陳苗麗

【摘要】目的：通過積雪草苷微球的制備，研究其對創(chuàng)傷修復(fù)的效果及作用機理。方法：規(guī)范建立大鼠皮膚創(chuàng)傷模型，對其應(yīng)用液中干燥法制備的積雪草苷微球進行創(chuàng)傷修復(fù)作用研究。結(jié)果：通過對模型大鼠皮膚創(chuàng)傷使用積雪草苷微球治療研究，模型大鼠在用藥7、12d對應(yīng)的創(chuàng)面愈合率顯著高于空白對照組，有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。組織病理學分析可見模型大鼠皮膚創(chuàng)面使用積雪草苷微球后，膠原蛋白合成量增加，并伴隨有新生的皮膚與附屬器官。結(jié)論：積雪草苷微球可加快創(chuàng)傷修復(fù)，促進組織新生，該研究可為積雪草苷新劑型的開發(fā)和應(yīng)用提供重要參考。

【關(guān)鍵詞】積雪草苷;微球制備;創(chuàng)傷修復(fù);大鼠模型

[中圖分類號]R285.5 [文獻標識碼]A [文章編號]2096-5249（2021）01-0041-02

結(jié)合臨床文獻報道，褥瘡、燒傷、機械性損傷、皮膚感染、營養(yǎng)不良等諸多原因容易造成創(chuàng)面，皮膚創(chuàng)傷不僅增加患者痛苦，如果不能及時修復(fù)，極易發(fā)生感染，導(dǎo)致組織壞死，增加醫(yī)療費用，甚至引起患者死亡[1];此外，嚴重創(chuàng)傷后留下的瘢痕會對外在形象產(chǎn)生影響。因此，快速有效的創(chuàng)面修復(fù)是非常有必要的。作為我國一種傳統(tǒng)中藥，積雪草藥用歷史悠久，早在《神農(nóng)本草經(jīng)》中已有記載：“積雪草主大熱，惡瘡，癰疽，浸淫，赤熛，皮膚赤，身熱”。現(xiàn)代藥理學研究發(fā)現(xiàn)，積雪草主要含有多種α-香樹脂醇型的三萜成分，其中的積雪草苷能夠促進皮膚生長，常用于治療外傷、手術(shù)創(chuàng)傷、燒傷、疤痕疙瘩及硬皮病等。但由于積雪草苷的分子量大，水溶性與脂溶性均較差，外用時不易通過皮膚屏障，導(dǎo)致吸收少，生物利用度較低[2]。微球作為一種新型載藥系統(tǒng)，它的骨架型結(jié)構(gòu)能夠吸附藥物，提高載藥量，進入人體后表面的藥物能迅速釋放并發(fā)揮藥效，而后結(jié)構(gòu)內(nèi)部的藥物以緩釋形式釋放出來，保證藥效發(fā)揮的持久性與穩(wěn)定性[3]。為探討微球作為積雪草苷新型載體的可能性，本文通過制備積雪草苷微球，作用于創(chuàng)傷大鼠模型，觀察和分析其在創(chuàng)面修復(fù)方面的應(yīng)用效果與藥理作用，詳細報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 選擇若干6周齡健康雌性SD大鼠，并將其在（25±1）℃條件下養(yǎng)殖，從中選取24只（體重：200～250g），隨機分為微球中不裝載藥物的空白微球組、積雪草苷溶液組、積雪草苷微球組以及給以生理鹽水的空白對照組四組，每組6只。所有大鼠前期均采用相同的飲用水以及飼料，嚴格按照實驗室要求完成大鼠日常照料與實驗操作。

實驗過程中需要使用的儀器材料包括生物組織包埋機（湖北泰維科技實業(yè)有限公司生產(chǎn)）、顯微鏡（杭州雄發(fā)儀器有限公司）、解剖鏡（上海澤仕光電科技有限公司）、石蠟切片機（上海華駿醫(yī)療器材有限公司）、24孔創(chuàng)傷愈合試驗板（廣州科適特科學儀器有限公司）、純度超過99%的積雪草苷（重慶福騰醫(yī)藥有限公司）等。

1.2 方法 ①積雪草苷微球的制備：積雪草苷微球的組方為聚乙烯醇0.3g，水30mL，積雪草苷100mg，乙基纖維素100mg與10mL二氯甲烷。取積雪草苷100mg加入少量乙醇溶液，攪拌溶解;另取100mg乙基纖維素充分溶解于10mL二氯甲烷中形成內(nèi)相溶液，邊攪拌積雪草苷乙醇溶液邊將其倒人內(nèi)相溶液中;于30mL蒸餾水中加入0.3g乳化劑聚乙烯醇，得到外相。將內(nèi)相溶液緩緩滴入外相溶液中，25℃條件下持續(xù)性攪拌8h，保證二氯甲烷有效揮發(fā)，然后將混合液過濾，并用蒸餾水洗滌，洗滌完成后在25℃條件下進行真空干燥，即可得到積雪草苷微球。②模型大鼠建立與實驗過程：將選擇的24只大鼠用戊巴比妥鈉實施麻醉，藥物用量50mg/kg，麻醉生效后將大鼠背部毛發(fā)剪去，確定出1.0cm×1.0cm范圍，做好標記，剪刀剪出創(chuàng)傷，通過PVP-1溶液消毒，常規(guī)蒸餾水清洗創(chuàng)傷區(qū)域?？瞻孜⑶蚪M使用不裝載藥物的多孔微球，積雪草苷溶液組給予積雪草苷溶液，積雪草苷微球組給予積雪草苷多孔微球，生理鹽水空白對照組使用生理鹽水，含藥組給藥劑量均為0.5mg/次。初次創(chuàng)傷后30min給藥1次，此后創(chuàng)傷區(qū)域每天用藥2次，每天定期對不同大鼠創(chuàng)面恢復(fù)情況予以觀察，評估不同大鼠是否出現(xiàn)躁動不安以及相關(guān)并發(fā)癥等。每天記錄1次大鼠傷口創(chuàng)面情況，通過濾紙拓印出不同模型大鼠創(chuàng)面面積，計算創(chuàng)面愈合率。創(chuàng)面愈合率=（初始創(chuàng)面面積-未愈合創(chuàng)面面積）/初始創(chuàng)面面積×100.00%。觀察到第21d，所有大鼠創(chuàng)面愈合后，將其處死，并從愈合創(chuàng)面區(qū)域獲取病理組織，常規(guī)病理組織標本處理與鏡下觀察，了解創(chuàng)面組織恢復(fù)情況，評估組織結(jié)構(gòu)變化。

1.3 觀察指標 ①不同模型大鼠創(chuàng)傷恢復(fù)情況;②大鼠皮膚組織病理學變化。

1.5 統(tǒng)計學方法 采用統(tǒng)計學軟件SPSS22.0分析相關(guān)數(shù)據(jù)，計量資料x±s，采用t檢驗，P<0.05表示差異存在統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 不同模型大鼠創(chuàng)面恢復(fù)情況 統(tǒng)計不同模型大鼠采取不同措施對應(yīng)的創(chuàng)面愈合情況，積雪草苷微球組在第7d與12d對應(yīng)的創(chuàng)面愈合率明顯高于其它三組模型大鼠，同空白對照組比較存在統(tǒng)計學意義（P<0.05）），詳見表1。

2.2 大鼠皮膚組織病理學變化 所有大鼠模型在21d后創(chuàng)面均完全愈合，通過對不同大鼠模型愈合創(chuàng)面病理組織分析，發(fā)現(xiàn)空白對照組與空白微球組愈合創(chuàng)面內(nèi)的皮膚沒有新生的附屬組織;創(chuàng)面愈合區(qū)域有明顯瘢痕與增生。積雪草苷溶液組與積雪草苷微球組治療的大鼠，其愈合創(chuàng)面有新生組織，而且表面沒有增厚問題。積雪草昔微球組相對于積雪草苷溶液組，皮膚區(qū)域有更多的新生附屬組織，愈合皮膚表面恢復(fù)正常的形態(tài)。電鏡下檢查可見不同于空白對照組與空白微球組對應(yīng)的膠原蛋白以細絲狀為主，積雪草苷溶液組膠原蛋白有少量呈現(xiàn)出束狀，積雪草苷微球組存在更多束狀膠原蛋白，膠原蛋白結(jié)構(gòu)接近于正常組織皮膚結(jié)構(gòu)。

3 討論

創(chuàng)面是正常皮膚組織在外界致傷因子如外科手術(shù)、外力、熱、電流、化學物質(zhì)、低溫以及機體內(nèi)在因素如局部血液供應(yīng)障礙等作用下所導(dǎo)致的損害，常伴有皮膚完整性的破壞以及一定量正常組織的丟失，同時，皮膚的正常功能受損。創(chuàng)面在我國各地區(qū)均有較高的發(fā)病率，且容易反復(fù)難愈。創(chuàng)面愈合一般需要經(jīng)歷凝血期、炎癥期和修復(fù)期較為復(fù)雜的過程，創(chuàng)面愈合時間過長，會對患者基礎(chǔ)疾病的康復(fù)產(chǎn)生較大影響，增加治療費用支出，降低患者生活質(zhì)量，嚴重的創(chuàng)面甚至可引起膿毒癥等并發(fā)癥，危及患者生命。積雪草苷是從積雪草中提取分離出的一種三萜類化合物，具有多種生理活性，可促進膠原蛋白合成、血管再生以及纖維原細胞增殖，適用于創(chuàng)傷、慢性創(chuàng)面以及灼傷等的治療。目前積雪草苷主要的外用劑型為乳膏劑，其穩(wěn)定性較差、油膩感比較重，而且易沽染衣物，造成藥物損失。此外，由于積雪草苷分子量較大，水溶性與脂溶性均較差，外用時不易通過皮膚屏障，釋藥速度緩慢，生物利用度較低[4]。創(chuàng)面修復(fù)病因機制復(fù)雜，創(chuàng)面修復(fù)問題在各類創(chuàng)傷治療中很普遍，且創(chuàng)傷修復(fù)藥物劑型的選用對藥物的療效有著重要的影響，故對創(chuàng)面修復(fù)藥物的新載體進行研究，在制劑學研究和創(chuàng)面治療方面都有著非常重要的意義?，F(xiàn)階段已有一些新劑型、新技術(shù)在積雪草苷的制劑學研究中得到應(yīng)用，如脂質(zhì)體、納米乳劑、包合物、囊泡等等，可解決積雪草苷溶解性差和生物利用度低等問題[5]。而本研究嘗試制備的微球是使藥物分散或吸附在高分子材料中形成骨架型的微小實體，能提高載藥量，改善藥物與皮膚的親和力，延長藥物作用時間，提高生物利用度[6]。

本研究通過制備積雪草苷微球，并對不同大鼠創(chuàng)傷模型應(yīng)用不同創(chuàng)面處理措施，觀察記錄不同時間創(chuàng)面修復(fù)情況并分析后續(xù)病理組織。本次研究顯示采取積雪草苷微球治療的模型大鼠同其它模型大鼠組相比，其在第7d、12d對應(yīng)的創(chuàng)面愈合率更高，提示積雪草苷微球可更好地加快大鼠創(chuàng)面修復(fù)速度。究其原因，是因為微球作為積雪草苷的載體不僅可以保留積雪草苷正常的藥理作用，而且充分發(fā)揮了微球的結(jié)構(gòu)優(yōu)勢：微球?qū)⒎e雪草苷分散或吸附在乙基纖維素中形成骨架型結(jié)構(gòu)，能夠提高載藥量和藥物穩(wěn)定性;積雪草苷微球透皮進入體內(nèi)后，微球表面吸附的積雪草苷迅速擴散，快速修復(fù)創(chuàng)面。現(xiàn)有研究分析指出創(chuàng)傷修復(fù)相關(guān)因子跟積雪草苷濃度存在依賴性[7]，而乙基纖維素作為骨架材料阻滯劑，能使積雪草苷在體內(nèi)持續(xù)釋放，保持一定濃度，所以能促進創(chuàng)面愈合。此外，病理組織分析顯示積雪草苷微球?qū)δz原蛋白結(jié)構(gòu)合成更有利，故積雪草苷微球還能減少創(chuàng)面愈合期間留置的疤痕，使得創(chuàng)面修復(fù)后更加美觀，這與張丹丹等文獻研究結(jié)論高度一致[8]。

本次研究是以大鼠皮膚創(chuàng)傷模型為基礎(chǔ)展開的實驗分析，微球結(jié)構(gòu)優(yōu)勢與積雪草苷藥理作用相結(jié)合，保證了創(chuàng)面修復(fù)速度與修復(fù)效果，證實了積雪草苷微球在創(chuàng)面修復(fù)中的應(yīng)用價值。因本次研究中選取的大鼠創(chuàng)傷模型數(shù)量、創(chuàng)面愈合的評價指標較少，微球制備過程沒有進行實驗參數(shù)優(yōu)選，對創(chuàng)面修復(fù)過程中大鼠體內(nèi)炎癥因子、免疫組化等缺乏研究，同時動物實驗與人體用藥還存在差異性，故后續(xù)還應(yīng)通過多次的實驗研究和大量的數(shù)據(jù)分析，為積雪草苷新劑型的開發(fā)和應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

綜上所述，積雪草苷微球可加快創(chuàng)面修復(fù)，促進組織新生，該研究可為創(chuàng)面臨床治療和積雪草苷劑型開發(fā)提供重要參考。

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