顯著高于對(duì)照組，但從數(shù)據(jù)可以看出，在21 日齡前，試驗(yàn)組H9 抗體滴度和ND 抗體滴度平均值皆高于對(duì)照組，證明新支流法四聯(lián)新型疫苗佐劑疫苗在肉雞早期具有一定的優(yōu)勢(shì)。

圖1 雛雞分布 A.試驗(yàn)組；B.對(duì)照組

圖3 7 日齡、14 日齡疫苗吸收情況 A7-D7.各組7 日齡；A14-D14.各組14 日齡

表2 試驗(yàn)雞只ND和H9亞型流感HI抗體水平

1 日齡防疫新支流法疫苗，對(duì)肉雞40 日齡前能夠提高較好的保護(hù)。長(zhǎng)期以來(lái)，新流滅活疫苗或新支流滅活疫苗的防疫，多在養(yǎng)殖場(chǎng)7～9 日齡進(jìn)行。隨著養(yǎng)殖規(guī)模擴(kuò)大，在養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行注射免疫存在應(yīng)激大、操作困難、對(duì)生物安全構(gòu)成威脅等不足，因此，希望肉雞防疫孵化場(chǎng)完成，但1 日齡進(jìn)行滅活疫苗防疫對(duì)后期抗體滴度是否滿足需要存在爭(zhēng)議。目前白羽肉雞出欄時(shí)間多在40 日齡左右，通過(guò)1 日齡防疫新支流法四聯(lián)疫苗，可以對(duì)4 種主要的流行病提供較好的抗體保護(hù)。但抗體數(shù)據(jù)顯示，35 日齡后，各組抗體皆有所降低，且從標(biāo)準(zhǔn)差可以看出，抗體離散度明顯擴(kuò)大。因此，飼養(yǎng)周期超過(guò)40 日齡的雞群，建議加強(qiáng)免疫。